一起小鹅瘟病例的鉴定

隋增亮 （山东省高密市朝阳街道办事处农林站 261500）

一起小鹅瘟病例的鉴定

隋增亮 （山东省高密市朝阳街道办事处农林站 261500）

小鹅瘟作为养鹅业常见、多发的高致死性疾病，每年都会造成巨大的经济损失。山东沂南地区养鹅密度较大，近来该地区雏鹅发生急性传染性疾病，死亡率高达90%，病鹅起初精神委顿，后期食欲废绝，严重下痢，迅速死亡。死前发生双腿麻痹、瘫痪、角弓反张、抽搐不止等神经症状。剖检可见皮下组织充血、全身脱水、心脏、肝脏肿大，小肠后端可见明显的纤维性混合物栓塞，初步诊断为小鹅瘟。设计针对性引物，通过聚合酶链式反应扩增出目的条带，最终鉴定为小鹅瘟。小鹅瘟病毒(Goose parvovirus，GPV)是由小鹅瘟病毒引起的一种传染性疾病，表现为急性败血症。4～20日左右的雏鹅易发生感染，死亡率很高，随着雏鹅日龄的增长发病率和死亡率逐渐减低。根据发病时间长短不同可分为3种类型，最急性型、急性型和亚急性型。发病的雏鹅表现为全身败血症、稀泻。1周内的雏鹅死亡率为100%。沂南地区一养殖户，养鹅2000只，在2016年4月份感染某急性传染病，死亡率达91%。笔者对该病进行系统鉴定。

1 材料和方法

1.1 材料 山东省沂南县一鹅场送检病死鹅数只； DNA提取试剂盒购Qiagen公司；Taq酶购自上海生物工程公司；琼脂糖凝胶回收试剂盒为Qiagen公司产品；其它试剂均为国产或进口分析纯试剂。

1.2 临床症状及剖检观察 通过询问和到场观察鹅群情况，并剖检观察病死鹅临床症状。病鹅起初表现为精神低迷、进食量锐减、羽毛黯淡无光、鼻分泌物异常增加，然后严重下痢、排出有气泡的黄绿色或者黄白色水样粪便。大部分病死鹅在死前发生双腿麻痹、瘫痪、角弓反张、抽搐不止等神经症状。

1.3 病毒基因组的提取 按试剂盒步骤提取鹅小肠研磨液DNA。

1.4 PCR扩增 设计合成针对病毒VP3蛋白的引物，如下1对引物F：5′-CCAAGCTACAACAACCACATCTAC-3′R：5′-CTGCGGCAGGGCATAGACATCCGAC-3′。上述引物由大连宝生物工程公司合成。然后取0.1μg的病毒DNA进行聚合酶链式反应(PCR)扩增，采用50μl的PCR体系：DNA0.1μg，10×PCR buffer 5μl，25mM MgCl2 3μl，10mM dNTP 1μl，上游引物和下游引物各25pmol，Taq酶0.5U，加灭菌超纯水至50μl，经94℃ 5min 变性，然后94℃ 1min，55℃ 1min，72℃ 2min，30个循环扩增，72℃10min延长，4℃保存。

1.5 PCR产物测序 将PCR产物送上海生物工程公司测序。将反馈序列在NCBI中的Nuclear acid blasting进行序列比对。

2 结果

2.1 剖检结果 剖检可见皮下组织充血，全身脱水，心脏、肝脏肿大，小肠后段内可见明显的纤维性混合物栓塞，小肠充血、出血。该症状符合典型小鹅瘟特征表现。

2.2 PCR鉴定结果 提取组织DNA后使用特异性引物扩增，核酸胶鉴定有明显阳性条带，将条带PCR产物公司测序，将反馈序列在NCBI数据库中比对，发现与小鹅瘟VP3蛋白同源性99.8%。因此，鉴定该鹅场感染小鹅瘟。

3 总结

目前对于小鹅瘟并没有有效的治疗方法，防制该病一般都是加强免疫和科学的管理。通常用高免血清和卵黄抗体做被动免疫，也有用弱毒疫苗或者灭活强毒疫苗做主动免疫，免疫情况良好。基本经过免疫的鹅群都不会发病，通过免疫就基本可以阻止该病的暴发和流行。

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1007-1733(2017)02-0039-01

2016–09–29）