曲子宫绦虫染色标本的制作和生殖器官观察

杨祎程，张国权，张元来，刘立军，张 亮，田启会，张进隆

（1.甘肃畜牧工程职业技术学院，武威 733006；2.甘肃省武威市畜牧兽医局，武威 733000）

曲子宫绦虫染色标本的制作和生殖器官观察

杨祎程1，张国权1，张元来2，刘立军1，张 亮1，田启会1，张进隆1

（1.甘肃畜牧工程职业技术学院，武威 733006；2.甘肃省武威市畜牧兽医局，武威 733000）

为了研究曲子宫绦虫的形态结构和生殖器官的变化规律，用H.E染色法制作曲子宫绦虫的染色标本，对传统的染色方法进行了改进，制作出结构清晰、颜色鲜艳的曲子宫绦虫标本，在光学显微镜下观察到该绦虫成节中雌雄生殖系统、排泄系统以及孕节中的子宫和虫卵结构。该研究可为该曲子宫绦虫形态学虫种鉴定和生殖器官变化规律增添新资料，为本病的确诊提供参考依据。

曲子宫绦虫；生殖器官；苏木素染色

曲子宫绦虫隶属于扁形动物门绦虫纲，多节绦虫亚纲，圆叶目，裸头科，该属绦虫为大型绦虫，体长可达4.3m，常寄生于绵羊、山羊、黄牛、牦牛等反刍动物的小肠中。一条完整的绦虫由头节、颈节和体节3部分组成，生殖系统和排泄系统是曲子宫绦虫比较重要的结构［1］。关于莫尼茨绦虫的形态学研究和染色方法报道很多，但对曲子宫绦虫形态学的研究和染色方法的研究报道很少。本实验以甘肃省天祝地区高山细毛羊小肠中采集到的曲子宫绦虫为材料，采用H.E染色法制作曲子宫绦虫的染色标本，对传统的染色方法做了改进，制作了结构清晰、颜色鲜亮、不易褪色的曲子宫绦虫的染色标本。在光学显微镜下观察到该绦虫幼节中可见排泄系统和萌芽状态的生殖系统；成节中发育完成的雌雄生殖系统和排泄系统；孕节中子宫和虫卵的结构。该研究可为该虫体在形态学虫种鉴定和生殖器官变化规律增添新资料，为本病的确诊提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 虫种

实验用曲子宫绦虫采自甘肃省天祝县牛羊定点屠宰场1岁龄高山细毛羊的小肠中。

1.2 试剂和仪器

苏木素精，酒精，铵明矾，甘油，甲醇，二甲苯，加拿大树胶，载玻片，盖玻片，Olympus光学显微镜照相系统，等等。

1.3 方法

1.3.1 虫体的处理 将采集的绵羊绦虫先用自来水冲洗3次，再用生理盐水漂洗浸泡，后将完整的虫体从头节开始剪成2 cm左右的小段，依次按1-1、1-2、1-3…的编号方法编号，将样品分别用70%乙醇固定，用于制片。

1.3.2 绦虫染色标本制作 将选取的绦虫节段压入两洁净的载玻片中间，为了不使虫体压得过薄，可在载玻片两端垫以适当厚度的纸片，用线绳扎紧载玻片两端，投入70%酒精中固定24～48 h，然后用苏木素-伊红（H.E染色法）染色法染色。具体步骤：①酒精洗脱：将压片固定好的虫体投入梯度酒精中，50%酒精，10 min→30%酒精，10 min→蒸馏水，10 min；②染色：苏木素染色液30 min→用蒸馏水漂洗10min；③分色：用1%盐酸溶液分化10～20 s；④染色：水伊红染液10 min；⑤脱水：80%酒精，5 min→90%酒精，10min→95%酒精，10min，100%酒精Ⅰ，10min→100%酒精Ⅱ，10 min；⑥透明：苯酒精（1∶1），10 min→二甲苯，10 min；⑦封固：加拿大树胶封固。

1.3.3 实验用绦虫染色标本的制作 将1.3.2中得到的染色标本在光学显微镜下观察，根据其形态特征，确定所采得的绦虫的种类，确定曲子宫绦虫对应的编号，将所有曲子宫绦虫从头节至孕节的样品用H.E染色法制作染色标本。

2 结果

2.1 曲子宫绦虫寄生部位

曲子宫绦虫寄生于高山细毛羊空肠前段的小肠黏膜上（见图1-1）。

2.2 外部形态的观察

曲子宫绦虫成虫虫体呈背腹扁平的带状，乳白色，虫体长2.7 m，幼节宽0.3～0.8 mm，成节宽4.0～10.0 mm，孕节宽8.0～15.0 mm。头节小，呈圆球形；颈节在头节之后，比头节细而薄，幼节细而薄，成节比幼节宽，也较厚，孕节宽而厚，每个节片呈上窄下宽的梯形。

2.3 染色标本形态观察

用H.E染色法染制的标本在光学显微镜下观察，曲子宫绦虫成虫头节呈紫红色，4个近圆形吸盘位于头节前端的侧面，均匀排列；颈节呈紫红色，分节很细，排泄管清晰可见，看不到生殖系统器官（图1-2）；幼节呈紫红色，排泄管清晰可见，生殖系统可见萌芽状态卵巢、卵模、卵黄腺、睾丸等生殖器官均未发育成熟（图1-3，图1-4）；成节内有一组生殖器官，无规律地分布于节片一侧，生殖孔开口于生殖器官分布的一侧，卵巢和卵黄腺在节片一侧构成菜花状结构，将卵模围在中间，子宫出现开始发育，呈弯曲状，位于两纵排泄管的内侧，分布于节片前缘，睾丸数百个，分布于节片两侧纵排泄管之外（图1-5）；孕节有排泄管，生殖系统中卵巢、卵模、卵黄腺、睾丸等生殖器官已逐渐退化，子宫中充满虫卵占据了整个节片（图1-6），子宫中的虫卵逐渐发育成熟。

图1 曲子宫绦虫染色标本形态观察

2.4 生殖器官变化规律观察

曲子宫绦虫生殖系统从幼节开始分化，最初每个节片中央有一深色椭圆形的阴影，是生殖器官的萌芽，尚未出现雌、雄的性别特征（图2-1），随着发育节片位置向后生殖器官萌芽无规律的向节片的一侧逐渐移动（图2-2），生殖系统椭圆形的萌芽逐渐变大，颜色变深。接着雌、雄生殖系统继续发育，在同一节片中，有生殖孔侧睾丸出现比无生殖孔侧要迟（见图2-3）。雌性生殖系统中，首先出现生殖腔、卵模和卵黄腺，卵巢从小逐渐变大，与卵黄腺构成菜花状结构（图2-4），随着节片位置向后，这个结构逐渐变大，至此绦虫成节发育完全（图2-5）。在孕节发育过程中，随着节片向后延伸，弯曲的子宫开始出现，睾丸最先退化，尔后是卵巢，再是卵黄腺退化，卵模最后退化，节片内仅能看到发达的子宫中充满虫卵，至此绦虫孕节发育完 全（图2-6）。

图2 曲子宫绦虫发育变化规律

3 讨论

本研究以天祝高山细毛羊小肠内寄生的曲子宫绦虫为实验材料，用H.E染色法制作了结构清晰、颜色鲜亮、不易褪色的曲子宫绦虫的染色标本，并在光学显微镜下观察了该绦虫的纵排泄管、雌雄生殖器官等结构，为该绦虫形态学研究和虫体鉴定添加了新的参考资料。

绦虫的染色方法有很多种。裘学丽等［2］采用齐尔石碳酸复红染液对人体内的带绦虫成虫进行染色制片效果很好。奚琳琳等［3］和纪伟华等［4］采用孔雀绿染色法对人体内带绦虫成虫的孕节片进行染色制片，得到的染色标本子宫侧枝为亮绿色，其他部位无色，易于观察。王宏运［5］采用苏木素染色法制作贝氏莫尼茨绦虫的染色标本，观察到结构清晰的成节中雌雄生殖系统、排泄系统，孕节中子宫和虫卵的结构。任成林［6］曾用哈里斯氏苏木精染色液对羊曲子宫绦虫成虫进行染色制片也得到了比较满意的效果。本实验采用H.E染色法制作绦虫的染色标本，对传统的染色方法做了改进。在浸染过程中应勤检查、频翻动，使染液浸透虫体，宁可深染，不宜浅染，以免经分色后色淡影响鉴定。分色是关键，严格拿握时间，虫体呈紫红色为宜。透明时间应以最理想的结果为宜，因此在透明过程中也应经常观察，在显微镜下能清晰分辨虫体内部各器官，即可取出封片，一般压制较薄的节片透明时间短，反之则较长。用此改进的方法制作的曲子宫绦虫标本，成节中雌雄生殖系统和排泄系统结构清晰，孕节中子宫和虫卵的结构也很好辨认。

汤丽敏［7］对盖氏曲子宫绦虫形态学进行观测，测量出了该绦虫的各种数据。本研究就曲子宫绦虫成虫从头节、颈节至体节，总结了其生殖器官的变化规律。随着节片的生长延伸，节片变宽变厚，形态呈现一系列变化，表现为内部器官的逐渐发育完全，一些器官逐渐成熟又逐渐退化的过程。比较曲子宫绦虫的幼节和成节的形态结构，生殖器官具有逐渐变化的规律。幼节中，每个节片中央有一深色椭圆形的阴影，是生殖器官的萌芽，尚未出现雌、雄的性别特征，随着节片位置向后，生殖器官萌芽无规律地向节片的一侧逐渐移动，生殖系统椭圆形的萌芽逐渐变大，颜色变深。在同一节片中，雌性生殖系统有生殖孔侧睾丸出现比无生殖孔侧要迟，雌性生殖系统中，首先出现生殖腔、卵模和卵黄腺，卵巢从小逐渐变大，与卵黄腺构成菜花状结构，至此绦虫成节发育完全。在孕节发育过程中，随着节片向后延伸，弯曲的子宫开始出现，睾丸最先退化，尔后是卵巢，再是卵黄腺退化，卵模最后退化，节片内仅能看到发达的子宫中充满虫卵，至此绦虫孕节发育完全。

［1］汪明.兽医寄生虫学［M］.3版.北京：中国农业出版社，2003：104-113.

［2］裘学丽，陈艳，牟荣.带绦虫成虫节片染色方法的探讨［J］.贵阳医学院学报，2005，30（4）：376.

［3］奚琳琳，杨毅梅.带绦虫妊娠节片孔雀绿染色标本制作［J］.中国热带医学，2008，8（3）：474.

［4］纪伟华，郭冀玲.带绦虫妊娠节片标本制作方法的研究［J］.中国人兽共患病杂志，2001，17（4）：73-74.

［5］王宏运.贝氏莫尼茨绦虫幼节和成节间差异基因的EST研究［D］.石河子：石河子大学，2007：11-16.

［6］任成林.绦虫成虫染制方法的改进［J］.动物学杂志，1993，28（6）：28-29.

［7］汤丽敏.盖氏曲子宫绦虫形态学观测［J］.畜牧兽医科技信息, 2007，25（10）：26.

S852.7

A

2095-3887（2017）02-0040-04

10.3969/j.issn.2095-3887.2017.02.014

2016-12-25

2016年院列科研项目（2016GMGY002）

杨祎程（1985-），男，硕士，主要从事动物解剖生理教学与研究工作。

张进隆（1966-），男，博士。