野生和林下种植金线莲的体外抗氧化活性研究

阚永军 赵 立 杨彬君 庞文生 胡 娟,*.福建省中医药研究院，福建 福州 350003；.福建中医药大学，福建 福州 350

野生和林下种植金线莲的体外抗氧化活性研究

阚永军1赵 立1杨彬君2庞文生2胡 娟1,2*
1.福建省中医药研究院，福建 福州 350003；2.福建中医药大学，福建 福州 350122

目的：研究野生和林下种植金线莲的体外抗氧化活性。方法：采用紫外分光光度法，检测野生金线莲和林下种植金线莲水提液及醇提液对DPPH自由基的清除能力。结果：野生金线莲和林下种植金线莲对DPPH自由基具有一定的清除作用，其活性均为水提液优于醇提液；野生金线莲与林下种植金线莲对DPPH自由基的清除活性总体差异不大。结论：林下种植可以作为缓解金线莲资源紧张的重要途径。

金线莲；林下种植；抗氧化活性

金线莲(Anoectochilusroxburghii)为兰科开唇兰属(Anoectochilus)地生型多年生草本植物，是民间常用的珍稀草药，享有“药王”、“金草”等美称。金线莲以全草入药，性平、味甘，具有清热、凉血、解毒、祛风除湿的功效[1]。现代研究发现金线莲具有降低低密度脂蛋白的氧化易感性、清除活性氧自由基等抗氧化活性[2-3]。

金线莲的种子发芽率低，生长繁殖也较为缓慢，近年来掠夺式的开采使金线莲生长的植被遭到破坏，栖息地减少，导致金线莲野生资源锐减，处于濒危状态[4]。《国家重点保护野生植物名录》(第二批)将其列为二级保护植物[5]。金线莲的野生资源亟待保护，为了拯救濒危植物，解决金线莲资源紧张问题。设施栽培、林下种植和盆栽等人工栽培模式被应用于金线莲的种植。林下种植金线莲是以林地资源为依托，利用林木枝叶适当的遮荫效果，形成有利于金线莲生长的环境进行栽培种植[6]。其具有充分利用林地资源空间，不占用粮食用田，单位生产成本较低等特点，林下种植金线莲正日益增多。本研究采用DPPH自由基清除法，以水和乙醇为提取溶剂，对野生和林下种植金线莲进行比较分析，评价抗氧化活性的差异。

1 仪器与材料

1.1 仪器 UV-3200型紫外分光光度计(上海美谱达仪器有限公司)；AE240S电子分析天平(梅特勒-托利多上海有限公司)；L-530低速离心机(湖南湘仪实验室仪开发有限公司)；KQ2200DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限公司)。

1.2 材料 野生金线莲1号购于泉州叶之典生物科技有限公司；野生金线莲2号购于福建虎伯寮生物集团有限公司；林下种植金线莲1号产自仙游金线莲林下种植示范基地，林下种植6个月，购于仙游中青生物科技有限公司；林下种植金线莲2号产自武平梁野山林下种植金线莲基地，林下种植6个月，购于福建金草生物集团股份有限公司；1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)购于美国Sigma公司；L-抗坏血酸(VC)、乙醇均为分析纯，购于国药集团化学试剂有限公司。

2 方法

2.1 金线莲水提液的制备 称取金线莲5g，加水350mL浸泡10min，煎煮5min，过滤取上清液；药渣加水200mL，继续煎煮5min，过滤；第三次加少许水煎煮5min，最后合并滤液至500mL；即得浓度为0.01g/mL的金线莲水提液。

2.2 金线莲醇提液的制备 称取金线莲1g，加入30mL乙醇浸泡30min，使药材与溶剂充分接触，超声提取2h后，离心(4000r/min，10min)，取上清液，药渣重复提取2次，合并上清液，乙醇定容至100mL；即得浓度为0.01g/mL的金线莲醇提液。对醇提液进行浓缩，分别取上述制备的金线莲醇提液50mL，放入蒸发皿中，65℃水浴挥发浓缩，转移至10mL容量瓶中乙醇定容，得到浓度为0.05g/mL的金线莲醇提液。

2.3 清除自由基活性测定 分别取金线莲水提取液0.0、300、600、900μL于具塞试管中，加水至1mL，分别加入DPPH溶液2mL，摇匀，得到金线莲水提液浓度分别为0、1、2、3mg/mL的待测样品溶液，室温下避光静置30min；分别取金线莲醇提液0.0、300、600、900μL于具塞试管中，加无水乙醇至1mL，分别加入DPPH 2mL，摇匀，同样得到金线莲醇提液浓度分别为0、1、2、3mg/mL的待测样品溶液，室温下避光静置30min。用2mL无水乙醇代替2mL DPPH溶液作空白对照，采在517nm波长处测定吸光度，以下式计算清除率。

DPPH清除率计算公式：DPPH清除率=[A0-(A1-A2)]/A0×100%

公式中Ao为空白对照吸光度；A1为样品溶液吸光度；A2为样品对照吸光度。

3 结果

3.1 野生和林下种植金线莲水提液对DPPH自由基清除活性的影响 通过实验对4个金线莲样品水提液的DPPH自由基清除活性进行测定，结果见表1。在实验研究的质量浓度范围内，4种样品对DPPH自由基的清除能力随质量浓度的增大而上升。林下种植金线莲与野生金线莲水提液对DPPH自由基的清除活性相比相差不大，其IC50值均在2～3mg/mL。

表1 野生和林下种植金线莲水提液对DPPH自由基清除活性的影响 (n=4)

3.2 野生和林下种植金线莲醇提液对DPPH自由基清除活性的影响 通过实验对4个金线莲样品醇提液的DPPH自由基清除活性进行测定，结果见表2。在实验研究的质量浓度范围内，4种样品醇提液对DPPH自由基的清除能力随质量浓度的增大而上升。林下种植金线莲醇提液对DPPH自由基的清除活性优于野生金线莲醇提液，但两者IC50值均大于10mg/mL。

表2 野生和林下种植金线莲醇提液对DPPH自由基清除活性的影响 (n=4)

野生金线莲和林下种植金线莲水提液及醇提液均具有一定的DPPH自由基清除活性，且呈现一定的剂量依赖性。野生金线莲和林下种植金线莲水提液对DPPH自由基清除活性的IC50分别为2.28、2.95、2.56和2.15mg/mL；其醇提液分别为16.68、15.05、10.82和11.09mg/mL。野生金线莲和林下种植金线莲对DPPH自由基清除活性均为水提液优于醇提液。

4 讨论

4.1 提取时间的选择 实验对金线莲不同提取时间得水提液的DPPH自由基清除率进行比较，提取时间依次为1、3、5、10、15、20、30、40min。结果发现1～15min内其对DPPH自由基清除率逐渐增加。提取时间为15min时其清除率最高，当金线莲浓度为2mg/mL时，其清除率为42.02%。提取时间超过15min后DPPH自由基清除率逐渐降低。金线莲在长时间的煎煮时，可能使其抗氧化活性成分被破坏。因此，以金线莲作为茶饮时，其煎煮时间不宜过长，以15min为宜。

4.2 实验浓度的选择 实验过程中金线莲水提液浓度在3mg/mL时，其对DPPH自由基清除率已达到50%，而金线莲醇提液的清除率仅为15%左右，对其进行浓缩。当金线莲醇提液浓度在15mg/mL时，其对DPPH自由基清除率才高于50%。因此，金线莲醇提液的实验浓度为1～15mg/mL。由此也可以看出金线莲水提液清除DPPH自由基效果高于醇提液，这也符合金线莲在民间以水煎作为茶饮的食用习惯。并且其水煎液色澄明味清香，受到广大人民的青睐。实验结果为金线莲的资源开发提供一定理论依据。

随着金线莲健康产业的发展，其需求量不断上升。林下种植金线莲可以充分利用林地资源空间，不占用粮食用田，降低单位生产成本。有利于金线莲实现规模化，产业化的发展。该研究发现野生金线莲与林下种植金线莲对DPPH自由基的清除活性总体差异不大。林下种植可以作为缓解金线莲资源紧张的重要途径和手段，同时也有利于其野生资源的保护。实验结果为金线莲林下种植产业的发展提供了一定的依据和基础。

[1]王国强. 全国中草药汇编[M]. 3版.北京：人民卫生出版社, 2014: 594.

[2]张春妮，许国平，汪俊军，等. 金线莲体外抑制LDL氧化的实验研究[J]. 医学研究生学报, 2006(02): 117-120.

[3]林丽清，黄丽英，郑艳洁，等. 金线莲多糖的提取及清除氧自由基作用的研究[J]. 福建中医学院学报, 2006, 16(5): 37-39.

[4]邵清松，周爱存，黄瑜秋，等. 不同移栽条件对金线莲组培苗成活率及生长的影响[J]. 中国中药, 2014(6): 955-958.

[5]洪琳，邵清松，周爱存，等. 金线莲产业现状及可持续发展对策[J]. 中国中药, 2016(3): 553-558.

[6]邵清松，叶申怡，周爱存，等. 金线莲种苗繁育及栽培模式研究现状与展望[J]. 中国中药, 2016(2): 160-166.

Comparison of Antioxidant Activity of Wild and Understory PlantAnoectochilusroxburghii

KAN Yongjun1ZHAO Li1YANG Binjun2PANG Wensheng2HU Juan1,2*

1. FuJian Academy of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350003, China;2. FuJian University of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350122, China;

Objective To research the antioxidant activities in vitro of wild and understory plantAnoectochilusroxburghii. Methods To detect the scavenging effect on DPPH· ability of water and alcohol extraction of wild and understory plantAnoectochilusroxburghiiby UV. Results Both wild and understory plantingAnoectochilusroxburghiihave the ability of scavenging effect on DPPH·. The activity of scavenging effect on DPPH of water extraction is better than alcohol extraction. The scavenging effect on DPPH· ability of wild and understory plantAnoectochilusroxburghiiis semblable. Conclusion Planting mode in forest can be used as an important way to alleviate the shortage ofAnoectochilusroxburghii.

Anoectochilusroxburghii; Understory Plant; Antioxidant Activity

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阚永军(1990-)，男，汉族，硕士，研究实习员，研究方向为中药化学。E-mail：kanyongjun@126.com

胡娟(1962-)，女，土家族，博士，教授，研究方向为中药化学。E-mail：huj@fjtcm.edu.cn

R284

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1007-8517(2017)06-0015-03

2017-01-13 编辑：穆丽华)