探讨Stathmin对卵巢癌细胞增殖、粘附、侵袭、转移的作用研究

张子旸，廖 欣，王启峰

（1.牡丹江医学院附属红旗医院妇产科，黑龙江 牡丹江 157011；2.黑龙江省牡丹江市第二人民医院，黑龙江 牡丹江 157013）

卵巢癌为女性常见的一种生殖系统恶性肿瘤疾病，病死率位居妇科肿瘤之首。由于卵巢组织解剖结构、内分泌功能复杂，患者发病早期的临床症状并不明显，因此在早期诊断和鉴别上具有较大难度[1]。为提高卵巢癌患者的早期确诊率，国内研究学者一直在寻找能够辅卵巢癌早期诊断的生化标志物。Stathmin是一种高度保守的微管解聚蛋白。近年来已有研究发现该蛋白在多种癌细胞中呈高表达。本研究主要探讨Stathmin在卵巢癌细胞增殖、粘附、侵袭、转移中的作用，现进行以下报道。

1 资料与方法

1.1 一般资料

人卵巢癌细胞：从新鲜的卵巢癌病理标本中采集。

主要仪器和试剂：酶联免疫检测仪（购自美国贝克曼库尔特有限公司）、Transwell小室（购自美国Millipore公司）、DMEM培养液（购自Gibco公司）、胰蛋白酶（购自Gibco公司）。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及Stathmin检测

将人卵巢癌细胞株放置于含有10%小牛血清的DMEM培养液中进行常规培养，使用0.25%的胰蛋白酶进行消化，按实验研究所需细胞密度进行接种。采用免疫组织化学法检测癌细胞中Stathmin的表达，以单个视野下10%细胞Stathmin阳性为分界值，判定Stathmin表达高于10%为高表达组，≤10%为低表达组。

1.2.2 增殖能力检测

采用MTT法检测癌细胞的增殖能力，取对数生长周期的细胞，接种于96孔板中，每个孔的细胞浓度为5×103/个，培养24h后，在每个孔中加入150μl DMSO，低速震荡10min，在酶联免疫检测仪490nm波长处，测量各个孔的吸光值，重复测量3次后，计算细胞增值率。

1.2.3 粘附能力检测

采用MTT法检测癌细胞的粘附能力，取对数生长周期的细胞，接种于96孔板中，常规培养24h后，使用PBS小心清洗，将未粘附的细胞去除，在每孔中加入100μl 10%小牛血清，振荡10min，在酶联仪波长490nm处测出各吸光度值，计算细胞黏附率。

1.2.4 侵袭能力检测

采用Transwell小室检测细胞侵袭能力，将细胞接种于直径6cm的小皿中，培养24h后，离心，取上清液，计算5个视野的穿膜细胞平均数，计算细胞侵袭率。

1.2.5 转移能力检测

采用细胞划痕修复试验检测细胞转移能力，取对数生长的细胞，接种于24孔板中，每孔细胞浓度为1×106/个，培养24h后，用100μl微量移液枪头在24孔板内直线划痕，然后更换培养液，去除脱落细胞，在镜下观察，根据愈合程度评价细胞的迁移能力。

1.3 观察指标

比较两组细胞的增殖能力、黏附能力、转移能力和侵袭能力。

1.4 统计学方法

为采用SPSS18.0统计学软件进行分析，进行t 检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

高表达组细胞培养后24h的增殖率、黏附率、转移率、侵袭率较低表达组高，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组细胞培养后24h的增殖率、黏附率、转移率、侵袭率比较（ ±s）

表1 两组细胞培养后24h的增殖率、黏附率、转移率、侵袭率比较（ ±s）

组别 增殖率（%） 黏附率（%） 转移率（%） 侵袭率（%）高表达组 14.15±2.40 0.26±0.08 5.96±1.05 1.29±0.20低表达组 10.90±2.34 0.11±0.03 4.54±0.98 1.58±0.18 t 4.336 7.851 4.421 4.820 P 0.000 0.000 0.000 0.000

3 讨 论

近年来不断有研究学者发现，Stathmin在恶性肿瘤疾病乳腺癌、前列腺癌、肺癌细胞中有较高表达，但尚无较多关于卵巢癌细胞中Stathmin表达特征及临床意义的研究[2]。本研究检测发现，卵巢癌细胞中也有Stathmin表达，为明确Stathmin对卵巢癌细胞增殖、黏附、转移、侵袭能力的影响，本研究根据Stathmin表达水平的高低对培养的人卵巢癌细胞进行分组，比较两组细胞培养24h后的增殖率、黏附率、转移率、侵袭率，结果显示高表达组细胞上述指标检测结果均高于低表达组，表明Stathmin的高表达能够提高卵巢癌细胞的增殖、黏附、转移、侵袭能力。深入分析Stathmin高表达对卵巢癌细胞增殖、黏附、转移、侵袭能力的影响机制可能为为：Stathmin的作用靶点为微管蛋白，其磷酸化水平与微管的平衡状态及细胞周期转换均存在密切关系，当正常细胞进入有丝分裂期时，Stathmin的磷酸化水平开始增强，活性逐渐降低，继而会促进细胞退出有丝分裂期，阻碍正常细胞增殖，促进肿瘤细胞增殖、黏附、侵袭和转移[3]。

综上所述，本研究得出Stathmin高表达能够增强卵巢癌细胞增殖、黏附、转移、侵袭能力，促进患者疾病发展。同时也提示可将该指标作为卵巢癌预后评估的重要指标。但由于现阶段国内外医疗领域关于该方面的课题研究较少，因此本次研究所得结果仍需日后开展更多实践研究进行验证。

参考文献

[1] 刘包欣子,王瑞平,邹 玺,等.常春藤皂苷元对结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响[J].南京中医药大学学报,2013,29(1):44-47.

[2] 韩海英,张培彤,王耀焓,等.川芎嗪联合丹参酮ⅡA对人肺巨细胞癌PG-BE1、PG-LH7细胞增殖、黏附及侵袭的影响[J].中国肿瘤,2016,25(9):728-733.

[3] 戴海萍,朱国华,吴丽丽,等.LPXN过表达对THP-1细胞增殖、粘附和侵袭的影响及其机制研究[J].中国实验血液学杂志,2017,25(3):673-677.