瑞舒伐他汀钙的质量实验研究方法

朱海萍+蓝艳萍

摘 要：建立高效液相色谱（HPLC）法对瑞舒伐他汀钙片的含量、有关物质（包含3个已知杂质：非对映异构体，5-酮酸，内酯）的检测方法。方法：色谱柱为Shimadzu shim-pack VP-ODS（4.6×150mm，4.6μm），柱温为30℃，流速为1.2ml/min，检测波长为254nm，进样量为10μl，样品室温度为6℃，溶剂为乙腈：水=9：1。流动相A为0.2%甲酸（v/v）：乙腈=65：35，流动相B为0.2%甲酸（v/v）：乙腈=10：90。结论：本法简便，合理严谨，精密度好，重复性好，检测灵敏度高，可有效用于瑞舒伐他汀钙含量、有关物质检测。

关键词：瑞舒伐他汀钙片；HPLC；含量；有关物质

瑞舒伐他汀钙片作为第二代他汀类强效降脂药物，在临床上主要用于原发性高胆固醇血症、家族性高胆固醇血症及其他原因引起的脂质紊乱等的治疗[1]。药品中的有关物质是否能得到合理、有效的控制，直接关系到药品质量的可控性和安全性。本实验主要采用HPLC法对瑞舒伐他汀钙片中的含量及有关物质（非对映异构体、5-酮酸和内酯等）进行测定，本法灵敏度高，分离度好，结果准确，适用于瑞舒伐他汀钙片含量及有关物质的测定。

1 色谱条件

流动相A：0.2%甲酸（v/v）：乙腈=65：35。流动相B：0.2%甲酸（v/v）：乙腈=10：90。

柱温：30℃，流速：1.2ml/min，波长：254nm，进样量：10ul，样品室温度：6℃，溶剂：乙腈：水=9：1。

2 溶液的配制

分离度贮备溶液：称取标准品和其非对映异构体各4mg，内酯和5-酮酸各1mg，置100ml的量瓶中，以溶剂溶解，定容，摇匀。

光降解贮备溶液：称取25mg瑞舒伐他汀钙于50ml量瓶中，加水30ml溶解，于15000～25000Lux下照射2小时。

系统适应性溶液：取光降解贮备溶液1ml于10ml量瓶中，用分离度贮备液定容，摇匀。

2.1 系统适应性试验

取系统适应性溶液，注入色谱仪。瑞舒伐他汀钙和其非对映异构体的分离度为1.86，5-酮酸与光降解杂质1的分离度为1.34，光降解杂质1与光降解杂质2的分离度为3.53，光降解杂质2和内酯之间的分离度为3.00。表明该方法中各杂质峰与主峰能够达到完全分离。

3 方法的验证[2，3]

3.1选择性

3.1.1 溶液配制

称取瑞舒伐他汀钙标准品、非对映异构体、内酯、5-酮酸各约37.5mg；空白辅料1约324mg，空白辅料2约648mg置25ml的量瓶中，加溶剂溶解、定容、摇匀，作为选择性溶液。取續滤液测试。分别移取上述选择性溶液各1ml分别置3个25ml量瓶中，再向这3个量瓶中分别加光降解贮备溶液1ml；加光降解贮备溶液1ml和空白辅料1溶液1ml；加光降解贮备溶液1ml和空白辅料2溶液1ml；加溶剂定容、摇匀，作为加样混合溶液1、2、3。

3.1.2 液相分析

依次进溶剂及3.1.1配制溶液，记录色谱图。结果选择性符合验证接受标准的要求。空白辅料在HPLC中不出峰，不干扰瑞舒伐他汀钙含量及有关物质测定。

3.2 精密度

3.2.1 系统精密度

根据2.1系统适应性试验可知系统精密度良好。

3.2.2 方法精密度

取本品数片，精密称定适量（约相当于瑞舒伐他汀36mg），置25ml的量瓶中，用溶剂溶解、定容、摇匀，取续滤液作为供试品溶液。称取六份每份进样两针，计算含量和有关物质。瑞舒伐他汀钙片的6份样品含量的RSD为0.59%，非对映异构体含量的SD为0，5-酮酸含量的SD为0，内酯含量的SD为0.004%。符合实验要求。

3.3 定量限与检测限

以溶剂为空白， 连续进样三次，按信噪比10：1的要求，配制溶液，进样三次，计算定量限。结果瑞舒伐他汀钙为0.2897μg/ml、非对映异构体为0.3463μg/ml、5-酮酸为0.2739μg/ml、内酯为0.1340μg/ml。按信噪比3：1的要求，配制溶液，进样三次，计算检测限。结果瑞舒伐他汀钙为0.0869μg/ml、非对映异构体为0.1039μg/ml、5-酮酸为0.0822μg/ml、内酯为0.0402μg/ml。

3.4 线性关系

线性范围确认：包括定量限、0.05%、0.2%、0.5%，1.0%，2.0%，5.0%，10%，50%，80%，100%，120%，150%。各浓度点（定量限→120%）各取10ul，进样2次。以浓度（μg/ml）为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，r应>0.999，所得回归方程（n=5）及线性范围见表2。结果各样品溶液均有良好的线性关系。

3.5 准确度

精密称取瑞舒伐他汀钙片约360mg三份，分别置25ml量瓶中，在这三份溶液中各加杂质定量限溶液；0.5%杂质溶液；1.0%杂质溶液；最后用溶剂溶解这三份样品、定容、摇匀，取续滤液作为杂质准确度溶液1、2、3。每份样品进样1针，按定量测定方法，计算加入杂质的回收率，结果平均回收率均在95.0-105.0%之间。

3.6 溶液稳定性

取瑞舒伐他汀钙数片，将其样品溶液于6℃下放置4、8、12、24、48小时后，再分别测定它的标示量、非对映异构体含量、5-酮酸含量、内酯含量。标示量从0h96.82%、4h99.72%、8h98.65%、12h98.65%、24h97.68%、48h97.79%，可知标示量相对标准偏差RSD为1.02%，非对映异构体含量在这时间段内均为0.05%，5-酮酸含量均为0.05%，内酯含量均为0.06%，各杂质含量SD均≤0.1%。根据上述结果，瑞舒伐他汀钙片样品溶液在6℃放置48小时稳定。

3.7 方法耐用性

为了研究不同柱温、不同流速、流动相中有机相比例改变对检测影响。要求：分离度符合规定，正常结果和改变条件结果的含量RSD应≤2.0%，杂质SD应≤0.1%。样品溶液配制方法同“3.2.2 方法精密度”。柱温改为30±2℃；流速改为1.2±0.2ml/min；有机相比例改为±2%。每次实验改变一个项目，其余条件不变。结果改变后各相邻峰之间分离度符合实验要求，正常结果和改变条件后结果的含量RSD应≤2.0%，杂质SD应≤0.1%。符合实验要求。

4 结束语

根据上述结果，此方法适用于瑞舒伐他汀钙片含量及有关物质的检测。

参考文献

[1]蔡伟，赵文镜，罗永慧.高效液相色谱法测定瑞舒伐他汀钙及其片剂的含量[J].江苏药学与临床研究，2006，14（2）：97-100

[2]张轶华，郭永辉，韩彬，等.HPLC测定瑞舒伐他汀钙片中的有关物质[J].中国现代应用药学，2015，32（5）：582-585

[3]江莉，史道华，楼永明，等.HPLC法测定瑞舒伐他汀钙片的含量[J].海峡药学，2013，25（7）：74-76.