水产品中孔雀石绿残留检测技术研究进展

熊雅婷+刘薇

北京维德维康生物技术有限公司

随着人们对兽药残留危害的深入了解，水产品中的兽药残留已经成为食品安全领域关注的的热点和焦点。在我国，滥用、乱用限用药物和非法使用禁用药物等现象屡禁不止，这已成为导致我国水产品中兽药残留超标的主要原因，还引发了水产品消费安全问题和食品贸易争端等严重后果。

2017年，中央把食品安全问题放在了重要位置，这体现了国家对食品安全问题的重视。习主席对食品安全工作作出了重要指示，他指出，民以食为天，加强食品安全工作，关系我国13亿多人的身体健康和生命安全，必须抓得紧而又紧。2017年1月，国家食品药品监督管理总局制定了2017年食品安全抽检计划及要求，农业部制定了2017年动物及动物产品兽药残留监控计划，来确保2017年食品安全环境利好。其中，农业部印发的监控计划继续强调了对水产品中氯霉素、孔雀石绿、硝基呋喃代谢物、喹乙醇、激素类等药物及其代谢物检测的重要性，明确规定了限量标准、抽检要求、抽样流程、结果报送、查处及负责单位等要求。

正确认识孔雀石绿

孔雀石绿（Malachite green，MG）是三苯甲烷類工业染料，早在1933年就作为杀菌剂、防腐剂而被广泛用于预防与治疗水产动物养殖中的水霉病、鳃霉病和小瓜虫病等。但是，孔雀石绿及其代谢物隐性孔雀石绿具有潜在“三致”作用，会对人类健康与环境造成危害，因此，美国、加拿大、欧盟等国家和地区都已经明确禁止在水产养殖中使用孔雀石绿。我国于2002年将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》中，并且于2005年制定了孔雀石绿的使用标准，要求孔雀石绿在水产品中的检出值不得超过1μg/kg，这一标准比欧盟2μg/kg的标准还要严格。然而，由于孔雀石绿杀菌、防腐效果好，且价格低廉，所以一些生产者受利益驱动在水产品养殖、运输及贮存中违规使用的情况依然存在。

孔雀石绿检测方法分析

目前，检测孔雀石绿的方法主要有高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）、薄层色谱法（Thin-layer Chromatography，TLC）、分光光度法（ultraviolet-visible spectrophotometry，UV-VIS）、联用检测法、拉曼光谱法（Raman spectra）以及免疫分析法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）等。常规的仪器分析方法虽然准确、灵敏，但其检测时间长、成本高，难以及时、有效地检测出水产品中孔雀石绿含量。随着科学技术的发展，快速检测方法以其便捷、灵敏的优势在现场检测、快速筛查等方面起着非常重要的作用。

1 高效液相色谱法

高效液相色谱法是一种灵敏度较高、可靠性较强的方法，此法重复性好、速度快，可使许多极难分离的待测物得以分析，目前大多数水产品药物残留分析都采用HPLC法。但是，因动物体内成分复杂，并且一些杂质会干扰测定，所以应用HPLC法检测时对于样品预处理必须仔细谨慎，以提高测定准确性和灵敏度。目前，已有许多研究采用HPLC对孔雀石绿进行检测，检出限一般在5～10μg/kg，而且通常需要连接紫外检测器、荧光检测器、二极管阵列检测器等仪器来提升检测精度。因此，高效液相色谱法无法满足大批量快速检测的需求。

2 拉曼光谱法

拉曼光谱法是利用孔雀石绿在拉曼光谱上的特征峰及强度对其进行定性和半定量，这种方法检测速度比较快，一个样品从处理至检测完成只需3min，检测限约为5μg/kg。此外，表面增强拉曼散射技术在定量检测食品中化学污染物上具有更高的准确度，但水产品原料的复杂性限制了检测方法的建立。拉曼光谱技术常需要优化样品前处理方法，实现水产品中目标化合物精确的分离和富集，从而实现痕量化学污染物检测，这限制了拉曼光谱技术在水产品中孔雀石绿残留量检测的广泛普及应用。

3 分光光度法

分光光度法用于孔雀石绿检测时，检测限较高、灵敏度较低、准确性较差，目前尚无报道此方法在复杂基质中的应用，还不能用于水产品中低浓孔雀石绿及其产物的检测。国内学者曾利用分光光度法检测水产品中的孔雀石绿残留，结果显示，检出限为20μg/kg，且测定的最佳pH值为3，前处理过程比较繁琐，需用大量有机溶剂抽提和离心分离，会产生较多的有机废液，并不适用于水产品中孔雀石绿残留的快速大量检测。

4 联用技术

常用的联用技术有气相色谱-质谱联用、液相色谱-质谱联用、薄层色谱-质谱法、毛细管电泳-质谱等，可扬长避短，一般兼分离、定量和定性（分子结构信息）于一体，因而特别适用于确证性分析。但是由于联用技术需要的仪器设备昂贵，所以目前普及率不高。

5 免疫分析法

免疫分析法是近几年发展起来的以抗原与抗体的特异性、可逆性结合反应为基础的新型分析技术。目前使用最普遍的是酶联免疫法（ELISA），具有操作简便、灵敏度高、样品容量大、仪器化程度和分析成本低的优点，是最理想的残留筛选性分析方法之一。有学者分别采用直接竞争酶联免疫法和间接竞争酶联免疫吸附法测定鱼肉、虾肉等水产品中的孔雀石绿，检出限大约为0.37μg/kg，平均回收率大约为87.5%～110.4%，实验结果良好，证实了酶联免疫方法在水产品中孔雀石绿残留量检测的潜在优势。

凭借深厚底蕴，

不断创新检测解决方案

北京维德维康生物技术有限公司（以下简称“维德维康”），是一家专业从事食品安全检测、兽药残留快速检测技术、动物疫病快速诊断技术研究及产品开发的高新技术企业。其在兽药、非法添加剂、毒素、细菌蛋白等化合物的抗原和抗体制备方面具有丰富的理论基础和实践经验，已经建立了完善的食品安全快速检测试剂盒、胶体金免疫试纸条开发以及单克隆抗体和抗原合成、免疫检测技术的研究平台。维德维康坚持自主创新，现已建成了针对小分子化合物的抗体资源库，库容量近千种；并且借助国家兽药安全评价中心的先进技术平台，整合自身的工艺优势，实现了产品的高效产业化，迅速推出了当前市场紧缺的检测产品，为食品安全检测市场提供了更多更优的选择。

维德维康基于扎实深厚的产品研发能力，不断创新，利用酶联免疫技术、胶体金免疫层析技术，自主研发了孔雀石绿酶联免疫试剂盒及孔雀石绿快速检测卡系列产品。孔雀石绿酶联免疫试剂盒基于酶联免疫技术，样本中抗原与酶标板上固定的抗原特异性竞争抗体，通过加入酶标记物，催化底物显色，根据显色程度来判断样本中孔雀石绿的含量，检出限可达到0.5μg/kg，准确度高、灵敏性强，可快速准确实现水产品中孔雀石绿残留的定性、定量检测。

孔雀石绿快速检测卡基于胶体金免疫层析技术，以胶体金为显色媒介，利用抗原抗体特异性结合的原理，根据检测卡显色情况来判断样本中是否残留孔雀石绿，实现定性或半定量检测。经验证，孔雀石绿检测卡在鱼肉、虾肉等水产品中的检出限为2.0μg/kg，具有方便快速灵敏等特点，适合用于大批量样本现场筛查，能够有效为国内水产品质量安全提供技术参考与服务。