豆腐果苷抗抑郁活性的研究

杨敏

(1.云南大学教育部自然资源药物化学重点实验室，云南 昆明 650091；2.云南农业大学香料研究所，云南 昆明 650051)

豆腐果苷抗抑郁活性的研究

杨敏1,2

(1.云南大学教育部自然资源药物化学重点实验室，云南 昆明 650091；2.云南农业大学香料研究所，云南 昆明 650051)

目的：探讨豆腐果苷的抗抑郁作用。方法：60只昆明种小鼠，雄性，随机分为6组，每组10只。分别为豆腐果苷四种剂量组(20、30、40、50 mg·kg-1)，阳性对照组盐酸丙米嗪(IMI，45 mg·kg-1)，空白对照组(蒸馏水)，各组分别灌胃相应药物。观察6 min，小鼠悬尾实验记录后5 min内给药组和对照组小鼠累计不动时间，小鼠强迫游泳实验记录后4 min内给药组和对照组小鼠累计不动时间。采用小鼠悬尾实验及小鼠强迫游泳实验方法研究豆腐果苷的抗抑郁作用。结果：在小鼠悬尾实验和小鼠强迫游泳实验中，与空白对照组比较，豆腐果苷在30 mg·kg-1剂量下能明显缩短小鼠的悬尾不动时间(P<0.05)，在30、50 mg·kg-1剂量下能明显缩短小鼠强迫游泳的不动时间(P<0.05)。结论：豆腐果苷在行为绝望动物模型中呈现抗抑郁作用。

豆腐果苷；抗抑郁；悬尾；强迫游泳

抑郁症是以抑郁为主要症状的一种常见病，其发病机制十分复杂，与多种受体和神经递质的紊乱有关，治疗抑郁症的药物也主要与神经生化机制的调节有关，而目前抗抑郁药只能缓解部分症状，对神经及血管等多种系统和组织有不同程度的毒副作用。因此研究开发疗效好，毒副作用少的抗抑郁新药成为近年来研究的热点[1,2]。

豆腐果苷(Helicid，对甲醛基苯-O-β-D-阿洛吡喃糖苷)系从山龙眼科植物深山龙眼(Helicia erratica Hook.)的果实中分离出的有效成分[3]，其化学结构与天麻苷相似，但镇静、安眠、止痛的作用较天麻苷强[4]。研究表明，豆腐果苷具有多种药物活性，对中枢神经系统的作用尤为突出，临床上主要用于治疗神经官能症引起的头痛，失眠等症，无明显急性毒性。畸胎学实验表明，胚胎期服用大剂量豆腐果苷未观察到对子代的神经行为致畸效应和脑组织学效应[5]，其安全性较高。由于豆腐果苷具有止痛、抗惊厥、安眠和抗抑郁等作用[6,7]，目前作为用于治疗抑郁症的天然药物正在被广泛开发和应用。本文对豆腐果苷的抗抑郁活性用两种经典动物抑郁模型进行研究，为豆腐果苷抗抑郁新药的进一步开发研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验药物

豆腐果苷，云南玉溪万方天然药物有限公司产品，批号040701，盐酸丙米嗪(Imipramine hydrochloride，IMI)，为Sigma公司产品，临用前用蒸馏水配成所需浓度。

1.2 动物

昆明种小鼠，雄性，体质量18-22 g，由昆明医学院实验动物中心提供，动物分笼饲养，自由采食。

1.3 仪器

ANC U580Svi sta摄像头(深圳市奥尼电子工业有限公司)；JUNSD JS-306多功能秒表(深圳市JUNSD实业有限公司)。

1.4 方法

1.4.1 分组及给药

60只昆明种小鼠禁食16 h后随机分成6组，分别为空白对照组(蒸馏水)，阳性对照组盐酸丙米嗪(Imipramine hydrochloride，IMI，45 mg·kg-1)，豆腐果苷四种剂量组(20、30、40、50 mg·kg-1)，每组10只。于开始实验前60 min，分别灌胃给予相应药物，每日1次，连续7 d。各组均按0.2 ml·(10 g)-1体质量给药。

豆腐果苷不同给药时间对小鼠悬尾实验的影响分组同上，于开始观察前1、2、4、24 h前，各组分别灌胃蒸馏水，盐酸丙米嗪(Imipramine hydrochloride，IMI，45 mg·kg-1)和不同剂量的豆腐果苷(20、30、40、50 mg·kg-1)，按0.2 ml·(10g)-1体质量给药。

1.4.2 小鼠悬尾实验

参照Butterweck等[8]的方法，小鼠灌胃给药60 min后，用胶布将小鼠尾在距尾尖2 cm处粘在一根水平木棍上，使动物成倒挂状态，其头部离桌面约5 cm，悬挂两侧用木板隔开动物视线。开始时小鼠头部上下左右游动，一段时间后因失望而使活动减少，即出现间断性不动。观察6 min，记录后5 min内的累计不动时间。

1.4.3 强迫小鼠游泳实验

参照Butterweck等的方法，小鼠灌胃给药60 min后，将小鼠置于高30 cm，直径18 cm，水深10 cm的玻璃水缸中，水温25±2℃，观察小鼠6 min，记录后4 min内的累计不动时间。

1.4.4 统计学方法

2 结果

2.1 豆腐果苷对小鼠悬尾实验的影响

在经典的小鼠悬尾抑郁模型中，阳性对照组IMI与空白对照组相比，可显著缩短悬尾不动时间(P<0.001)。豆腐果苷单次灌胃20、30、40、50 mg·kg-1，与空白对照组相比，30 mg·kg-1剂量显著减少悬尾不动时间，见表1。

表1 豆腐果苷对小鼠悬尾实验的影响±SD，n=10)

注：与空白对照组相比，**P<0.01，***P<0.001。

2.2 豆腐果苷不同给药时间对小鼠悬尾实验的影响

在经典的小鼠悬尾抑郁模型中，阳性对照组IMI与空白对照组相比，可显著缩短悬尾不动时间(P<0.001)。豆腐果苷单次灌胃20、30、40、50 mg·kg-1，与空白对照组相比，给药1 h后，30 mg·kg-1剂量显著减少悬尾不动时间(P<0.05)；给药2 h后，40 mg·kg-1剂量显著减少悬尾不动时间(P<0.05)；给药4 h后，30 mg·kg-1剂量显著减少悬尾不动时间(P<0.05)；给药24 h后，40 mg·kg-1剂量显著减少悬尾不动时间(P<0.05)，见表2。

表2 豆腐果苷不同给药时间对小鼠悬尾实验的影响±SD，n=10)

注：与空白对照组相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

2.3 豆腐果苷对强迫小鼠游泳实验的影响

在经典的小鼠强迫游泳抑郁模型中，阳性对照组IMI与空白对照组相比，可显著缩短不动时间(P<0.05)；豆腐果苷单次灌胃20、30、40、50 mg·kg-1，与空白对照组相比，30、50 mg·kg-1剂量显著减少不动时间(P<0.05)，见表3。

3 讨论

小鼠悬尾实验和强迫游泳实验均属于行为绝望模型，是目前评价抗抑郁作用效果最常用的抑郁动物模型。本研究采用小鼠悬尾模型和强迫游泳模型来评价豆腐果苷的抗抑郁活性，由于豆腐果苷具有明显的镇静作用，不具有中枢兴奋作用，因此可排除豆腐果苷在实验中带来的假阳性结果。实验结果显示，豆腐果苷具有毒性低，不良反应轻，作用时间长等特点。豆腐果苷在灌胃给药1小时后即可发挥药效，其在体内具有长效的作用，单次给药的作用时间可达24小时。本实验结果表明，豆腐果苷30 mg·kg-1剂量明显缩短小鼠悬尾不动时间，30、50 mg·kg-1剂量明显缩短小鼠强迫游泳不动时间。本研究采用这两种实验观察豆腐果苷对小鼠行为绝望模型的影响，实验表明豆腐果苷能明显缩短小鼠悬尾不动时间和小鼠强迫游泳不动时间，具有一定的抗抑郁作用。

表3 豆腐果苷对强迫小鼠游泳实验的影响±SD，n=10)

注：与空白对照组相比，*P<0.05。

小鼠悬尾实验和强迫小鼠游泳实验是行为药理学实验中用于筛选和观察抗抑郁药物作用效果的可靠实验方法[9]。在小鼠悬尾实验中，悬尾小鼠为克服不正常的体位而挣扎活动，但随之陷入一动不动状态，小鼠在悬尾模型中的不动状态是其行为绝望和抑郁的表现。Porsolt等[10,11]在1977和1978年提出小鼠和大鼠的强迫游泳属于行为绝望模型实验，动物被迫在一有限的空间游泳，首先挣扎试图逃跑，随后处于一种漂浮不动的状态，显示为行为绝望，这种行为绝望状态被认为与抑郁症患者的症状相似。研究表明，当前大多数抗抑郁药能缩短这种不动状态时间，故这种模型被有效地应用于评价抗抑郁药的抗抑郁疗效。本研究采用了这两种经典的动物抑郁模型考察豆腐果苷的抗抑郁作用，结果表明，豆腐果苷可明显缩短悬尾实验和强迫游泳实验中小鼠的不动时间。豆腐果苷与丙咪嗪相比，其抗抑郁的作用时间更长，是一种有发展前景的抗抑郁新药。

抑郁症是一种危害人类身心健康的常见病，约13～20%的人一生中曾有过抑郁的体验，其终生患病率为6.1～9.5%。随着人们生活压力的加大和工作节奏的加快，会有更多的人感到紧张，疲劳和郁闷，发病率会进一步增加。虽然市场上已有很多类型的抗抑郁药可供选择，但若能从天然植物化学成分或其类似物中寻找及研制出疗效好，副作用小适合长期服用的抗抑郁药，将具有极大的社会效益和经济效益。抑郁症是全球性疾病，以显著的持续性情绪低落为主要特征的精神障碍，常伴有相应的思维和行为改变，目前药物治疗仍是抑郁病的主要治疗手段之一，随着长期使用现有治疗药的不良反应出现，期盼着更多更好的新药面世。豆腐果苷是一种安全有效的止痛、安眠和镇静药，具有一定的抗抑郁作用，连续服用未发现毒副作用，具有临床疗效好药物不良反应少等优点，其活性与金丝桃苷相当，药效恒定，日益受到医学专家的关注，具有潜在的药用价值，必将在临床治疗中发挥更大的作用。研究表明豆腐果苷具有显著的抗抑郁活性，其作用与其增强5-HT能神经系统功能有关，因此有必要对豆腐果苷的抗抑郁机制进一步研究，为豆腐果苷的新药开发奠定理论基础，使其发展成为一种成熟的抗抑郁药物。本研究采用小鼠悬尾实验和强迫小鼠游泳实验，探讨了豆腐果苷的抗抑郁作用，今后对其他动物模型的抗抑郁活性及作用机制还有待进一步研究。

1 Tamminga CA, Nemeroff CB, Blakely RD, et al. Developing novel treatments for mood disorders accelerating discovery[J]. Biol Psychiatry, 2002, 52(6): 589-609.

2 Adell A, Castro E, Celada P, et al. Strategies for producing faster acting antidepressants[J]. Drug Discov Today, 2005, 10(8): 578-585.

3 Chen WX, Luo SD, Breimaier E. Helicid, αβ-allopyranoside fromHeliciaerraticahook[J].LiebigsAnnChem, 1981, 10: 1893-1895.

4 沙静姝,毛洪奎. 豆腐果甙(昆明神衰果素)[J]. 药学通报, 1987, 22(1): 27-30.

5 刘苹,李建,纳冬荃,等. 母鼠妊娠期服用豆腐果苷对仔代神经行为学效应[J]. 中草药, 2002, 33(3): 238-242.

6ZhuQL,TangQ,LiY,etal.Synthesisandcalmactivityof[α-(2-Oxoalkyl)-α-(substitutedanilimo)methyl]phenyl-β-D-allopyranoside[J].ChinJOrganicChem, 2006, 26(9): 1264-1267.

7WangZ,HuLK,LuoZP,etal.Treamentforneuropathicpainofbenzaldehyde-O-β-D-arabinopyranoside[P].ChinesePatent:CN1634089, 2005, 07, 06.

8ButterweckV,WallA,Lieflnder-WulfU,etal.Effectsifthetotalextractandfractionsofhypericumperforatuminanimalassaysforantidepressantactivity[J].Pharmacopsychiatry, 1997, 30suppl2: 117-124.

9 张均田. 现代药理实验方法[M]. 北京: 北京医科大学, 中国协和医科大学联合出版社, 1997, 1061-1062.

10PorsoltRD,AntonG,BlavetN,etal.Behaviouraldespairinrats:anewmodelsensitivetoantidepressivetreatments[J].EurJPharmacol, 1978, 47(4): 379-391.

11PorsoltRD,BertinA,JalfreM.Behaviouraldespairinmice:aprimaryscreeningtestforantidepressant[J].ArchIntPharmacodynTher, 1977, 229(2): 327-336.

Study on antidepressant activity of helicid

Yang Min1,2

(1.Key Laboratory of Medicinal Chemistry for Natural Resource,Yunnan University,Yunnan Kunming 650091; 2. Institute of Flavour and Fragrance, Yunnan Agriculture University,Yunnan Kunming 650051)

Objective：To study the antidepressant effect of helicid on mice behavioral despair models. Methods: Sixty Kunming male mice were randomly divided into six groups (n=10). The helicid groups of four doses (20, 30, 40, 50 mg·kg-1); positive control group (Imipramine hydrochloride, IMI, 45 mg·kg-1); the control group (distilled water). The drug was given by intragastric administration. By observing for six minutes, the accumulative immobility time of the final five minutes of dose group and control group was recorded in the mice tail suspension test; the accumulative immobility time of the final four minutes of dose group and control group was recorded in the mice forced swimming test. The antidepressant effect of helicid was evaluated with mice tail suspension test and mice forced swimming test. Results: Compared with control group, Helicid 30 mg·kg-1significantly reduced the accumulative immobility time in mice tail suspension test (P<0.05). Helicid 30 and 50 mg·kg-1reduced the accumulative immobility time in the mice forced swimming test (P<0.05). Conclusion: Helicid has the significant antidepressant effect.

Helicid; Antidepressant; Tail suspension test; Forced swimming test

杨敏，女，助理研究员，主要从事药物的开发研究，Email：asmm1234@sina.com。

2016-11-20)