高效液相色谱法同时测定野菊花中的4种药用成分

李婷，区硕俊，王强，黄曼谷

（广州质量监督检测研究院,国家加工食品质量监督检验中心,广东广州511447）

高效液相色谱法同时测定野菊花中的4种药用成分

李婷，区硕俊，王强，黄曼谷

（广州质量监督检测研究院,国家加工食品质量监督检验中心,广东广州511447）

建立高效液相色谱法（HPLC）测定野菊花中绿原酸、黄芩苷、槲皮素和蒙花苷的含量。样品经过优化条件提取后,梯度洗脱条件下分离,二极管阵列检测器进行检测。4种药用成分在相应的范围内浓度呈良好的线性关系，相关系数(r)在0.998 5～0.999 8之间。平均回收率为84.4%～97.2，检出限为0.1～0.5 mg/L，相对标准偏差为4.88%～8.21%。该方法回收率高、精密度高、准确度高、重现性好，是测定野菊花中4种药用成分的有效方法。

高效液相色谱；野菊花；药用成分；同时测定

野菊花是菊科植物菊的干燥头状花序，以色黄无梗、完整、苦辛、花未全开者为佳。野菊花性微寒，具疏散风热、消肿解毒[1-4]。能治疗疔疮痈肿、咽喉肿痛、风火赤眼、头痛眩晕等病证[5-7]。野菊花中富含黄铜类、有机酸类、挥发油等化学成分[8-10]。其中，绿原酸、黄芩苷等药用成分对清除自由基、抗肿瘤和改善慢性疾病有明显的效果。因此野菊花中药用成分的提取与检测对医学药学的基础研究有着重要的意义[10]。

近年来检测工作者对测定野菊花的药用成分作了大量的研究，但由于野菊花中的药用成分性质差异较大，要同时提取和分离难度大[8,9,11-13]，因此报道主要为单一组分或一类化合物的含量测定，同时测定野菊花中多种不同种类成分的含量尚少报道,本文建立的高效液相色谱法操作简便、重复性好、灵敏度低,适用于日常检测野菊花中4种药用成分含量。

1 实验部分

1.1 材料、试剂与仪器

岛津高效液相色谱仪LC-20AT；超声波清洗器(H66025T)；MS3 basic漩涡混合器(德国IKA公司)；实验室用水为Milli-Q超纯水；甲醇(色谱纯，Fisher公司)；磷酸，乙醇，氢氧化钠(分析纯，广州化学试剂)；对照品：绿原酸（≥98%，中国药品生物制品检定所）、黄芩苷（≥98%，中国药品生物制品检定所）、槲皮素（≥98.5%，中国药品生物制品检定所）、蒙花苷（≥98%，中国药品生物制品检定所）；菊花药材购于康美药业股份有限公司。

1.2 标准溶液的配制

分别精密称取绿原酸对照品10.0 mg，黄芩苷10.0 mg，槲皮素10.0 mg，蒙花苷10.0 mg置于同一100 mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并定容，得到100mg/L的标准储备液。精密量取上述溶液，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度为0.0，1.0，2.0，5.0，10.0，25.0，50.0 mg/L的标准工作液。

1.3 样品前处理

精密称取菊花粉末1.00 g于25 mL比色管中,加入20 mL乙醇-0.1%氢氧化钠（8:2）溶液，放入超声波清洗器中40℃超声15 min后取出，放冷至室温并用乙醇稀释至刻度，过0.22 μm有机滤膜,待上机分析。

1.4 色谱条件

色谱柱:Phenomenex Kinetex C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)不锈钢柱,柱温30℃；进样量：20 μL；流量：1.0 mL/min；流动相A(0.1%磷酸溶液)，流动相B(甲醇)，梯度洗脱程序：0.0～5.0 min，90%A；5.0～10.0 min，90%～75%A；10.0～35.0 min，75%～50% A；35.0～36.0 min，50%～90%A；36.0～45.0 min，90% A。波长范围330 nm。4种药用成分标准色谱图见图1。

图1 4种药用成分标准色谱图Fig.1 The HPLC chromatogram of the four pharmaceutical components1-绿原酸;2-黄芩苷;3-檞皮素;4-蒙花苷

2 结果与分析

2.1 乙醇比例对回收率的影响

图2 乙醇比例对回收率的影响Fig.2 The effect of ethanol ratio on the recoveries

由于4种药用成分在乙醇中均有良好的溶解性，因此选取乙醇作为主要的提取溶剂。但因为黄芩苷在碱性环境下具有较强的稳定性，所以在提取液中加入一定的碱液有助于黄芩苷保持稳定。但由于檞皮素难溶于水，因此提取液中水相含量过高，会导致檞皮素回收率降低。本实验探究了提取液乙醇比例对4种药用成分回收率的影响，结果表明，乙醇比例在80%时，4种药用成分的平均回收率最高，详见图2。

2.2 超声时间对回收率的影响

本实验对超声时间对回收率的影响进行了探究，4种药用成分的回收率随超声时间的增长而提高，但随着超声时间增长4种药用成分回收率影响较小，结果发现，超声时间超过12 min后，4种药用成分回收率趋于持平，变化不明显，考虑到成本问题，选取超声时间为15 min。详见图3。

图3 超声时间对回收率的影响Fig.3 The effect of ultrasonic time on the recoveries

2.3 超声温度对回收率的影响

图4 超声温度对回收率的影响Fig.4 The effect of ultrasonic temperature on the recoveries

在超声时间为15 min条件下探究了超声温度对回收率的影响，结果表明，超声过程中加热有助于4种药用成分回收率的提高，但温度过高，4种药用成分可能因为被氧化，从而使回收率降低，绿原酸的变化尤为明显。当温度为40℃时，4种药用成分的平均回收率最高，详见图4。

2.4 线性关系和检出限

将4种药用成分的标准工作曲线在相应的条件下进行测定，保留时间定性。以峰面积Y为纵坐标，相应的浓度X（mg/L）为横坐标，进行线性回归定量，4种药用成分的标准工作曲线相关系数r在0.998 5～0.999 8之间，结果表明4种药用成分呈良好线性关系。以仪器的信噪比3倍计算，分别测得4种药用成分的最低仪器检出限，详细见表1。

表1 4种药用成分线性方程、相关系数（r）和方法检出限Table1 The linear equation,correlation coefficient and detection limits of the method

2.5 回收率及精密度实验

用菊花粉末进行加标回收实验，先重复测定4种药用成分的本底值6次，取平均值，并根据本底值进行三个水平的加标。对各加标水平日内平行测定6次，测得4种药用成分的平均回收率为84.4%～97.2%。相对标准偏差（RSD）在4.88%～8.21%范围内，说明该方法重现性好，精密度高，达到分析要求，结果详见表2。

3 结论

本文建立了高效液相色谱法同时检测菊花中的4种药用成分。采用的乙醇-水溶液提取法一次性提取绿原酸、黄芩苷、槲皮素和蒙花苷，并进行提取条件优化。在梯度洗脱程序下，4种药用成分呈现良好分离度。方法学结果表明，本方法回收率高，重复性好，精密度高且灵敏度高，适用于菊花中绿原酸、黄芩苷、槲皮素和蒙花苷的同时检测，为医学药学基础研究提供了参考依据。

表2 回收率及精密度实验结果（n=6）Table2 Results of recoveries and precision experiment for the method（n=6）

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我国自主研发CAP1400反应堆压力容器一次通过试验

2017年3月17日，在“大型先进压水堆及高温气冷堆核电站”国家科技重大专项支持下，CAP1400示范工程1号机组反应堆压力容器水压试验顺利完成。本次水压试验设计压力为17.2MPa，该水压试验分为压力容器本体水压试验和内、外O环泄漏试验两阶段，整体水压试验压力为21.5MPa，保压时间为10分钟，压力降至17.2MPa时进行内、外O环泄漏试验，水压试验期间各项指标均符合设计要求，全程无渗漏、冒汗等现象。该水压试验一次性顺利完成，标志着我国自主设计研发的CAP1400反应堆压力容器已实现国产化，为三代核电批量化建设打下良好基础。反应堆压力容器是核电机组的核心设备，是包容放射性物质不外泄的最重要的安全屏障，60年寿期内不可更换，其先进性对于确保核电站运行的安全性和可靠性至关重要。该反应堆压力容器由国家核电上海核工院独立自主设计、中国一重自主制造。

Simultaneous Determination of Four Pharmaceutical Components in Chrysanthemum Indicum by HPLC

LI Ting,OU Shuo-jun,WANG Qiang,HUANG Man-gu
(Guangzhou Quality Supervision and Testing Institute,National Centre for Quality Supervision and Testing of Processed Food(Guangzhou),Guangdong Guangzhou 511447,China)

A high performance liquid chromatography(HPLC)method was established for simultaneous determination of chlorogenic acid,baicalin,quercetin and linarin in Chrysanthemum indicum.Samples were extracted with optimum conditions,then they were separated under the gradient elution conditions and finally detected by photodiode array detector.The results show that,four pharmaceutical components exhibits good liner relationship within the corresponding concentrations,correlation coefficient(r)is from 0.998 5 to 0.999 8.The average recoveries of four pharmaceutical components are 84.4%～97.2%,the limits of detection(LOD)of the method are 0.1～0.5 mg/L and the relative standard deviations(RSDs)are 4.88%～8.21%.So this method has high recovery,high precision,high accuracy, good reproducibility,and is suitable for determination of four pharmaceutical components in Chrysanthemum indicum.

HPLC;Chrysanthemum indicum;Pharmaceutical components;Simultaneous determination

TQ 463

A

1671-0460（2017）03-0566-03

2016-11-15

李婷（1986-），女，广东省兴宁市人，中级工程师，2008年毕业于广州城市职业学院食品生物技术专业，研究方向：食品添加剂检测。E-mail：543715255@qq.com。