中草药抗球散超微粉对柔嫩艾美耳球虫感染鸡免疫机能的影响

米同国，黄占欣，赵 达，孟志敏，米国华

(1.河北工程大学 生命科学与食品工程学院，河北 邯郸056000； 2.石家庄江山动物药业有限公司，河北 石家庄050000)

中草药抗球散超微粉对柔嫩艾美耳球虫感染鸡免疫机能的影响

米同国1，黄占欣1，赵 达2，孟志敏1，米国华2

(1.河北工程大学 生命科学与食品工程学院，河北 邯郸056000； 2.石家庄江山动物药业有限公司，河北 石家庄050000)

为探讨中草药抗球散超微粉防治鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)的作用机制，将150只20日龄供试鸡随机均分为Ⅰ组(感染给中草药组)、Ⅱ组(感染不给药组)和Ⅲ组(不感染不给药组)。Ⅰ组、Ⅱ组人工感染柔嫩艾美耳球虫，Ⅰ组于感染前1 d在饲料中添加1%的中草药抗球散超微粉，分别测定供试鸡血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA含量和外周血T淋巴细胞百分率，试验结束时测定脾脏和法氏囊指数。结果显示：与Ⅱ组相比，Ⅰ组的IgG、IgM、IgA抗体水平整体上呈上升趋势，IgG抗体水平于感染后13、17、21 d分别显著提高10.06%、14.78%、10.63%，IgM抗体水平于感染后13 d显著提高18.18%，IgA抗体水平于感染后17 d显著提高17.95%；Ⅰ组的外周血T淋巴细胞百分率于感染后14、21 d分别显著提高7.20、6.20个百分点；试验结束时，Ⅰ组的脾脏指数和法氏囊指数分别极显著提高46.72%和43.82%。以上结果表明，中草药抗球散超微粉能够促进柔嫩艾美耳球虫感染鸡免疫器官发育、增强机体免疫功能。

鸡； 柔嫩艾美耳球虫； 中草药抗球散超微粉； 免疫球蛋白； T淋巴细胞； 免疫器官

鸡球虫病是危害养鸡业的主要寄生虫病之一，每年给养鸡业造成了巨大的经济损失。目前，防治鸡球虫病主要以化学药物为主，但易产生耐药性和药物残留，有的抗球虫药还可导致动物机体免疫力下降。盲目使用抗球虫药，虽可达到防治鸡球虫病效果，但会由于鸡体免疫力的下降而导致更严重的球虫病暴发[1]。我国中草药资源丰富，其防治疾病具有毒副作用小、无药残、不易产生耐药性等特点。目前认为，中草药抗球虫的作用，一方面是抑制球虫的发育，另一方面是通过调节动物机体的免疫功能，产生非特异性免疫以增强机体抗病力，达到消除病原体及减轻其对组织细胞损伤、恢复机体正常生理功能的目的[2]。近年来，已有许多学者进行了中草药防治鸡球虫病的研究。郑寅[3]研究发现，中草药肠血平颗粒防治鸡球虫病效果良好，能够显著提高患球虫病鸡血清中lgG、lgA、lgM的含量；郭莉等[4]报道，使用复方中草药免疫增强剂后，抗球虫指数和T淋巴细胞的E-玫瑰花环形成率及脾脏指数和法氏囊指数均显著高于攻虫不给药组；王福传等[5]报道，含有黄芪多糖的复方中草药组能够显著提高供试鸡的脾脏质量、法氏囊质量及T、B淋巴细胞相对数；黄占欣等[6]研究发现，中草药抗球散超微粉防治鸡球虫病效果良好。本研究进一步探讨了中草药抗球散超微粉对柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)感染鸡免疫机能的影响，以期为中草药抗球散超微粉的临床应用提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 供试动物 1日龄罗曼褐蛋鸡公雏由江山种禽(平山)有限公司提供，在严格消毒无球虫污染的实验室内饲养，饲喂自配的不含球虫药饲料，鸡只自由采食和饮水。

1.1.2 球虫卵囊 鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊购自上海兽医研究所。试验开始前经鸡体繁殖、复壮，用饱和盐水漂浮法获得供感染试验用的新鲜卵囊，孢子化后计数，于4 ℃保存备用。

1.1.3 供试药品和主要试剂 中草药抗球散超微粉由常山、槟榔、穿心莲、地榆、黄芪、大青叶等组成，并由石家庄江山动物药业有限公司中试生产，采用公司内部超微粉技术制备，各中草药均购自河北省安国市中草药材市场。

免疫球蛋白lgG、IgM、lgA检测试剂盒及2%的α-醋酸萘酯购自上海朗顿生物科技有限公司。

1.2 供试动物分组与处理

参照葛凯等[7]的方法，试验前，连续2 d对供试鸡进行粪便检查，确认无球虫感染后，参照索勋等[1]的方法，将150只20日龄试验鸡随机均分成3组，分别为Ⅰ组(感染给中草药组)、Ⅱ组(感染不给药组)、Ⅲ组(不感染不给药组)。早晨逐只空腹称质量、编号，对体质量差别较大的组别进行局部调整，使各组体质量均匀一致。感染给中草药组按1%的比例在饲料中添加中草药抗球散超微粉。于给药第2天，Ⅰ组和Ⅱ组每只供试鸡口服接种1×105个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊。

1.3 测定指标及方法

1.3.1 血清免疫球蛋白 参照葛凯等[7]的方法，分别于感染前(0 d)和感染后5、9、13、17、21 d，每组随机抽取5只鸡，每只鸡心脏采血2～3 mL，将采集的血液不加抗凝剂，室温静置1 h，2 000 r/min离心10 min，分离血清。将分离的血清置于-20 ℃保存备用，测定血清免疫球蛋白。

1.3.2 外周血T淋巴细胞百分率 参照吴长德等[8]的方法，分别于感染前(0 d)和感染后7、14、21 d，每组随机抽取5只鸡，每只鸡心脏采血2～3 mL，将采集的血液加EDTA抗凝，采用酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)测定法测定外周血T淋巴细胞百分率(每张涂片在油镜下查200个淋巴细胞,计算T淋巴细胞 ANAE阳性百分率)。

1.3.3 免疫器官指数 供试鸡感染后21 d(试验结束时)，称质量后宰杀各组所有供试鸡，摘取脾脏和法氏囊，剔尽脂肪及其他组织，用吸水纸吸干表面液体后称鲜质量，计算免疫器官指数。

脾脏指数=脾脏鲜质量(mg)/体质量(g)；

法氏囊指数=法氏囊鲜质量(mg)/体质量(g)。

1.4 数据统计与分析

采用SPSS软件进行数据统计分析，数据以平均值±标准差表示。

2 结果与分析

2.1 中草药抗球散超微粉对球虫感染鸡血清免疫球蛋白的影响

由表1可知，与Ⅲ组相比，感染5 d后，Ⅰ组和Ⅱ组的血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA含量整体上呈现不同程度的升高。与Ⅱ组相比，Ⅰ组IgG抗体水平于感染后13、17、21 d分别显著提高10.06%、14.78%、10.63%，IgM抗体水平于感染后13 d显著提高18.18%，IgA抗体水平于感染后17 d显著提高17.95%。

表1 中草药抗球散超微粉对球虫感染鸡血清免疫球蛋白的影响 g/L

注：同列数据所标小写字母不同，表示差异显著(P<0.05)，下同。

2.2 中草药抗球散超微粉对球虫感染鸡外周血T淋巴细胞百分率的影响

与Ⅱ组相比，感染后14、21 d，Ⅰ组的外周血T淋巴细胞百分率分别显著提高了7.20、6.20个百分点(表2)，说明中草药抗球散超微粉能够提高鸡外周血中T淋巴细胞数。

表2 中草药抗球散超微粉对球虫感染鸡外周血T淋巴细胞百分率的影响 %

2.3 中草药抗球散超微粉对球虫感染鸡免疫器官指数的影响

试验结束时，与Ⅱ组相比，Ⅰ组的脾脏指数和法氏囊指数分别极显著提高46.72%和43.82%(表3)，说明中草药抗球散超微粉能够促进球虫感染雏鸡免疫器官的发育。

表3 中草药抗球散超微粉对球虫感染鸡免疫器官指数的影响 mg/g

注：同行数据大写字母不同，表示差异极显著(P<0.01)；小写字母不同，表示差异显著(P<0.05)。

3 结论与讨论

动物机体的体液免疫和细胞免疫主要通过成熟的B、T淋巴细胞实现,由B淋巴细胞产生抗体(IgG、IgM、IgA)参与体液免疫，T淋巴细胞是介导机体细胞免疫的重要细胞,成熟的B 、T淋巴细胞主要存在于血液及淋巴结、脾脏等外周免疫器官中, 因此,动物血液中的抗体水平和T淋巴细胞数目分别是衡量机体体液免疫和细胞免疫功能的重要指标[8]。本研究结果显示，雏鸡感染柔嫩艾美耳球虫后，给中草药组雏鸡血清IgG、IgM、IgA含量升高，其中IgG抗体水平升高维持的时间比较长，此结果与葛凯等[7]、刘晶等[9]、郑寅[3]报道的基本一致。表明中草药抗球散超微粉能够增强柔嫩艾美耳球虫感染鸡机体体液免疫应答。本研究发现，感染给中草药组外周血T淋巴细胞百分率显著提高，此结果与吴长德等[8]、李群道等[10]报道的基本一致，表明中草药抗球散超微粉能够增强柔嫩艾美耳球虫感染鸡机体细胞免疫应答。分析其原因，可能是中草药抗球散超微粉组方中不但含有杀虫、驱虫的槟榔、常山等中草药，亦添加了黄芪等提高机体免疫力的中草药，从而提高机体的抗病能力。本研究结果说明，中草药抗球散超微粉能够提高柔嫩艾美耳球虫感染鸡机体免疫功能。

脾脏、法氏囊是禽类最重要的免疫器官，参与全身的体液免疫和细胞免疫。免疫功能的高低取决于免疫器官的发育状态。免疫器官质量的增加是由其自身细胞生长发育和分裂增殖所致，质量增加表明机体的免疫机能提高[10]，而免疫器官指数(免疫器官相对质量)比免疫器官质量更能反映免疫器官的发育状态，免疫器官指数的高低，在一定程度上可反映机体免疫水平或免疫机能状态[11-12]。本研究结果显示，感染给中草药组能够极显著提高脾脏指数和法氏囊指数，此结果与王福传等[5]、郭莉等[4]的报道一致。可见，中草药抗球散超微粉有促进柔嫩艾美耳球虫感染鸡免疫器官发育的作用。其原因可能是中草药抗球散超微粉组方中的抗球虫中草药抑制了球虫的发育繁殖，减少了其对机体的损害，增加了采食量，促进了各器官的生长发育。

[1] 索勋,李国清.鸡球虫病学[M].北京:中国农业大学出版社,1998.

[2] 葛凯,李培英.中草药防治鸡球虫病研究进展[J].动物医学进展,2006,27(2):17-21.

[3] 郑寅.中药肠血平颗粒对鸡球虫病的防治试验[D].杨凌:西北农林科技大学,2013.

[4] 郭莉,顾小龙,秦建华.复方中草药免疫增强剂对鸡堆型艾美耳球虫早熟株免疫的影响研究[J].中国家禽,2006,28(11):21-23.

[5] 王福传,方昌阁,张玉换,等.复方中草药免疫增强剂对蛋鸡免疫效果的研究[J].畜牧兽医学报,2006,37(2):187-192.

[6] 黄占欣,米同国,赵达,等.中药抗球散防治鸡球虫病的

试验[J].中国兽医杂志,2016, 52(3):71-73.

[7] 葛凯,李培英,汪兴生.中草药复方制剂对柔嫩艾美耳球虫感染鸡血液生化指标的影响[J].畜牧与兽医,2009,41(6):73-78.

[8] 吴长德,赵德明,尹荣焕,等.中药煎剂提高肉仔鸡免疫功能的研究[J].中国畜牧兽医,2006,33(6):70-71.

[9] 刘晶,郑世民,胡京友.雏鸡感染毒害艾美耳球虫后的体液免疫[J].中国兽医学报,2006,26(4):373-375.

[10] 李群道,单安山,马得莹,等.女贞子、五味子与寡糖配伍对肉鸡生产性能和免疫功能的影响[J].畜牧兽医学报,2005,36(4):343-347.

[11] 朴香淑,史彬林,李德发,等.保尔福对肉仔鸡生长、微生物菌群及免疫功能的影响[J].中国饲料,2004(11):24-26.

[12] 冯元璋,古飞霞,袁朝霞,等.芦荟多糖对肉鸡免疫器官指数和新城疫疫苗免疫效果的影响[J]. 河南农业大学学报,2011,45(4):132-136.

Effects of Chinese Herb-Kangqiusan Superfine Powder on Immune Functions in Chicks Infected withEimeriatenella

MI Tongguo1,HUANG Zhanxin1,ZHAO Da2,MENG Zhimin1,MI Guohua2

(1.School of Life Science and Food Engineering,Hebei University of Engineering,Handan 056000,China, 2.The Corporation of Shijiazhuang Jiangshan Animal Pharmaceutical,Shijiazhuang 050000,China)

The experiment was designed to investigate the preventive mechanisms of Chinese herb-Kangqiusan superfine powder on chicks infected withEimeriatenella.150 experimental chicks of 20-day-old were randomly divided into groupⅠ(infection group with Chinese herb), groupⅡ(infection group without medicine), group Ⅲ(blank group).The chicks in groupⅠand groupⅡ were infected withEimeriatenella,the chicks in groupⅠ were fed with basal diet with 1% Chinese herb at 1 day before infection.The content of immunoglobulin and the percent of T cells in peripheral blood were detected respectively,and the index of spleen and bursa of fabricius were determined at the end of test.The results showed that,compared with groupⅡ group,the content of IgG,IgM and IgA in chicks of groupⅠincreased as a whole,the content of IgG in chicks of groupⅠincreased by 10.06%,14.78%,10.63% at 13,17,21 days after infection respectively,the content of IgM in chicks of groupⅠincreased by 18.18% at 13 days after infection,the content of IgA in chicks of groupⅠincreased by 17.95% at 17 days after infection;the percent of T cells from peripheral blood in chicks of groupⅠincreased by 7.20 and 6.20 percentage points at 14 and 21 days after infection respectively;the index of spleen and bursa of fabricius in chicks of groupⅠincreased by 46.72% and 43.82% at the end of test respectively.The results indicated that Chinese herb-Kangqiusan superfine powder could promote the development of immune organ and enhance immunity functions in chicks infected withE.tenella.

chicks;E.tenella; Chinese herb-Kangqiusan superfine powder; immunoglobulin; T cells; immune organ

2016-11-15

河北省科技支撑计划项目(131200132A)

米同国(1963-)，男，河北景县人，副教授，本科，主要从事基础、预防和临床兽医学的教学与科研工作。 E-mail:hzx641015@163.com

S859.3

A

1004-3268(2017)05-0144-04