粉防己甲素缓释微球的制备及其释放度研究

宋艳博++刘轩++史一杰

【摘要】目的：制备粉防己甲素缓释微球制剂并探讨其释放特性。方法：以乙基纤维素为载体，分别考察乳化剂浓度，致孔剂用量，药物-载体质量比以及油水体积比对微球质量的影响，设计开发粉防己甲素缓释微球。结果：当乳化剂用量为10%，致孔剂用量2%，药物-载体质量比1∶3，油水体积比为6∶1时，制得的缓释微球在不同溶出介质中6h内完全释放，且无明显突释效应，具有良好的缓释作用。结论：制备的粉防己甲素缓释微球释放行为良好，是1种具有工业前景的缓释制剂。

【关键词】粉防己甲素；缓释微球；单因素考察；释放度

【中图分类号】R944【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）04-0017-03

Abstract：

Keywords：

粉防己甲素（Tetrandrine， TET） 又名粉防己碱、汉防己甲素，提取自千金藤属防己科植物粉防己的干燥块根中，属双苄基异喹啉类生物碱，具有抗心肌、脑、肾缺血，抗心律失常、降低门静脉高压、抗缺氧性肺动脉高压、抗肿瘤、抗肝、肺纤维化、抗炎等多种药理作用。临床上主要用于肝硬化门脉高压、矽肺等的治疗[1～2]。研究表明[3]，粉防己甲素为低溶解度高跨膜率药物，其溶解速率影响药物的吸收速度，且过高浓度会引起多重不良反应。将其制备成缓、控释制剂后，药物能够在体液作用下稳定溶解并释放，使得胃肠道中药物浓度稳定且迅速吸收，既增加药物在体内的滞留时间和生物利用度，同时减少药物因吸收-消除不平衡引起的不良反应，有利于增加患者的依从性[4]。既具有广阔的市场经济前景，同时也具有可观的社会收益。本研究以乙基纤维素为载体材料，采用单因素考察法优化处方，制备出粉防己甲素6h缓释微球，为开发粉防己甲素新制剂提供新的思路。

1仪器与材料

11仪器UV-2450紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；RCZ-8型智能溶试验仪（上海黄海药检仪器有限公司）；透析袋（MV：1000-3000，美国spectrum公司）；FA1004N电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；TGL-1613台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；DF-101S恒温磁力搅拌器（巩义市予华仪器有限责任公司）；WH-2微型涡旋混合仪（上海沪西分析仪器厂）。

12试药粉防己甲素（大连富生天然药物开发有限公司，批号：20130709）；乙基纤维素（山东聊城阿华制药有限公司）；氯化钠（天津市博迪化工有限公司）；Span60（天津市科密欧化学试剂有限公司）；无水乙醇（分析纯，天津永晟精细化工有限公司）；戊二醛50%水溶液（分析纯，沈阳市华东试剂厂）；磷酸二氢钾（天津市博迪化工有限公司）；磷酸氢二钾（天津市博迪化工有限公司）；去离子水（自制）。

2方法

21粉防己甲素標准溶液的配制精密称取干燥至恒重的粉防己甲素置于50 mL量瓶中，以0l mol/L盐酸溶液溶解并稀释，配制成浓度为05 mg/mL的储备液，4 ℃保存备用。

22粉防己甲素测定波长的确定将“21”项下标准溶液稀释成浓度为20μg/mL的粉防己甲素水溶液，按紫外-可见分光光度法[5]于200～400nm波长范围内进行扫描，结果见图1。粉防己甲素具有较强的末端吸收，此外，在279nm处另有最大吸收峰。由于末端吸收处受介质或其他杂质的紫外吸收影响较大，测定存在干扰，因此将279nm作为粉防己甲素测定波长。

23粉防己甲素标准曲线的建立精密量取05、10、15、20、30、40、50mL粉防己甲素标准溶液置于50mL量瓶中，用0lmol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，制得梯度浓度为5、10、15、20、30、40、50μg/mL的系列标准溶液，以pH68磷酸盐缓冲液替换盐酸稀释液，按上述浓度配制梯度浓度溶液，分别于279nm波长处测定吸光度，以吸光度（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标分别绘制标准曲线，得回归方程为（1）01mol/L盐酸溶液：A=00123C+00159，r=09991。（2）pH68磷酸缓冲溶液：A=00125C-00289，r=09993。由此可见，在50～500 μg/mL范围内，粉防己甲素溶液紫外吸光度（A）与浓度（C）呈良好的线性关系。

24粉防己甲素缓释微球的制备将处方量乙基纤维素、粉防己甲素和氯化钠分散溶解于乙醇中作为水相，将适量乳化剂Span60加入至液体石蜡中，作为油相，将水相注入至油相中，快速搅拌3min形成较为稳定的W/O型乳剂，缓慢滴加20%的戊二醛溶液适量，于温和搅拌下交联固化4h，减压抽滤收集微球初产品，所得微球用无水乙醚洗涤，丙酮脱水挥干，即得粉防己甲素-乙基纤维素微球。

25单因素考察法优化粉防己甲素缓释微球处方以“24”项下制备方法为基础，确定其他试验条件不变，分别考察不同乳化剂浓度，致孔剂用量，药物-载体质量比以及油水体积比对微球外观，分散性及包封率的影响。

26粉防己甲素缓释微球释放度测定取自制缓释微球适量（相当于主药含量20mg），采用250mL溶出介质（01 mol/L HCl，pH68磷酸盐缓冲溶液）；温度（37±05）℃；转速50r/min。依法操作，在设定时间点分别取样25mL，同时补加同体积溶出介质，08μm微孔滤膜过滤，取续滤液15mL置于5mL容量瓶中，用释放介质定容至刻度，按紫外分光光度法在279nm处测定吸光度，以外标法计算不同时间样品浓度，求算药物的累积释放百分率。

3结果

31单因素考察法优化粉防己甲素缓释微球处方

311乳化剂浓度对微球质量的影响改变Span60浓度为5%，10%，15%，固定其他工艺参数和处方用量不变，分别制备粉防己甲素缓释微球，观察微球的外观，分散性，测定其包封率，结果见表1。

由表1可知，乳化剂浓度为10%和15%时制得的微球外观基本呈规则球形，圆整度较好，但用量较少时，因成乳性较差，外观稍显不规则，包封率随乳化剂用量的增多，先增加后减少。说明乳化剂用量过大形成的乳滴不利于对药物的包裹，故选择乳化剂用量为10%。

表1乳化剂浓度对微球质量的影响

乳化剂浓度/%外观分散性包封率/%5形态不规则良好521410形态圆整良好676315形态较圆整良好4322

312致孔剂用量对微球质量的影响改变氯化钠用量分别为20%、25%、30%，固定其他工艺参数和处方用量不变，分别制备粉防己甲素缓释微球，观察微球的外观，分散性，测定其包封率，结果见表2。

由表2可知，微球的包封率随致孔剂用量的增加而减少，微球的圆整度随致孔剂用量的增大而不规则，最终选择致孔剂用量为20%。

表2致孔剂用量对微球质量的影响

致孔剂用量/%外观分散性包封率/%20形态圆整良好641225形态较圆整良好599430形态不规则良好5166

313药物-载体质量比对微球质量的影响以投药量20 mg/50 mL乳浊液为基准，改变乙基纤维素的用量，使药物-载体质量比为1∶1，1∶3，1∶5，固定其他工艺参数和处方用量不变，分别制备粉防己甲素缓释微球，观察微球的外观，分散性，测定其包封率，结果见表3。

表3药物-载体质量比对微球质量的影响

药物-载体质量比外观分散性包封率/%1∶1形态不规则粘连35121∶3形态较圆整良好63941∶5形态圆整部分粘连6615

由表3可知，随着载体质量的增加，微球的包封率不断增大，药物利用率提高，但当载体用量继续增大时，对药物包封率的影响减弱，因此选择药物-载体比为1∶3。

314油水体积比对微球质量的影响改变油水体积比为1∶1，3∶1，6∶1，固定其他工艺参数和处方用量不变，分别制备粉防己甲素缓释微球，观察微球的外观，分散性，测定其包封率，结果见表4。

由表4可知，随着油水体积比的增加，微球的包封率不断增大，外观形态更为规则圆整，因此选择油水体积比为6∶1。

表4油水体积比对微球质量的影响

油水体积比外观分散性包封率/%1∶1形态不规则粘连25363∶1形态不规则粘连33876∶1形态较圆整部分粘连6729

32处方优化确证由单因素考察结果优化制得三批微球，并对其进行外观、分散性，包封率及粒径的测定，结果显示三批微球外观及分散性良好，三批微球的平均包封率为6312%，粒径为213μm，含量为1741 mg/100 mg微球，处方优化良好。

33粉防己甲素缓释微球释放度测定体外释放度结果显示，分别以01 moL/L HCl，pH68磷酸盐缓冲溶液为释放介质时，药物粉末释放速度均快于缓释微球，受介质pH影响，01 moL/L HCl中药物释放极快，而粉防己甲素-乙基纤维素微球于6h内可缓慢释放完全，与原料药相比基本无突释效应。

4讨论

通过单因素考察试验筛选优化了粉防己甲素缓释微球的处方，其粒径大小主要受形成乳滴的粒径的影响，根据优选获得最佳制备条件，制备所得3个批次微球外观及分散性良好，平均粒徑为213μm，随后对粉防己甲素缓释微球在不同介质中的体外释放度进行了考察，释放行为良好，无明显突释效应，整个释放过程中缓释微球在不同介质中均可以缓慢释放，提示在体内条件下可以使药物在缓释时间内维持稳定血药浓度，起到控制药物缓慢释放作用。

由释放度结果可知，粉防己甲素在胃部溶解迅速，但多以离子形式存在，因此不利于药物的吸收，制成缓释微球后，药物的释放速率明显降低，可以保证大量药物以原型进入小肠部位释放并吸收。受小肠部位pH值影响，传统的治疗剂量下，药物会以固体形式或离子型药物再结晶的方式通过小肠段，导致药物浓度过低不易发挥治疗作用，制成缓释微球后，药物可以在整个小肠段缓慢释放药物，维持肠道内分子型药物浓度的稳定，有利于增加分子型药物在体内的吸收和滞留，从而提高药物疗效，如可以进一步开发，将成为既具有广阔的市场经济前景，也具有可观的社会收益的新一代粉防己甲素制剂。参考文献

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（收稿日期：2016-12-06编辑：梁志庆）