HPLC法测定蒙药材牧马豆不同部位中绿原酸的含量

杜 鹃

(内蒙古自治区中医医院，内蒙古 呼和浩特 010020)

HPLC法测定蒙药材牧马豆不同部位中绿原酸的含量

杜 鹃

(内蒙古自治区中医医院，内蒙古 呼和浩特 010020)

目的：HPLC法测定药材牧马豆不同药用部位中绿原酸的含量，建立药材质量评价方法。方法：HPLC法测定，色谱柱Kromasi -C18 (4.6mm×200mm，5μm)，流动相乙腈-水-磷酸(12:88:0.2)，波长 328nm。结果： HPLC法绿原酸标准曲线浓度在7 ～140 μg·mL-1范围内呈线性关系(r=0.999)，绿原酸平均回收率为105.7%，RSD=2.14%(n=6)，药材不同部位含有绿原酸。结论药材绿原酸含量，花叶0.34%,叶0.41%，茎0.21% ，根0.08%，平均含量0.26%。本方法测定简便快捷，可作为药材质量检测指标之一。

HPLC法；牧马豆；绿原酸

本品系民族医习用药材，蒙古名塔日布根-西给热，为豆科植物牧马豆Thermopsis lanceolata R.Br.，别名披针叶黄花、野决明。全区都有分布，生于草原沙丘、河岸和砾滩。牧马豆全株能入药。具有祛痰镇咳、促进支气管分泌，用于痰喘咳嗽，有小毒。全草浸剂有杀虫、驱肠虫作用。含生物碱0.5%～3%，主要有金雀花碱、鹰爪豆碱、黄酮类化合物，种子含生物碱5%[1]，绿原酸可作为药材质量控制成分。

1 仪器与试剂

1.1 仪器：1100型高效液相色谱仪 (美国安捷伦公司)，TJ-912型色谱分析平台(太极计算机公司)。

1.2 试药：绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为纯化水；牧马豆采自内蒙古和林格尔南天门林场。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件： 色谱柱Kromasi -C18 (4.6mm×200mm，5μm)，流动相乙腈-3mL·L-1磷酸溶液(12︰88)，波长 328nm，进样10μL。在此条件下样品中绿原酸与其它组分有较好的分离，见图1。

2.2 对照品溶液的制备： 精密称取干燥至恒质量的绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，甲醇溶解，配制成1mL含0.28 mg 绿原酸溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备：取本品花、叶、茎、根，粉碎，过100目筛，精密称定80mg，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，称质量，超声处理50min ，放冷，称重，用甲醇补足减失的质量，摇匀， 滤过，取续滤液备用，即得。

2.4 线性关系考察：分别精密量取绿原酸对照品溶液0.25，0.5，1，2，3，4和5mL，置于10mL量瓶内，用甲醇稀释至刻度，按上述色谱条件进行测定。结果，在 7 ～140 μg·mL-1浓度范围内以峰面积(A)与对照品质量浓度(C)进行回归，其线性关系良好。回归方程：A=5452.5+7008.4 C， r=0.999。

2.5 稳定性实验： 取同一份供试品溶液(叶)，分别在0，1，2，4h进样测定，以绿原酸峰面积值计算RSD=0.67%。结果表明，供试品溶液在4h内稳定。

2.6 精密度实验及重复性实验： 吸取同一批供试品溶液(叶)，在上述色谱条件下重复进样6次，测得绿原酸峰面积RSD=0.81%。取同批药材(叶)按2.3项下平行制备6份样品溶液，并按2.1项下测定，绿原酸的平均含量=0.41%， RSD=0.72%。

2.7 加样回收率实验： 取同批药材地上部位已知含量的样品6份，每份取约40mg，精密称定，依次分别加入1mL(每mL含绿原酸0.16 mg)对照品溶液，按供试品溶液的制备操作，测定含量，计算回收率。绿原酸平均回收率为105.7%，RSD=2.14%。

3 样品测定

取牧马豆药材不同部位，按2.3 项下方法制备供试品溶液，按拟定的色谱条件测定绿原酸含量，花0.34%,叶0.41%，茎0.21% ，根0.08%，平均含量0.26%。

4 讨论

我区是牧马豆主要产地,目前尚无含量测定标准。牧马豆含有金雀花碱类化合物，药材其他部位是否含有生物碱未见报道。牧马豆抗氧化与保肝利胆作用与绿原酸药理作用有一定的联系，故绿原酸可以作为牧马豆质量评价标准之一。牧马豆不同药用部位绿原酸含量，花0.34%,叶0.41%，茎0.21% ，根0.08%，平均含量0.26%。本文采用HPLC法测定牧马豆绿原酸含量，方法简便、快速、准确。

[1]内蒙古自治区卫生局.内蒙古中草药[M].呼和浩特：内蒙古人民出版社，1972，298-299.

2016年8月18日收稿

R291.2

B

1006-6810(2017)01-0049-01