系统性红斑狼疮患者血清IL-17、IL-23、HMGB1表达水平及临床意义

陶鹏辉

(信阳市中心医院检验科，河南信阳464000)

系统性红斑狼疮患者血清IL-17、IL-23、HMGB1表达水平及临床意义

陶鹏辉

(信阳市中心医院检验科，河南信阳464000)

目的探讨系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus，SLE)患者血清中白介素17(Interleukin－17，IL－17)、白介素23(Interleukin－23，IL－23)、高迁移率蛋白1(High mobility group box－1，HMGB1)的表达水平及临床意义。方法选取我院风湿免疫科收治的67例SLE患者为本研究观察组，同期选取22例体检健康志愿者为对照组，采用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测所有受试者血清中IL－17、IL－23、HMGB1表达水平，分析三者表达与SLE临床指标之间的关系。结果观察组患者血清中IL－17、IL－23以及HMGB1水平均高于对照组，差异均显著，且具有统计学意义(P＜0．05)，其中SLE活动组中IL－17、IL－23以及HMGB1水平均高于稳定组(P＜0．05)，肾炎组HMGB1水平明显高于非肾炎组(P＜0．05)，肾炎组IL－17、IL－23水平与非肾炎组比较无显著差异(P＞0．05)；观察组IL－17水平与抗ds－DNA抗体水平、抗Sm抗体水平、补体C3、C4、IgM、IgG、CRP均无显著相关性(P＞0．05)，与SLEDAI呈正相关(r=0．703，P＜0．05)；IL－23水平与抗ds－DNA抗体水平、抗Sm抗体水平均无显著相关性(P＞0．05)，与SLEDAI、IgM、IgG、CRP呈正相关(r=0．621、0．317、0．432，P＜0．05)，与补体C3、C4呈负性相关(r=－0．456、－0．378，P＜0．05)；HMGB1水平与抗Sm抗体水平、补体C4、CRP均无相关性，与SLEDAI、抗ds－DNA抗体水平、IgM、IgG呈正相关(r=0．000，P＜0．05)，与补体C3呈负性相关(r=0．000，P＜0．05)。结论血清IL－17、IL－23及HMGB1在SLE患者中显著高表达，且与疾病活动性密切相关，这些指标可能对揭示SLE发病机制或控制病情有一定的作用。

系统性红斑狼疮；白介素17；白介素23；高迁移率蛋白1

SLE是一种以机体多器官功能损伤及广泛的免疫异常为特征的典型自身免疫性疾病[1]。SLE发病机制复杂，目前临床仍然缺乏特效治疗性药物。糖皮质激素及免疫抑制剂是目前控制SLE病情应用最为广泛的治疗药物[2]，但长期大量使用往往导致多数病人发生严重毒副反应，最终导致病情反复，预后不良。进一步开展SLE基础及临床研究，对于阐明SLE发病机制以及开发新型治疗性药物具有重要意义。研究表明[3]，大量细胞因子表达异常在SLE发病中起重要作用。本研究旨在探讨IL-17、IL-23及HMGB1在SLE患者血清中的表达情况，以及三者表达与SLE临床指标之间的关系，试图为阐明SLE发病机制及寻找新的治疗靶点提供一定理论依据。

1 材料与方法

1.1 临床资料选取2015年4月至2016年4月河南省信阳市中心医院风湿免疫科收治的67例SLE患者为本研究观察组，所有患者均符合2012年系统性红斑狼疮国际临床协助组(Systemic lupus international collaborating clinics，SLICC)制定关于SLE最新分类诊断标准[4]，按照SLE活动性指数(Systemic lupus erythematosus disease activity index，SLEDAI)评分，以SLEDAI评分≥10分者为活动组，共32例，其中男性7例，女性25例，年龄20~56岁，平均年龄31.57±8.43岁，SLEDAI评分＜10分者为稳定组，共35例，其中男性10例，女性22例，年龄19~54岁，平均年龄30.78±8.52岁，狼疮性肾炎者36例，其中男性9例，女性27例，年龄20~55岁，平均年龄31.32±8.27岁，非肾炎者31例，其中男性8例，女性23例，年龄20~56岁，平均年龄32.03±8.56岁。

纳入标准：①符合2012年SLICC制定关于SLE最新分类诊断标准；②确诊前未使用免疫抑制剂及糖皮质激素类药物；③排除合并其他急慢性感染病者；④排除伴有心脏、肝脏、肾脏、肿瘤等严重疾病者；⑤排除怀孕及哺乳期妇女；⑥了解本研究，患者家属同意签署知情同意书者。

同期选取22例体检健康志愿者为对照组，其中男性4例，女性18例，年龄21~53岁，平均年龄31.06±8.54岁。两组受试者之间一般资料比较无统计学意义(P＞0.05)。

1.2 主要试剂与仪器人IL-17、IL-23及HMGB1酶联免疫吸附实验(Enzymes linked immunosorbent assay，ELISA)试剂盒购自美国ADL公司，抗ds-DNA抗体ELISA试剂盒购自美国R&D公司，抗Sm抗体试剂盒购于德国欧蒙生物技术有限公司，C反应蛋白(C-reactive protein，CRP)、C3、C4、IgM、IgG试剂均购于上海科华生物工程股份有限公司，比浊法检测仪器为德国生产的罗氏MODULAR P800全自动生化分析仪。

1.3 方法采集所有受试者清晨空腹状态下静脉血5mL，离心分离血清，-70℃保存待检。采用ELISA检测血清IL-17、IL-23及HMGB1含量，具体操作严格按照试剂盒使用说明进行，采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测ds-DNA抗体水平，采用间接免疫荧光法半定量检测抗Sm抗体水平，采用免疫比浊法检测补体C3、C4以及CRP、IgM、IgG水平。

1.4 统计学分析利用统计学软件SPSS 19.0进行统计学分析，服从正态分布计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两两比较采用t检验，组间比较采用方差分析，相关性分析采用Pearson法，不服从正态分布资料两两比较采用非参数秩和检验，采用Spearman法进行相关性分析，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组与对照组之间IL-17、IL-23以及HMGB1水平比较观察组患者血清中IL-17、IL-23以及HMGB1水平均高于对照组，差异均显著，且具有统计学意义(P＜0.05)。具体结果见表1。

表1 观察组与对照组之间IL-17、IL-23以及HMGB1水平比较

2.2 观察组IL-17、IL-23以及HMGB1水平与病情活动之间的关系SLE活动组及SLE稳定组中IL-17、IL-23、HMGB1水平均高于对照组(P＜0.05)，且SLE活动组中IL-17、IL-23、HMGB1水平均高于SLE稳定组(P＜0.05)。具体结果见表2。

表2 观察组IL-17、IL-23以及HMGB1水平与病情活动之间的关系

2.3观察组IL-17、IL-23以及HMGB1水平与肾脏损害之间的关系肾炎组及非肾炎组中IL-17、IL-23、HMGB1水平均高于对照组(P＜0.05)，且肾炎组HMGB1水平明显高于非肾炎组(P＜0.05)，肾炎组IL-17、IL-23水平与非肾炎组比较无显著差异(P＞0.05)。见表3。

表3 观察组IL-17、IL-23以及HMGB1水平与肾脏损害之间的关系

2.4 观察组IL-17、IL-23以及HMGB1水平与临床指标之间的关系相关性分析采用Pearson法，不服从正态分布资料，如抗ds-DNA抗体水平与抗Sm抗体水平，采用Spearman法进行相关性分析。结果可见，观察组IL-17水平与抗ds-DNA抗体水平、抗Sm抗体水平、补体C3、C4、IgM、IgG、CRP均无显著相关性(P＞0.05)，与SLEDAI呈正相关(P＜0.05)；IL-23水平与抗ds-DNA抗体水平、抗Sm抗体水平均无显著相关性(P＞0.05)，与SLEDAI、IgM、IgG、CRP呈正相关(P＜0.05)，与补体C3、C4呈负性相关(P＜0.05)；HMGB1水平与抗Sm抗体水平、补体C4、CRP均无相关性，与SLEDAI、抗ds-DNA抗体水平、IgM、IgG呈正相关(P＜0.05)，与补体C3呈负性相关(P＜0.05)。

表4 观察组IL-17、IL-23以及HMGB1水平与临床指标之间的关系

3 讨论

目前，SLE发病尚未完全清楚，临床普遍认为SLE发病主要与机体T淋巴细胞激活，刺激B淋巴细胞产生大量自身抗体以及免疫复合物沉积有关[5]，Th17细胞作为辅助性T淋巴细胞亚群[6]，成为了近年来国内外研究的热点。Th17主要分泌IL-17A、IL-17F、TNF-α等细胞因子[7]，IL-17A作为IL-17最为主要的效应分子，在机体中具有很强的促进炎症作用。大量研究表明[8-10]，IL-17在自身免疫性疾病诸如类风湿性关节炎、支气管哮喘、移植肾排斥反应等中均存在表达异常，提示IL-17与自身免疫性疾病的发生关系密切。IL-23是IL-12家族新成员，对Th17细胞存活及增殖起重要作用，且能够促进Th细胞释放IL-17[11]。相关研究表明[12]，CD4+T细胞在向Th17分化的早期，IL-23并不发挥作用，而在Th17细胞发生增殖分化时起重要作用。此外，国外学者发现[13]，鼠模型试验中，自身免疫性疾病在缺乏IL-17以及IL-17抗体治疗的模型中仍然发生，而在缺乏IL-23模型中结果相反，推测IL-23可能通过不依赖于Th17的其他途径参与自身免疫性疾病的发生及发展。HMGB1在细胞核内是一种进化高度保守的典型非组蛋白，参与DNA重组、DNA复制、基因转录调控、细胞分化成熟以及类固醇激素调控等重大生命活动[14，15]。近年来，HMGB1在自身免疫性疾病中的研究成为了热点，研究表明[16，17]，HMGB1在风湿性关节炎中呈现高表达，在狼疮性肾炎小鼠模型中同样发现其异常高表达，提示HMGB1可能与自身免疫性疾病的发生发展存在密切联系。因此，本研究选择IL-17、IL-23以及HMGB1三个指标进行研究，探讨三者与SLE发生发展之间的关系，试图为阐明SLE发病机制及寻找新的治疗靶点提供一定理论依据。

本研究结果表明，观察组患者血清中IL-17、IL-23以及HMGB1水平均高于对照组，提示SLE患者中存在IL-17、IL-23以及HMGB1高表达，推测三者参与SLE疾病的发生；SLE活动组中IL-17、IL-23以及HMGB1水平均高于SLE稳定组，三者与SLEDAI呈明显正相关，提示三者与SLE疾病病情密切相关，且随疾病活动呈升高趋势，提示三者可作为SLE疾病活动的参考指标；肾炎组HMGB1水平明显高于非肾炎组，HMGB1水平与抗Sm抗体水平、补体C4、CRP均无相关性，与SLEDAI、抗ds-DNA抗体水平、IgM、IgG呈正相关，与补体C3呈负性相关，说明HMGB1与SLE并发症狼疮性肾炎的发生密切相关，抗ds-DNA抗体作为SLE患者自身特异性抗体，推测HMGB1在SLE发病过程中发挥作用，可能是由于与抗ds-DNA诱导的肾小球免疫复合物发生结合；肾炎组IL-17、IL-23水平与非肾炎组比较无显著差异，观察组IL-17水平与抗ds-DNA抗体水平、抗Sm抗体水平、补体C3、C4、IgM、IgG、CRP均无显著相关性，与SLEDAI呈正相关，IL-23水平与抗ds-DNA抗体水平、抗Sm抗体水平均无显著相关性，与SLEDAI、IgM、IgG、CRP呈正相关，与补体C3、C4呈负性相关，提示IL-17、IL-23与狼疮性肾炎的发生无明显相关性，二者与SLE疾病活动情况密切相关，推测IL-23与SLE疾病活动程度相关的作用机制，可能与其导致IgM、IgG、CRP水平升高，补体C3、C4消耗过大有关。

综上所述，本研究结果表明，血清IL-17、IL-23及HMGB1在SLE患者中显著高表达，三者参与SLE疾病发生，且与疾病活动性密切相关，推测三者有望成为SLE治疗新靶点，值得进一步深入研究探讨。

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The expression and clinical significance of IL-17，IL-23，HMGB1 in systemic lupus erythematosus

TAO Penghui.Department of Laboratory Medicine，Central Hospital of Xin Yang City，Xinyan Henan 464000，China.

Objective To investigate the expression and clinical significance of IL－17，IL－23，HMGB1 in systemic lupus erythematosus．Method A total of 67 cases of SLE patients in our hospital were selected as the observation group，and 22 healthy volunteers were selected as the control group．ELISA was used to detect the expression of IL－17，IL－23and HMGB1 in serum of all subjects，and the relationship between the expression of these three indexes and the clinical parameters of SLE was analyzed．Result In the patients of observation group，the expression levels of serum IL－17，IL－23 and HMGB1 were higher than that in control group(P＜0．05)；IL－17，IL－23 and HMGB1 levels of SLE patients in active state were significantly higher than those in stable state(P＜0．05)．The level of IL－17 in the nephritis group was significantly higher than that in the non－nephritis group(P＜0．05)，and there was no significant difference for IL－17 and IL－23 levels between nephritis group and non nephritis group(P＞0．05)；The level of IL－17 in the observation group had no significant correlation with anti－ds－DNA antibody level，anti－Sm antibody level，complement C3，C4，IgM，IgG and CRP(P＞0．05)，but positive correlation with SLEDAI(P＜0．05)；Between IL－23 and anti－ds－DNA antibody or anti－Sm antibody there was no correlation(P＞0．05)．But IL－23 was positively correlated with SLEDAI，IgM，IgG，CRP(P＜0．05)，and had negative correlation with C3，C4(P＜0．05)；The level of HMGB1 was not correlated with the level of anti－Sm antibody，complement C4 and CRP，and was positively correlated with SLEDAI，anti－ds－DNA antibody levels，IgM and IgG(P＜0．05)，and negatively correlated with complement C3(P＜0．05)．Conclusion Serum levels of IL－17，IL－23 and HMGB1 were significantly higher in SLE patients，and three of them were involved in SLE disease，and were closely related to disease activity．These indexes may play an important role in revealing the pathogenesis of SLE and controlling the disease．

Systemic lupus erythematosus；IL－17；IL－23；HMGB1

R593．24+1，R446．62

A

1674－1129(2017)02－0177－04

10．3969/j.issn.1674－1129．2017．02．012

2016-12-16；

2017-03-17)

陶鹏辉，男，1972年生，本科学历，学士学位，副主任检验技师，研究方向是临床免疫、生化、微生物学检验。E-mail：taopenghui88@ 163.com