葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏对3种HbA1c检测系统结果的干扰评价*

胡耀宗，王伟佳，温冬梅，张德才，萧金丽，陈亚琼

(中山大学附属中山医院检验医学中心，广东中山 528403)

·临床检验技术研究·

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏对3种HbA1c检测系统结果的干扰评价*

胡耀宗，王伟佳，温冬梅，张德才，萧金丽，陈亚琼

(中山大学附属中山医院检验医学中心，广东中山 528403)

目的 观察葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏对糖化血红蛋白(HbA1c)检测结果的影响。方法 收集2012年8月至2016年4月中山大学附属中山医院286份标本，分别为健康组122例、糖尿病组82例、G6PD缺乏症组61例及糖尿病伴G6PD缺乏症组21例。用Primus Ultra2、Variant Ⅱ Turbo 2.0和Modular P 3种检测系统检测HbA1c，将HbA1c换算成估计平均血糖浓度(eAG)，计算与空腹血糖(FPG)的差值(△eAG-FPG)，对各组△eAG-FPG进行统计学分析。结果 G6PD缺乏组及糖尿病伴G6PD缺乏组在3个检测系统中的HbA1c、△eAG-FPG均偏低，且分别与健康组及糖尿病组差异有统计学意义(P均<0.05)。结论 G6PD缺乏均使Primus Ultra2、Variant Ⅱ Turbo和Modular P检测系统HbA1c结果假性偏低，临床医生用HbA1c评估G6PD缺乏人群血糖控制水平时，应注意G6PD缺乏所造成的影响。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶；糖化血红蛋白；估计平均血糖浓度；干扰

糖化血红蛋白(HbA1c)是评价糖尿病患者血糖监测情况的首选指标，美国糖尿病协会(ADA)提出HbA1c≥6.5%可作为糖尿病的诊断标准[1]。据文献报道[2]，HbA1c结果会受到某些因素如血红蛋白病、溶血性疾病等影响。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症是我国南方地区发病率较高的遗传性疾病，G6PD缺乏影响磷酸戊糖途径还原型辅酶Ⅱ(NADPH)生成，使还原型谷胱甘肽(GSH)生成减少，导致红细胞易受氧化损伤，引起溶血性贫血[3]。G6PD缺乏症患者患高血压及糖尿病风险更大[4]，据有关报道，G6PD缺乏是2型糖尿病的独立危险因素之一[5]。因此，对G6PD缺乏人群及糖尿病伴G6PD缺乏人群的HbA1c结果的准确性评价至关重要。本研究用国内常见3种HbA1c检测系统，对G6PD缺乏人群与糖尿病伴G6PD缺乏人群的HbA1c结果进行干扰评价。

1 材料与方法

1.1 标本来源 收集2012年8月至2016年4月中山大学附属中山医院患者和健康体检者全血和血清标本286例，分为健康组、糖尿病组、G6PD缺乏症组、糖尿病伴G6PD缺乏症组。其中，健康组122例，男62例，女60例，年龄20～80岁，中位年龄48岁；符合WHO 1999年诊断标准的糖尿病(DM)82例，男39例，女43例，年龄29～82岁，中位年龄52岁；符合G6PD活性<700 U/L的单纯G6PD缺乏症61例，男31例，女30例, 年龄2～72岁，中位年龄45岁；符合WHO 1999年诊断标准且G6PD活性<700 U/L的糖尿病伴G6PD缺乏症21例，男11例，女10例，年龄38～71岁，中位年龄49岁。以上研究对象血标本均不含血红蛋白变异体、高脂等干扰因素。

1.2 标本采集与处理 空腹采集2 mL静脉血，EDTA-K2抗凝，用于Hb、HbA1c和G6PD活性检测，所有收集的标本测定RBC、Hb和G6PD活性后-70 ℃保存，避免反复冻融。空腹采集3 mL静脉血于含促凝剂真空采血管，离心并分离血清，用于总胆红素(T-Bil)、尿素(Urea)、三酰甘油(TG)等检测。空腹采集2 mL静脉血，氟化钠抗凝，用于空腹血糖(FPG)检测。

1.3 检测系统与方法 Primus Ultra2全自动糖化血红蛋白分析仪及其配套试剂、校准品、质控品和配套消耗品(美国Trinity Biotech公司)，用硼酸盐亲和层析高效液相色谱法(affinity chromatography high performance liquid chromatography，AC-HPLC)检测HbA1c。Variant Ⅱ Turbo 2.0 全自动糖化血红蛋白分析仪及配套试剂、校准品、质控品和配套消耗品(美国BioRad公司)，用离子交换高效液相色谱法(ionexchange high performance liquid chromatography，IE-HPLC)检测HbA1c。Modular P全自动生化分析仪及配套HbA1c试剂、校准品、质控品和配套消耗品(瑞士Roche公司)，用免疫抑制比浊法检测HbA1c；G6PD试剂、校准品、质控品(北京利德曼公司)，用葡萄糖-6-磷酸底物法检测G6PD活性。Cobas 8000全自动生化分析仪及其配套试剂、校准品、质控品和配套消耗品(瑞士Roche公司)，用己糖激酶法检测空腹血糖(FPG)、用甘油磷酸氧化酶-过氧化氢酶(GPO-PAP)法检测TG、用尿素酶法检测Urea、用重氮法检测T-Bil。用XE 2100血液分析仪及其配套试剂、校准品、质控品(日本Sysmex公司)检测RBC、Hb。

1.4 实验方案 通过新鲜全血赋值的方法[6]实现3个系统检测结果的可比性，检测4组HbA1c水平，并用HbA1c换算出估计平均血糖浓度(estimated average glucose，eAG)[7]，eAG(mmol/L)=1.59×HbA1c-2.59，用eAG与FPG的差值与健康人群进行比较，评估G6PD缺乏对HbA1c的检测是否存在干扰。

2 结果

2.1 RBC、Hb、T-Bil、Urea、TG和FPG结果 见表1。健康组与单纯G6PD缺乏症组，糖尿病组与糖尿病伴G6PD缺乏症组的RBC、Hb、T-Bil差异均有统计学意义(P均<0.05)，Urea、TG、FPG差异均无统计学意义(P均>0.05)。

2.2 HbA1c和△eAG-FPG结果 见表2。健康组与单纯G6PD缺乏症组，糖尿病组与糖尿病伴G6PD缺乏症组在3个检测系统中HbA1c、△eAG-FPG差异均有统计学意义(P均<0.05)。

G6PD正常人群△eAG-FPG几乎均位于Y轴正方向，eAG比空腹血糖浓度高;而G6PD缺乏人群△eAG-FPG偏低，甚至出现负数，G6PD缺乏人群eAG水平偏低，即HbA1c水平偏低。见图1。

表1 4组研究对象RBC、Hb、T-Bil、Urea、TG和FPG结果

表2 4组研究对象HbA1c与△eAG-FPG结果

图1 4组样本3种检测系统检测的△eAG-FPG结果

3 讨论

脂血、黄疸、氨基甲酰化血红蛋白等因素会对HbA1c检测造成干扰[8]，而HbA1c检测的不同方法学抗干扰能力差异有别。本研究显示，健康组与G6PD缺乏症组，糖尿病组与糖尿病伴G6PD缺乏症组Urea、TG、FPG差异均无统计学意义(P均>0.05)，而T-Bil差异有统计学意义(P<0.05)。但本研究中3种HbA1c检测系统对黄疸标本的抗干扰能力较强，几乎不受黄疸的干扰[9]。

研究结果显示，G6PD缺乏组、糖尿病伴G6PD缺乏组分别与健康组、糖尿病组比较，3种检测系统检测HbA1c结果均偏低(P均<0.05)，初步认为G6PD缺乏使HbA1c结果降低。本研究收集的标本例数较少，所以用ADA推荐的公式计算eAG，利用eAG与患者血糖的差值比较，△eAG-FPG在3种检测系统中偏低，甚至为负数，即2组在3种检测系统HbA1c的检测值比理论值偏低，所以根据HbA1c换算后的eAG不能反映患者血糖平均水平。因此，我们认为G6PD缺乏导致HbA1c的检测受到负干扰，造成检测结果假性偏低。本研究结果说明G6PD缺乏患者无论是否合并糖尿病，其HbA1c水平都不能反映其真实血糖平均水平。至于HbA1c受到的干扰程度是否随G6PD活性下降而改变，有待进一步研究。

在G6PD缺乏症的高发地区，实验室工作人员和临床医生若发现HbA1c检测结果与血糖浓度不相关时，应确定是否存在G6PD缺乏，若存在G6PD缺乏应选用其他替代指标如糖化清蛋白(GA)、果糖胺(GSP)辅助判断血糖监测效果。

[1]Sack DB, Arnold M, Bakris GL,etal. Guidelines and recommendations for laboratory analysis in the diagnosis and management of diabetes mellitus Diabetes Care[J]. 2011,34(6): e61-99.

[2]涂国华, 姜旭淦. 糖化血红蛋白的研究现状与进展[J]. 临床检验杂志, 2011,29(8):605-608.

[3]陆小梅, 彭琪, 黎四平. 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症研究现状[J]. 国际儿科学杂志, 2014,41(4) :373-379.

[4]Gaskin RS，Estwick D，Peddi R. G6PD deficiency: its role in the high prevalence of hypertension and diabetes mellitus [J]． Ethn Dis，2001，11(4) : 749-754.

[5]Carette C, Dubois-Laforgue D, Gautier JF,etal. Diabetes mellitus and glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency: from one crisis to another[J]. Diabetes Metab, 2011, 37(1):79-82.

[6]温冬梅, 张秀明, 吴剑杨,等. 新鲜全血赋值传递实现不同HbA1c检测系统测定结果的溯源性和可比性[J]. 临床检验杂志, 2014, 32(10):790-792.

[7]Nathan DM, Kuenen J, Borg R,etal. Translating the A1C assay into estimated average glucose values[J]. Diabetes Care, 2008, 31(8):1473-1478.

[8]李卿, 居漪. 糖化血红蛋白A1c的检测方法和干扰因素[J]. 临床检验杂志, 2012，30(6):418-420.

[9]陈颖, 温冬梅, 张秀明,等. 四种方法检测糖化血红蛋白的干扰性能评价[J]. 临床检验杂志, 2013，31(10):786-787.

(本文编辑：王海燕)

Interference of glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency on measurements of glycated hemoglobin by three detection systems

HUYao-zong,WANGwei-jia,WENdong-mei,ZHANGde-cai,XIAOjin-li,CHENya-qiong

(ClinicalLaboratoryCenter,ZhongshanHospitalofSunYat-SunUniversity,Zhongshan528403,Guangdong,China)

Objective To observe the interference of glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) deficiency on glycated hemoglobin (HbA1c) detected by three measurement systems. Methods A total of 286 cases of blood and serum samples were collected at Zhongshan Hospital of Sun Yat-Sun University from August 2012 to April 2016. The blood samples were divided into healthy control group (122 cases), diabetes group (82 cases), glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency group (61 cases) and diabetes with G6PD deficiency group (21 cases). The levels of HbA1c were detected by three measurement systems, including Primus Ultra2, Variant Ⅱ Turbo 2.0 and Modular P. The results of HbA1c were converted into the estimated average blood glucose concentration (eAG). The values of △eAG-FPG in different groups were calculated and statistical analysis was performed for evaluation of the differences from the three measurement systems. Results The HbA1c results measured by the three systems and △eAG-FPG values in G6PD deficiency group were all lower than healthy control group(allP<0.05). The measured results were similar in both diabetes group and diabetes with G6PD deficiency group. Conclusion G6PD deficiency may cause false HbA1c results detected by three measurement systems. In the case of HbA1c for evaluating blood glucose control, the interference of G6PD deficiency should be noticed.

glucose-6-phosphate dehydrogenase; glycated hemoglobin; estimated average glucose; interference

中山市科技计划(20122A034)。

胡耀宗，1993年生，男，技师，大学本科，主要从事临床生物化学检验工作。

温冬梅，主任技师，E-mail：swan4130@163.com。

R446；R587.1

A

2016-08-04)