高效液相色谱法测定甲基泼尼松龙琥珀酸钠含量

乔晓芳

（河南省食品药品审评查验中心，河南 郑州 450000）

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高效液相色谱法测定甲基泼尼松龙琥珀酸钠含量

乔晓芳

（河南省食品药品审评查验中心，河南 郑州 450000）

目的建立测定甲基泼尼松龙琥珀酸钠含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法 色谱柱采用Thermo C18柱（250 mm×4.0 mm，5 m），流动相为乙腈－3%冰醋酸（29∶71），检测波长为254 nm，柱温为25℃，流速为1.0 mL／min，进样量为20 L。结果甲基泼尼松龙琥珀酸钠质量浓度在0.08～0.12 g／L范围内与峰面积线性关系良好（r＝0.999 5）；平均回收率为99.16%，RSD为0.09%(n＝5)。结论 该方法准确性高，重复性好，可用于甲基泼尼松龙琥珀酸钠原料药的质量控制。

甲基泼尼松龙琥珀酸钠；高效液相色谱法；含量测定

甲基泼尼松龙琥珀酸钠是甲基泼尼松龙琥珀酸钠针的原料药，临床上主要用于抗炎[1－2]、免疫抑制、休克[3－5]和内分泌失调的治疗。易发生配伍禁忌[6]，多见过敏反应[7－10]。在2015年版《中国药典》中未见收载，本研究中按照《中国药典》和人用药品注册技术要求国际协调会（ICH）方法验证的相关规定，建立了测定甲基泼尼松龙琥珀酸钠含量的高效液相色谱（HPLC）法，并进行了方法学验证[11－13]。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC－20A型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；二极管阵列检测器（日本岛津制作所）；AG285型电子天平（十万分之一，瑞士梅特勒－托利多国际股份有限公司）。

1.2 试药

甲基泼尼松龙琥珀酸钠（河南利华制药有限公司，批号分别为20A2015010201，20A20150102，20A20150103）；甲基泼尼松龙琥珀酸钠对照品（Sigma－Aldrich公司，批号为SLBG7439V）；甲基氢化可的松琥珀酸单酯工作标准品(河南利华制药有限公司，批号为53140621）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：Thermo C18柱（250 mm×4.0 mm，5 μm）；流动相：乙腈－3%冰醋酸（29∶71）；检测波长：254 nm；柱温：25℃；流速：1.0 mL／min；进样量：20 μL。

各称取甲基泼尼松龙琥珀酸钠对照品和甲基氢化可的松琥珀酸单酯工作标准品适量，加流动相溶解并定量稀释成每1 mL分别约含甲基泼尼松龙琥珀酸钠对照品和甲基氢化可的松琥珀酸单酯0.02 mg的溶液。取20 μL注入液相色谱仪，测定，记录色谱图。甲基泼尼松龙琥珀酸钠峰和甲基氢化可的松琥珀酸单酯峰的分离度为2.5，符合要求。色谱图见图1。

图1 系统适用性试验高效液相色谱图

2.2 溶液制备

供试品溶液：精密称取甲基泼尼松龙琥珀酸钠适量，加流动相溶解，并定量稀释成每1 mL约含0.1 mg的溶液，即得。

对照品溶液：精密称取甲基泼尼龙琥珀酸钠对照品适量，加流动相溶解，并定量稀释成每1 mL约含0.1 mg的溶液，即得。

2.3 方法学考察

专属性试验：分别取空白溶液（流动相溶液）和供试品溶液各20 μL，分别注入液相色谱仪，空白溶液色谱图中无干扰供试品溶液测试的溶剂峰，详见图2 A。向供试品溶液中加入甲基泼尼松龙后进样，记录色谱图，加入的甲基泼尼松龙不干扰供试品溶液测试，详见图2。

精密度试验：依法制备甲基泼尼松龙琥珀酸钠对照品溶液（约0.1 g／L）1份，取20 μL注入液相色谱仪，重复进样5次，测定。结果的 RSD为0.16%（n＝5），详见表1，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取甲基泼尼松龙琥珀酸钠供试品溶液（约0.1 g／L），常温放置，于0，4，8，12 h时分别进样20 μL，测定甲基泼尼松龙琥珀酸钠峰面积。结果峰面积平均值为2 999 812，RSD为0.65%（n＝4），表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

重复性试验：取样品(批号为20A20150102)适量，依法平行制备甲基泼尼松龙琥珀酸钠供试品溶液（约0.1 g／L）6份，对照品溶液（约0.1 g／L）1份，分别进样20 μL，按外标法以峰面积计算含量。结果甲基泼尼松龙琥珀酸钠含量平均值为98.37%，RSD为0.16%（n＝6），详见表2，表明方法重复性良好。

图2 高效液相色图谱

表1 精密度试验结果（n＝6）

线性关系考察：精密称取甲基泼尼松龙琥珀酸钠对照品适量，用流动相制成质量浓度约0.5 g／L的贮备液，分别精密量取贮备液4.0，4.5，5.0，5.5，6.0 mL置 25 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，即得每1 mL含甲基泼尼松龙琥珀酸钠0.08，0.09，0.10，0.11，0.12 mg的溶液，精密量取20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以质量浓度（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程 Y＝3 0145 893 X－22 250，r＝0.999 5(n＝5）。结果表明,甲基泼尼松龙琥珀酸钠质量浓度在0.08～0.12 g／L范围内与峰面积线性关系良好。

加样回收试验：取已知含量的样品（批号为20A20150102），按80%，100%，120%浓度水平各平行制备3份溶液，分别进样20 μL，按外标法计算回收率。结果见表3。

表2 重复性试验结果（n＝6）

表3 甲基泼尼松龙琥珀酸钠加样回收试验结果（n＝9）

稳定性试验：取甲基泼尼松龙琥珀酸钠供试品溶液（约0.1g／L），常温放置，于0，4，8，12h时分别进样20μL，测定甲基泼尼松龙琥珀酸钠峰面积。结果峰面积平均值为2 999 812，RSD为0.65%（n＝4），表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.4 样品含量测定[14]

取 3批样 品 （批 号 分 别 为 20A2015010201，20A20150102，20A20150103），按2.2项下方法制备供试品溶液和对照品溶液，分别精密吸取上述溶液各20 μL，按拟订色谱条件进样测定，按外标法以峰面积计算含量。结果3批样品的含量分别为98.7%，98.5%，98.2%。

3 讨论

采用2根不同编号的色谱柱，流速相对值变化±20%，改变流动相比例分别为乙腈－3%冰醋酸（305∶695)和乙腈－3%冰醋酸（275∶725），测试甲泼尼龙琥珀酸钠含量。试验结果为个条件下甲基泼尼松龙琥珀酸钠峰和甲基氢化可的松琥珀酸单酯峰的分离度均大于1.5，连续5次对照图谱中甲基泼尼松龙琥珀酸钠峰面积的相对标准偏差均小于2.0%，各条件下的含量的相对标准偏差为0.15%，表明方法耐用性较强。

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Content Determination of M ethylprednisolone Sodium Succinate by HPLC

Qiao Xiaofang
(Henan Food and Drug Evaluation and Inspection Center,Zhengzhou,Henan,China 450000)

Objective To establish an HPLC method for the content determination of methylprednisolone sodium succinate.M ethods The mobile phase consisted of acetonitrile－3% glacial acetic acid(29∶71).The detection wavelength was 254 nm,the column temperature was 25℃ and the flow rate was 1.0 mL／min.The sample volume was 20 μL.Results The linear relation of the concentration and peak area was good in the range of 0.08－0.12 mg／mL(r＝0.999 5).The average percentage of recovery was 99.16%,the RSD was 0.09%(n＝5).Conclusion The method is accurate and reproducible,which can be used for the quality control of methylprednisolone sodium succinate.

methylprednisolone sodium succinate;HPLC;content determination

R927.2

A

1006－4931(2017)05－0029－03

2016－07－13；

2016－11－10)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.05.007

乔晓芳，女，大学本科，主管药师，主要从事食品药品检验工作，（电子信箱）ayqiaoxiaofang＠163.com。