CD133 β-catenin及hTERT在胃癌组织中的表达及其临床关联性

戚红霞

(上海市静安区市北医院消化内科， 上海 静安区 200432)

CD133 β-catenin及hTERT在胃癌组织中的表达及其临床关联性

戚红霞

(上海市静安区市北医院消化内科， 上海 静安区 200432)

目的：研究CD133、β-catenin及hTERT在胃癌表达及其临床关联性。方法：采用免疫组织化学法分别检测从2015年2月至2016年3月，我院病理科收集的60例胃癌(A组)、60例癌前病变(B组)以及40例慢性非萎缩性胃炎(C组)组织标本中CD133、β-catenin及hTERT表达情况，并进行相关性分析。结果：免疫组化结果显示：CD133、β-catenin及hTERT在胃癌以及癌前病变中的阳性率均显著高于胃炎，差异有统计学意义(P＜0.05)，而胃癌中阳性率又显著高于癌前病变。A、B组的CD133、β-catenin及hTERT蛋白表达显著高于C组，而A组又显著高于B组，差异均有统计学意义(均P＜0. 05)；肿瘤组织中CD133蛋白、β-catenin蛋白以及hTERT蛋白在淋巴结转移中表达高于无淋巴结转移，而在浸润深度T3+T4中表达高于T1+T2中。差异均有统计学意义(均P＜0.05)。经相关性分析可得，CD133、β-catenin及hTERT蛋白表达水平均呈显著正相关。结论：CD133、β-catenin及hTERT的表达有胃癌发生、发展、浸润、转移均存在密切相关，可作为临床上早期诊断胃癌以及预后的参考指标。

胃 癌； 免疫组织化学； β-连环蛋白； 人端粒酶逆转录酶

本文通过研究CD133、β-连环蛋白(β-catenin)及人端粒酶逆转录酶(hTERT)在胃癌表达及其临床关联性，目的在于为临床早期诊断胃癌提供新的参考指标，并为胃癌早期治疗提供理论依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料：收集从2014年7月至2016年6月，我院手术切除并经病理诊断确诊的胃癌标本60例记为A组，其中男39例，女21例，年龄45～79岁，平均年龄59.8±5.1岁；其中发生淋巴转移26例，未发生淋巴转移34例；浸润深度为T1+T2的32例，T3+T4的28例，腺癌高中分化39例、低分化21例。另取同期内镜室活检病理明确的60例癌前病变标本(慢性萎缩性胃炎伴有大肠型化生或者轻、重度不典型增生)记为B组，其中男37例，女23例，年龄30～82岁，平均年龄57.2±5.1岁。同时再取40例慢性非萎缩性胃炎标本记为C组，年龄35～76岁，平均年龄55.7±5.1岁。其中男24例，女16例，三组标本在年龄、性别等基本资料对比无明显差异(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 研究方法：采用免疫组织化学法分别检测三组CD133、β-catenin及hTERT蛋白表达情况，具体方法如下：所有标本均进行石蜡切片脱蜡，并使用PBS代替Ⅰ抗作为阴性对照，其中兔抗CD133和兔抗hTERT试剂均购于武汉博士德生物工程有限公司，兔抗βcatenin购自abcam。且按照1：100比例稀释后进行。具体操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。采用DAB显色，苏木精复染，待其脱水至透明后，应用显微镜进行观察。

1.3 评价标准[1]：①CD133结果判定：胞膜上出现CD133染色为棕黄色物质为阳性细胞，随机选取4个不同高倍视野下200个细胞，按照阳性染色细胞百分率分为0分：无阳性细胞；1分：百分率≤5%；2分：百分率5%～10%；3分：百分率10%～15%；4分：阳性率＞15%。阳性细胞≥10%的为CD133阳性，＜10%为CD133阴性。②β-catenin结果判定：以正常黏膜的表达情况作为对照，β-catenin主要定位于细胞膜，微量定位于细胞浆。染色结果判断标准为分别观察细胞膜、细胞浆和细胞核的着色情况，将染色出现的范围记为0-3分：0分为细胞膜、细胞质及细胞核均未着色，1分为细胞膜染色为主，2分为细胞质染色为主，3分为异质性染色(细胞膜、细胞质混合染色)或细胞核染色。将染色强度记为0-3分，无色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，暗褐色为3分。得分=染色范围X染色强度。免疫组化阳性表达信号为棕黄色细小颗粒状，分别从细胞膜、细胞质、细胞核三方面判断β-catenin在细胞内的分布特征：若＜7O%癌细胞细胞膜阳性表达或＞10%癌细胞细胞质、细胞核阳性表达则取结果为阳性(异常表达)。而≥70%的细胞膜阳性表达且≤10%的细胞质、细胞核出现阳性表达为阴性(正常表达)。③hTERT结果判定：以切片中细胞核、细胞浆出现明确的棕黄色或淡黄色颗粒为阳性细胞，随机选取4个不同高倍视野下200个细胞，按照阳性染色细胞百分率分为0分：百分率＜10%；1分：百分率10%～25%；2分：百分率25%～50%；3分：百分率＞50%。此外，根据染色强度分为0分：无色；1分：浅黄色；2分：棕黄色；3分：棕褐色。得分=染色范围×染色强度。0 ～2分为阴性，＞2分为阳性表达。

1.4 统计学方法：采用SPSS21.0统计软件分析。计数资料比较采用χ2检验，计量资料以均数±标注差(±s)表示，其比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组病理学分析

免疫组化染色：CD133组：胞膜上出现CD133染色为棕黄色物质为阳性细胞。4个不同高倍(×400)光学显微镜下计数200个癌细胞，阳性细胞≥10%的为CD133阳性。

图1 ∗胃癌组织中CD133阳性率为81.67%(49/60)；∗胃炎组织中CD133阳性率为17.5%(7/40)；∗癌前病变组织中CD133阳性率为60.00%(36/60)；∗(癌前病变组织与胃炎组织比较：χ2=19.000，p=0.000)

图2 ∗胃癌组织中β-catenin阳性率为73.33%(44/60)；∗胃炎组织中β-catenin阳性率为15.0%(6/40)；∗癌前病变组织中β-catenin阳性率为61.67%(37/60)；∗(癌前病变组织与胃炎组织比较：χ2=24.242，p=0.000)

图3 ∗胃癌组织中hTERT阳性率为61.67%(37/60)；∗胃炎组织中hTERT阳性率为10.0%(4/40)；∗癌前病变组织中hTERT阳性率为31.67%(19/60)；∗(癌前病变组织与胃炎组织比较：χ2=6.362，p=0.012)

2.2 三组CD133、β-catenin及hTERT蛋白表达情况对比：A、B组的CD133、β-catenin及hTERT蛋白表达显著高于C组，而A组又显著高于B组，差异均有统计学意义(均P＜0.05)，见表2。结转移，在浸润深度T3+T4中表达高于T1+T2中。差 异均有统计学意义(均P＜0.05)，见表3。

表2 三组CD133 β-catenin及hTERT蛋白表达对比(n，s))

表2 三组CD133 β-catenin及hTERT蛋白表达对比(n，s))

组别 例数 CD133 β-catenin hTERT A组 60 1.442±1.215 3.264±1.842 3.974±1.543 B组 60 0.847±0.835 1.639±1.293 2.338±1.345 C组 40 0.327±0.141 1.442±0.957 1.184±0.922 F -7.529 11.612 14.801 P -0.000 0.000 0.000

表3 CD133蛋白在胃癌中表达(n，s))

表3 CD133蛋白在胃癌中表达(n，s))

临床病理参数 例数 CD133表达水平 t P性别 男 39 1.472±1.422 0.181 0.857 21 1.405±1.249年龄 ≤60岁 32 1.463±1.305 0.132 0.896 ＞60岁 28 1.417±1.266淋巴结转移 有 26 2.265±1.147 3.215 0.002 无34 1.187±1.384分化程度 高中分化 39 1.412±1.356 0.166 0.868低分化 21 1.472±1.284浸润深度 T1+T2 32 0.000±0.000 7.699 0.000 T3+T4 28 1.559±1.274 女

2.4 β-catenin蛋白在胃癌中表达情况：结果显示，肿瘤组织中β-catenin蛋白在淋巴结转移中表达高于无淋巴结转移，在浸润深度T3+T4中表达高于T1+T2中。差异均有统计学意义(均P＜0.05)，见表4。

表4 β-catenin蛋白在胃癌中表达(n，s))

表4 β-catenin蛋白在胃癌中表达(n，s))

临床病理参数 例数 β-catenin表达水平 t P性别 男 39 3.468±2.038 0.172 0.864 21 3.374±1.987年龄 ≤60岁 32 3.164±2.148 0.492 0.625 ＞60岁 28 2.894±1.781淋巴结转移 有 26 4.332±2.013 3.899 0.000 无34 2.478±1.669分化程度 高中分化 39 3.275±2.173 0.369 0.714低分化 21 3.482±1.874浸润深度 T1+T2 32 2.148±1.537 4.741 0.000 T3+T4 28 4.322±2.008 女

2.5 hTERT蛋白在胃癌中表达情况：结果显示，肿瘤组织中hTERT蛋白在淋巴结转移中表达高于无淋巴结转移，在浸润深度T3+T4中表达高于T1+T2中。差异均有统计学意义(均P＜0.05)，见表5。

表5 hTERT蛋白在胃癌中表达情况(n，s))

表5 hTERT蛋白在胃癌中表达情况(n，s))

临床病理参数 例数 hTERT表达水平 t P性别 男 39 4.264±1.587 0.751 0.456 21 3.949±1.475年龄 ≤60岁 32 4.147±1.485 0.294 0.770 ＞60岁 28 4.038±1.375淋巴结转移 有 26 4.471±1.502 2.874 0.006 无34 3.243±1.518分化程度 高中分化 39 3.842±1.342 1.314 0.194低分化 21 4.325±1.389浸润深度 T1+T2 32 2.341±1.162 5.874 0.000 T3+T4 28 4.305±1.427 女

2.6 CD133、β-catenin及hTERT蛋白表达水平的相关性分析：经相关性分析可得，CD133、β-catenin及 hTERT蛋白表达水平均呈显著正相关，见表6。

表6 CD133 β-catenin及hTERT蛋白表达水平的相关性分析

3 讨 论

近年来，随着人们生活方式以及饮食习惯的不断改变，我国胃癌发病率呈逐年上升趋势，严重威胁人们的生命健康[2]。有研究报道显示，临床上首次就诊的胃癌患者中，早期诊断率＜10%，其中85%以上患者为中晚期。导致这一结果发生的原因较多，但最主要的原因之一是临床上缺乏特异性、敏感性较高的生物学指标。目前，人们对胃癌及其癌前病变的研究日益重视，并取得一定的进展。但胃癌的发生属于多基因、多因素以及多阶段长期作用的复杂过程，因此其具体的发病机制尚未完全明确。随着相关研究的不断深入，有报道显示，胃癌发生、发展过程中均伴有不同程度的癌基因异常激活与过度表达，提示了两者存在密切相关[3]。而本文通过研究CD133、β-catenin及hTERT在胃癌表达及其临床关联性，旨在寻找一种可有效诊断癌前病变或早期胃癌的诊断指标，并为临床治疗提供新思路，进一步提高患者临床预后以及生存率。

本文通过研究，结果发现 CD133、β-catenin及 hTERT三组在胃癌(A组)、癌前病变(B组)、慢性非萎缩性胃炎(C组)中的免疫组化阳性率存在明显区别，A、B组阳性率显著高于C组(P＜0.05)，且A组高于B组；同样在A、B组的CD133、β-catenin及hTERT蛋白表达水平显著高于C组，而A组又显著高于B组。这与魏青林等的研究报道相似[4]，提示了CD133、β-catenin及hTERT蛋白表达参与了胃癌的发生、发展，可作为胃癌早期检测的指标。其中CD133属于跨膜蛋白的一种，尽管目前对于其具体的生物学功能尚未明确，但随着研究的不断深入，近年来陆续研究报道表明其是一个最有价值的可用于筛选肿瘤干细胞的标志物之一，其主要特征是于胃癌胃旁组织以及原发组织中均有较高的表达。而β-catenin属于一种多功能的蛋白质，主要作用是参与了调节成骨细胞、内皮细胞以及成纤维细胞等多种细胞的增殖、分化以及凋亡等，且在其中发挥着至关重要的作用。且有研究报道显示，β-catenin/TCF4属于一种经典的Wne通路，主要作用于胚胎发育过程中，且还与多种组织干细胞进行自我更新与分化，与多种人类疾病的发生发展存在密切关联[5]。hTERT与细胞端粒酶的活性息息相关，其中hTERT是构成端粒酶复合物的活性成分催化亚单位，亦是端粒酶活化过程中的一种限制酶，主要是在端粒酶的激活以及肿瘤的发生发展中起关键性作用。在本组研究中，CD133、β-catenin及hTERT三组在胃癌患者年龄、性别以及腺癌的分化程度之间无明显差异，而肿瘤组织中CD133蛋白、β-catenin蛋白以及hTERT蛋白在淋巴结转移中表达高于无淋巴结转移，而在浸润深度T3+T4中表达高于T1+T2中。这符合刘阳等的研究报道，表明了CD133、β-catenin及hTERT蛋白表达与胃癌的转移及浸润程度存在密切相关，可作为检测胃癌的预后的指标之一。另外经相关性分析可得，CD133、β-catenin及hTERT蛋白表达水平均呈显著正相关。这提示了三者可能存在协同作用，一起促进胃癌的发生、发展，应受到临床重视，对其作用机制进行更加深入的研究。

[1] Gonzalo V.Telomerase mRNA expression and immunohistochenical detection as a biomarker of malignant transfornation in patients with infalmmatory bowel disease[J].Gastroenterol Hepatol，2010，33(4)：288～296.

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[3] 潘杰，汪伟民，蔡炜龙，等.下调gankyrin通过调节β-catenin/cyclin D1信号通路抑制胃癌细胞增殖[J].胃肠病学，2016，21(5)：282～286.

[4] 魏青林，张丹，杨仕明，等.端粒酶逆转录酶和Gli1、Gli2在胃癌中的表达及意义[J].第三军医大学学报，2015，37 (9)：902～906.

[5] 王一曌，郭琳，刘乙蒙，等.Rack1与β-catenin在胃癌组织中的表达与临床意义[J].中国生化药物杂志，2016，36 (3)：30～33.

Expression of CD133 β-catenin and hTERT in Gastric Carcinoma and the Clinical Relevance

QI Hongxia

(Jing'an District Central Hospital，Shanghai Jing'an District200432，China)

Objective：To study the expression of CD133，β-catenin and hTERT in gastric carcinoma and the clinical relevance.Methods：CD133 β-catenin and hTERT expression in tissue samples of 60 cases of gastric cancer(group A)，60 cases of precancerous lesions(group B)and 40 cases of chronic non-atrophic gastritis(group C)admitted in our hospital from February 2015 to March 2016 were detected by immunohistochemical method and analyzed.Results：The results of immunohistochemistry showed that the positive rates of CD133，β-catenin and hTERT in gastric cancer and precancerous lesions were significantly higher than those in gastritis，the difference was statistically significant(P＜0.05)，while the positive rate of gastric cancer was significantly higher than that of cancer precancerous lesion.The expression of A，B group CD133，β-catenin beta and hTERT protein was significantly higher than that in group C，while the A group was significantly higher than that in B group，the differences were statistically significant(P＜0.05)；CD133 protein in cancer tissues，β-catenin protein and hTERT protein in higher than that without lymph node metastasis in lymph node metastasis and expression.In the depth of invasion in T3+T4 was higher than that in T1+T2.The difference was statistically significant(P＜0.05).The correlation analysis showed that the expression levels of CD133，β-catenin and hTERT were positively correlated.Conclusion：The expression of CD133，β-catenin and hTERT are closely related to the stomach cancer occurrence，development，invasion and metastasis，which can be used as a clinical reference indexes of early diagnosis and prognosis of gastric cancer.

Gastric cancer； Immunohistochemistry； β-chain protein； Human telomerase reverse transcriptase

A【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2017.01.008

1006-6233(2017)01-0022-06

上海市闸北区卫生科研面上一般项目，(编号：2014MS04)