肺炎衣原体抗体两种检测方法的对比分析

胡利清，周玉球，吴洪秋

(珠海市妇幼保健院检验科，广东珠海519001)

肺炎衣原体抗体两种检测方法的对比分析

胡利清，周玉球，吴洪秋

(珠海市妇幼保健院检验科，广东珠海519001)

目的探讨酶联免疫法(ELISA)和间接免疫荧光法（IIFA）在肺炎衣原体（CP）感染早期诊断中的应用价值。方法对该院儿科2015年1月至2016年7月疑因CP感染的225例住院患儿采用ELISA和IIFA检测血清CP－IgM结果进行回顾性分析，比较两种方法检测CP－IgM阳性率的差异。结果ELISA和IIFA各检出CP－IgM阳性81例和87例，阳性检出率分别为36．0%和38．7%，ELISA和IIFA阳性检出率差异无统计学意义（P＞0．05）。两法的阳性符合率为94．2%，阴性符合率为96．5%，总符合率为96．9%。同时采用这两种方法检测CP－IgM，则阳性检出率可达到39．1%，敏感性明显高于任一单一方法。结论IIFA检测CP－IgM较ELISA敏感，两者联合检测可以提高CP感染诊断阳性率，酶联免疫法ELISA抗体诊断试剂适合在临床检测中推广应用。

肺炎衣原体；肺炎衣原体抗体；间接免疫荧光法

肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae，CP)是常见社区感染的呼吸道病原体之一[1]，起病缓慢，老人与幼儿较成人易感染该病原体[2]，常引起急性呼吸道感染，尤其是咽炎，鼻窦炎，支气管炎，肺炎，并可诱发支气管哮喘急性发作，临床常表现为咽痛、咳嗽、咳痰、发热等，一般症状较轻。但在有基础疾病的前提下，CP感染不但可以引起非典型肺炎，还可引起神经、循环等肺外其他系统的并发症，可引起虹膜炎、肝炎、心内膜炎、脑膜炎及结节性红斑等。是艾滋病、恶性肿瘤或白血病等疾病发生继发感染的重要病原体之一。另发现在一些疾病如恶性肿瘤、脑血管病、肾功能不全、帕金森综合征、肝硬化及糖尿病患者，均可检出较高阳性率的肺炎衣原体抗体。肺炎衣原体肺部感染的临床症状及X线表现均无特异性，难以和其他非典型肺炎相区别，尤其是肺炎支原体肺炎，故确诊有赖于实验室诊断。CP的实验室检测方法有很多，包括CP直接涂片和培养法、免疫荧光直接抗原检测法、补体结合抗体检测、核酸扩增检测法和血清检测法等，本文回顾性分析225例CP肺炎患儿临床资料，探讨酶联免疫法(ELISA)和间接免疫荧光法（IIFA）检测CP抗体在儿童CP感染早期诊断的价值。现报告如下。

1 资料与方法

1．1一般资料选择2015年1月至2016年7月在本院儿科住院同时做ELISA和IIFA检测的患儿225例，其中男121例，女104例，年龄1～9岁，中位年龄3岁。

1．2方法CP－IgM ELISA和IIFA检测试剂盒分别购自珠海丽珠试剂公司和郑州安图生物工程股份有限公司。采用日本Olympus公司生产的CX22LKDRFS1型荧光显微镜用于IIFA荧光观察。严格按照检测试剂盒说明书进行操作。ELISA每次测试均设置空白、阴性和阳性对照，与待测标本同时检测。IIFA每次测试均设置阴性、阳性对照，与待测标本同时检测。待检血清经过IgG吸附剂处理后，加在包被有CP抗原的生物玻片上，荧光显微镜下观察内部质控孔阴性，阴性对照和阳性对照出现预期结果，以标本中McCoy细胞中的CP出现苹果绿荧光判断为阳性，否则为阴性。

1．3统计学处理采用SPSS 19．0统计软件进行统计处理和分析，计数资料以例数或百分率表示，两种检测方法阳性率的比较采用配对χ2检验，以P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1检测CP－IgM的阳性率采用ELISA和IIFA从上述患儿血清中检出CP－IgM阳性有81例和87例，阳性率分别为36．0%．和38．7%，IIFA检测阳性率高于ELISA，差异无统计学意义（χ2=196．59，P＞0．05）。

2．2 ELISA和IIFA检测的一致性两种方法阳性符合率为94．2%（81/87）、阴性符合率为96．5%（138/143）。IIFA检测呈阳性而ELISA检测呈阴性有7例，IIFA检测呈阴性而ELISA检测呈阳性有1例。同时采用这两种方法检测CP－IgM，则阳性检出率可达到39．1%，敏感性明显高于任一单一方法。见表1。

表1 ELISA与IIFA测定CP-Ig M结果比较（n）

3 讨论

肺炎衣原体(Cp)是一类严格寄生于真核细胞内，具有独特发育周期，并能通过细菌滤器的原核细胞型微生物，经呼吸道传播具有高度传染性。肺炎衣原体无动物储存宿主，感染后潜伏期平均为15～30d左右，肺炎衣原体侵入人体后，主要引起单核巨噬细胞反应，肺泡巨噬细胞作为病原体贮存和传播的载体，造成其在宿主体内的持续感染。有研究表明肺炎衣原体在机体内持续感染可长达9年，甚至在应用抗生素治疗期间仍存在持续感染[3]。CP感染是5岁以上儿童及成人常见呼吸系统感染性疾病的病原体，主要由上呼吸道和肺部感染引起成人及青少年的非典型肺炎，亦可引起咽炎、喉炎、支气管炎，以及百日咳样疾病与反应性关节炎[4，5]等。据统计是引起感染性性肺炎的第三位主要病原体[6]。在呼吸系统感染的患者中检测血清肺炎衣原体抗体阳性率为22．8%～55．8%，远远高于其他国家的统计数据[7]。研究表明，随着患者年龄增长CP的感染率也会随之升高，老年人最高可达到75%[8]。CP感染分布呈双峰型，临床上小儿患者感染后症状和体征较轻，而老年感染患者合并慢性阻塞性肺疾病，心、脑、肾等神经循环系统疾病，代谢病等基础疾病时，临床症状表现则比较严重。有研究表明．肺炎衣原体感染还与慢性阻塞性肺疾病(COPD)[9]，肺气肿[10]以及动脉粥样硬化相关[11，12]。

近些年来，CP感染的发病率逐渐增高，其感染初期症状不典型，临床上常规用药治疗效果欠佳，因此，早期诊断、早期治疗对减少患者并发症、降低病人住院费用有重要意义。目前实验室对肺炎衣原体的检测方法主要有三种，一种是病原学检查，是确诊本病的可靠方法，但临床诊断不常用，如直接涂片后用Giemsa或直接培养法检测出肺炎衣原体包涵体及原体。二是免疫学检查以荧光或酶标记的特异性单克隆抗体直接检测标本中肺炎衣原体抗原或抗体，主要包括ELISA法和间接免疫荧光法。三是PCR法检测肺炎衣原体DNA，其敏感性和特异性更高，且可和其他种衣原体区分，但这种方法对实验室环境有特殊要求，实验室还必须配备有高端设备和高级技术人员，且PCR方法假阳性率难以控制，因此一般实验室难以开展[13]。而通过上面的试验研究和分析表明，ELISA法适用于检测CP感染患者血清中特异性抗体的变化，其敏感度好，特异性强，方法操作简便，价格低廉且与间接免疫荧光法IIFA检测结果比较，阳性率无显著差异(P＞0．05)，适合临床大批量筛查和流行病学调查，在普通实验室均可开展[14]。IIFA灵敏度、特异性高，但也存在一定的局限性，如需要非常有经验的检验人员进行试验和分析、待测标本保存时间有限、试剂有效期较短、需要荧光显微镜且试剂价格不菲等。CP检测有助于指导临床医师判断患者的病情发展程度，为临床制定有效的诊疗方案提供科学依据。

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R446．62，R374+．3

A

1674－1129(2017)02－0269－02

10．3969/j.issn.1674－1129．2017．02．045

2016-10-20；

2017-03-10)