hTERC、C-MYC基因检测在新疆维吾尔族妇女宫颈病变筛查中的意义

范玲玲，黄修菊，刘新莲，王丹，祖力比艳·依玛木江，陈志芳

(新疆医科大学第一附属医院妇产科，乌鲁木齐 830054)

hTERC、C-MYC基因检测在新疆维吾尔族妇女宫颈病变筛查中的意义

范玲玲，黄修菊，刘新莲，王丹，祖力比艳·依玛木江，陈志芳

(新疆医科大学第一附属医院妇产科，乌鲁木齐 830054)

目的 探讨人端粒酶RNA(hTERC)及原癌基因C-MYC在新疆维吾尔族妇女宫颈病变筛查中的临床应用价值。方法 收集1 000例新疆维吾尔族妇女的宫颈脱落细胞，均行宫颈液基薄层细胞学(TCT)、高危型HPV筛查(HR-HPV)及荧光原位杂交技术(FISH)检测hTERC和C-MYC基因，任一指标阳性者行阴道镜下活检，分析hTERC、C-MYC基因在细胞学及病理学分级中的表达水平，ROC曲线分析hTERC和C-MYC基因单一和联合检测对高级别宫颈病变(≥CIN Ⅱ期)的临床诊断效能。结果hTERC、C-MYC基因表达水平均随宫颈病变程度的升高而升高。hTERC基因单独诊断宫颈高级别病变(≥CIN Ⅱ期)的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.879，C-MYC基因为0.835，两者联合检测为0.904，且两者联合检测的敏感性(90.77%)、阴性预测值(96.00%)和准确性(90.22%)均高于单一指标检测。结论hTERC、C-MYC基因可作为临床宫颈病变高级别筛查的指标。

宫颈癌；细胞学检查；高危人乳头瘤病毒；人端粒酶RNA基因；C-MYC基因

子宫颈细胞由非典型鳞状上皮细胞向子宫颈癌转变的过程中多伴人染色体端粒酶(hTERC)基因的扩增[1-2]。而C-MYC基因过度表达见于多种肿瘤，其编码的蛋白质在细胞增殖、凋亡、分化及肿瘤形成过程中起着重要的作用[3]。目前已证实，hTERC、C-MYC基因与宫颈病变程度密切相关[4]。新疆维吾尔族妇女宫颈癌高发，且多存在HPV感染[5]。然而目前的研究多集中于对新疆维吾尔族宫颈癌妇女hTERC基因的检测[6]，而对hTERC、C-MYC基因联合检测的报道少见。本研究用荧光原位杂交技术(FISH)对宫颈脱落细胞行hTERC及C-MYC基因检测，旨在探讨其在新疆维吾尔族妇女宫颈病变筛查中的临床价值。

1 材料和方法

1.1 研究对象 收集2013年9月至2015年8月在新疆医科大学第一附属医院妇科门诊就诊的维吾尔族妇女1 000例，年龄37.5±7.5岁，均来自新疆地区。纳入标准：(1)有性生活史者，无子宫切除病史。(2)机会性筛查者或无临床症状要求体检者。排除标准：(1)已做过阴道镜活检者。(2)已经确诊为CIN者。(3)有子宫切除。(4)既往有过宫颈治疗。(5)有盆腔放化疗史者。(6)妊娠期、哺乳期、月经期、急性生殖道炎症者。(7)患有重要疾病无法耐受检查者。于同期本院常规体检人群中随机抽取20例检测正常的新疆维吾尔族妇女宫颈脱落细胞样本(年龄25～64岁)作为FISH对照。本研究经医院医学伦理学委员会批准，患者知情同意。

1.2 主要仪器及试剂 薄层液基细胞学制片仪(广州安必平公司)，BX51荧光摄影显微镜(日本奥林巴斯公司)，光学显微镜(德国蔡司光学仪器公司)，906043．SP型阴道镜(美国Wallach公司)；hTERC基因探针(GLPhTERC/ CSP3 DNA 探针)及C-MYC基因探针(GLPC-MYC探针)、HC-Ⅱ试剂盒(美国Digene公司)。

1.3 TCT及HPV检测 对各研究对象行宫颈液基薄层细胞检测(TCT)及HPV检测，由本院病理科进行。细胞学结果诊断参照2001版国际癌症协会推荐的伯塞斯达系统(The Bethesda system，TBS)[7]，其中未见恶性细胞和上皮内病变细胞(Negative for intraepithelial lesion or malignancy，NILM)组884例，意义不明的非典型鳞状细胞(Atypical squamous cell of undetermined signification，ASCUS)组64例，低度鳞状上皮内病变(Low grade squamous intraepithelial lesion，LSIL)组26例，高度鳞状上皮内病变(High grade squamous intraepithelial lesion，HSIL)组21例，鳞状细胞癌(Squamous cell carcinoma，SCC)组5例。细胞学阳性判定:病变为ASCUS及以上。按照HC-Ⅱ试剂盒说明书操作检测已知的13种HR-HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)及结果判读。

1.5 阴道镜检查与宫颈活检组织学检查 对所有研究对象行TCT、HPV、FISH检测，任一指标阳性者，由本院妇科医师行阴道镜活检，并由病理科医师进行病理组织学检查及盲法阅片。

1.6 统计学分析 用SPSS 17.0统计软件进行。率的比较用卡方检验，采用ROC曲线分析hTERC、C-MYC基因单独及联合检测对高级别宫颈病变(≥CINⅡ期)的诊断效能。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 阴道镜活检标本的hTERC、C-MYC基因检测结果 1 000例样本中，经阴道镜下活检的标本共225例，其中TCT异常116例，HPV感染139例，FISH检测该225例标本，发现hTERC基因异常69例，C-MYC基因异常66例。FISH检测hTERC、C-MYC基因结果见图1。

注：A，C为正常宫颈炎细胞；B，D为宫颈癌细胞。

图1 FISH检测hTERC、C-MYC基因表达(×100)

2.2hTERC、C-MYC基因扩增与细胞学分级的关系 对经阴道镜下活检的225例标本进行分析，结果发现hTERC、C-MYC基因阳性率均随着细胞学病变程度的增加而升高，且组间两两比较结果差异均具有统计学意义(P均<0.05)。见表1。

表1 hTERC、C-MYC基因扩增与细胞学分级的关系[n(%)]

注：与NILM组比较，a，P<0.05；与ASCUS组比较，b，P<0.05；与LSIL组比较，c，P<0.05；与HSIL组比较，d，P<0.05。

2.3hTERC、C-MYC基因的扩增与病理分级的关系 225例标本的病理组织学检测结果表明，hTERC、C-MYC基因阳性率均随着病理结果严重程度的增加而升高，除慢性宫颈炎组与CINⅠ期比较差异无统计学意义外，其余各组间差异均有统计学意义(P均<0.05)。见表2。

表2 hTERC、C-MYC基因与病理分级比较[n(%)]

注：与慢性宫颈炎组比较，a，P<0.05；与CINⅠ组比较，b，P<0.05；与CIN Ⅱ～Ⅲ组比较，c，P<0.05。

2.4hTERC、C-MYC基因在宫颈高级别病变诊断效能的比较 以宫颈高级别病变(≥CIN Ⅱ期)65例患者作为疾病组，160例CINⅠ期及慢性宫颈炎患者为对照组，以敏感性为纵坐标、(1-特异性)为横坐标绘制ROC曲线。ROC曲线见图2。其在宫颈高级别病变中的诊断效能见表3。

图2 hTERC、C-MYC诊断宫颈高级别病变的ROC曲线

指标敏感性(%)特异性(%)阳性预测值(%)阴性预测值(%)准确性(%)AUCROChTERC84.6291.2579.7193.5989.330.879C-MYC76.9290.0075.7690.5786.220.835联合检测90.7790.0078.6796.0090.220.904

3 讨论

越来越多的研究表明，hTERC及C-MYC基因在子宫颈癌的早期诊断中具有重要的作用。Chen等[8]研究结果显示,hTERC、C-MYC基因在不同的细胞学分组(NILM、ASCUS、LSIL、HSIL和SCC)中的差异有统计学意义(P<0.01)，且在不同组织学分组(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC)中hTERC、C-MYC基因在≥CINⅡ期级别病变中的扩增率明显高于≤CINⅠ期病变(P<0.05)。Zhao等[9]研究也显示，hTERC基因扩增阳性率随组织学异常的严重程度增加而升高，且≥CINⅡ期 患者的hTERC基因的阳性扩增率明显高于≤CINⅠ期 患者(P<0.05)。本实验结果显示，在不同细胞学分组中，hTERC及C-MYC基因的扩增阳性率差异有统计学意义(P<0.05)，并且随着细胞学病变程度的加重而升高(P<0.05)，与Chen等[8]研究结果较为一致。本研究还发现在不同病理学分组中，hTERC及C-MYC基因在慢性宫颈炎组与CIN Ⅰ组间表达差异无统计学意义(P>0.05)，但在其余各组间hTERC及C-MYC基因的扩增差异均有统计学意义(P<0.05)，并且随着宫颈上皮内瘤变病变程度的加重而升高，与Zhao等[9]研究结果较为一致。以上结果提示hTERC及C-MYC扩增可能是宫颈病变中的重要因素，并与宫颈癌变的进程密切相关。

本研究结果还表明，hTERC(AUCROC：0.879)和C-MYC(AUCROC：0.835)基因单独和联合(AUCROC：0.904)检测在宫颈高级别病变(≥CIN Ⅱ期)筛查中均具有较高的临床诊断效能。Gao等[10]报道的hTERC和C-MYC基因检测宫颈高级别病变的敏感性(72.3%、76.4%)低于本实验，而特异性(96.3%、96.3%)高于本结果，而单独检测的AUCROC(0.843、0.865)与本实验结果较为接近。存在差异的原因可能与纳入的样本来源存在地域及种族的差异所致。此外，本研究并未对宫颈高级别病变(≥CIN Ⅱ期)患者术后hTERC和C-MYC基因阳性率与病情转归间进行相关性分析，今后将进一步扩大样本量加以验证。

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(本文编辑：许晓蒙)

10.13602/j.cnki.jcls.2017.03.11

范玲玲，1987年生，女，硕士研究生，研究方向为妇科肿瘤及妇科内分泌疾病。

陈志芳，主任医师，副教授，硕士研究生导师，E-mail:troy_ru@sina.com。

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2016-12-27)