正交试验法优化固本明目颗粒中红花丁香油的包合工艺

姬涛+李怀平+孙绪丁

【摘要】目的：优选胶体磨法制备红花丁香油-β-环糊精包合物的最佳工艺。方法：采用正交试验法，以包合物收率和包合率为评价指标，考察β-CD与水的比例、挥发油与β-CD的比例和包合时间对包合工艺的影响。结果：β-CD 包合红花丁香油的最佳工艺为β-CD与水的比例为1∶4，β-CD与红花丁香油的比例为5∶1，包合时间为30min。结论：胶体磨法包合红花丁香油合理可行。

【关键词】固本明目颗粒；红花丁香挥发油；胶体磨；包合工艺

【中图分类号】R284【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）05-0029-03

固本明目颗粒[1]由红花、诃子、塞北紫堇、丁香、冰片、熊胆粉等6味药材组成，具有调节溃气、平肝健脾、化瘀明目的功效。标准工艺中对红花、丁香进行挥发油提取，再以乙醇溶解喷入制好的颗粒中，制得成品。由于挥发油本身的麻舌、苦涩等不良口感及其易挥发性，使得成品颗粒不仅口感较差，且质量不稳定。而以β-环糊精对挥发油进行包合，可以明显克服上述缺点[2-3]。胶体磨法[4]依靠设备内齿轮的相对运动，使β-CD 和药物的混合物在剪切、挤压等作用下实现包合，具有收率高、工艺条件易控制、设备占用空间小等特点，适合工业化生产。本文即采用胶体磨法，通过正交试验优选了红花丁香油的最佳包合工艺。

1仪器与试药

11仪器JM-50型胶体磨（上海爱思杰制泵有限公司）；101型电热鼓风干燥箱（北京永光明医疗仪器厂）；GC-2014C高效气相色谱仪（日本岛津）；KQ-300B超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

12材料β-环糊精（批号：160301，安徽山河药用辅料股份有限公司）；丁香酚对照品（批号：110725-201414，中国食品药品检定研究院）； 红花丁香挥发油（自制），甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

21包合物制备取红花丁香挥发油加无水乙醇配成体积分数50%的溶液，备用；取适量蒸馏水置胶体磨中，加入一定量的β-环糊精，研磨5min，缓慢加入一定量的50%挥发油的乙醇溶液，再研磨一定时间，静置过夜，滤过，沉淀于50℃干燥，即得。

22考察因素及水平为得到最佳包合工艺，根据预实验结果，对β-环糊精与水的比例、β-环糊精与挥发油比例、包合时间3个因素[5]进行考察，按L9（3）4正交表安排实验，因素水平见表1。

23评价指标

231包合物收率测定收率=包合物重量 ∕（挥发油重量+环糊精重量）×100%。

232包合率测定

2331色谱条件以Waters C18柱（250mm×46mm，5μm）为固定相；以甲醇-水（55∶45）为流动相；检测波长为280nm；流速10mL/min；柱温35℃。

2332标准曲线制备取丁香酚对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成浓度为1mg/mL的溶液。精密量取丁香酚对照品溶液1、2、3、5、7、10mL，分别置10mL棕色容量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，自动进样器进样10μl，记录丁香酚峰的峰面积，以峰面积（A）对对照品浓度（C）进行线性回归，得回归方程为A=10911C+91933，r=09996（n=5），在10008～100080μg浓度范围内线性关系良好。

2333精密度试验将同一浓度对照品溶液进样6次，计算RSD=057%（n=6），表明系统精密度良好。

2334稳定性试验供试品溶液制备完成后，分别于0、1、2、4、6、8h分别进样10μl，计算RSD=081%（n=6），结果表明供试品溶液在8h内测定丁香酚结果稳定。

2335加样回收率试验取已知含量样品适量，置50mL棕色容量瓶中，各精密称取6份，精密加入丁香酚对照溶液（10008mg/mL）15mL，再加入70%乙醇25mL，超声处理20min，超声完毕后，放冷后，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，测定，计算丁香酚对照品的平均加样回收率x=9689%（n=6），RSD=101%（n=6），表明该丁香酚测定方法准确性良好。

2336样品测定取样品适量（约相当于含丁香酚20mg），以30mL石油醚分三次洗涤，洗涤后样品挥干石油醚，置50mL棕色容量瓶中，加70%乙醇溶液40mL，超声处理2min，放冷，加70%乙醇至刻度，摇匀，滤过，得续滤液，精密吸取上述续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定。

注：红花丁香油中丁香酚含量为678%。

233综合评分[6]包合率是衡量挥发油利用率的重要指标，而收率在大生产中也有着重要的意义，因此以包合率为主要指标，权重系数为08；收率为次要指标，权重系数为02。将加权后的值作为综合评分结果。计算公式如下。

综合评分=02×收率∕最大收率×100+08×包合率∕最大包合率×100

24结果以包合收率和包合率为考察指标，从表3方差分析可知，因素A和B对结果有显著性影响（P<005），因素C差异没有统计学意义，结合表2直观分析极差R值，综合考慮，确定最佳包合工艺为A2B2C2，即β-环糊精∶水为1∶4，β-环糊精∶挥发油为5∶1，胶体磨研磨包合30min。

25验证实验按上述优选的最佳工艺，制备包合物，即取红花丁香挥发油20g，加无水乙醇20mL配成体积分数50%的溶液，备用；取蒸馏水400mL置胶体磨中，加入β-环糊精100g，研磨5min，缓慢加入上述挥发油乙醇溶液，再研磨30min，静置过夜，滤过，沉淀于50℃干燥，即得，共制备3批，测定收率分别为8024%、8211%、8381%，包合率分别为7834%、7925%、7719%，表明该工艺稳定可行。

26包合物的验证采用薄层色谱法[7]，取丁香挥发油，加无水乙醇配成2%的溶液；挥发油β-环糊精包合物加无水乙醇配成相同浓度的样品。按薄层色谱法《中国药典》2015年版四部（通则0502）实验，吸取2种样品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（7∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液显色，结果显示，包合物在挥发油相同的位置上没有斑点出现，表明挥发油已与β-环糊精形成包合物。

3结论

试验所用挥发油为实验室自提红花丁香混合油，其中丁香油约占90%，因此以丁香油中丁香酚的含量为依据进行了包合率的计算。同时以HPLC法测定丁香酚的含量，相较与药典[8]中气相色谱法具有操作简便、灵敏度高、准确性好的特点，同时HPLC法不受样品挥发性和热稳定性的影响，分离温度低，各组分容易被分离[9]。本文以优化的胶体磨法制备红花丁香油包合物，产品得率高，包合时间短，且包合过程无需加热，有利于提高产品质量，尤其适合工业化生产。

参考文献

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