Ghrelin基因多态性与原发性高血压患者危险因素的关系研究

刘 斌， 周志安， 刘丽丽， 姜 敏， 高 磊， 金明磊

(1.河北省沧州市人民医院心内科， 河北 沧 州 061000 2.河北省承德市中心医院， 河北 承 德 067000 3.河北省定州市人民医院， 河北 定 州 073000 4.河北医科大学第一医院， 河北 石家庄 050011)

Ghrelin基因多态性与原发性高血压患者危险因素的关系研究

刘 斌1， 周志安2， 刘丽丽3， 姜 敏3， 高 磊4， 金明磊2

(1.河北省沧州市人民医院心内科， 河北 沧 州 061000 2.河北省承德市中心医院， 河北 承 德 067000 3.河北省定州市人民医院， 河北 定 州 073000 4.河北医科大学第一医院， 河北 石家庄 050011)

目的：探讨人生长激素释放多肽(Ghrelin)基因多态性与原发性高血压患者危险因素的关系及其机制。方法：2014年10月至2015年10月选取80例原发性高血压患者进行研究，另选取80例健康体检者为对照组，采用TaqMan-PCR法测定两组Ghrelin基因多态性，并分析Ghrelin基因多态性与高血压患者高危因素的关系。结果：与对照组相比，高血压组患者CC、CA、AA型基因频率分布为68. 75%、17.50%、13.75%，等位基因C、A频率分别为0.185、0.875，对照组分别为18.75%、35.00%、46.25%，等位基因C、A频率分别为0.125、0.815。Ghrelin基因CC型高血压患者血清甘油三脂(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、总胆固醇(TG)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、腰臀比(WHR)、体质量(BMI)水平显著高于CA型及AA型(P＜0.05)，而HDL-C低于CA型及AA型(P＜0.05)。经卡方及Logistic多因素分析，Ghrelin基因CC型与TC异常、LDL-C异常、SBP异常、DBP异常、BMI异常有关。结论：Ghrelin基因多态性与导致高血压的高危因素，如TC异常、LDL-C异常、SBP异常、DBP异常、BMI异常等有关，因此，Ghrelin基因多态性可能参与原发性高血压的发病机制。

Ghrelin基因多态性； 高血压； 低密度脂蛋白； 发病机制

本研究将探讨Ghrelin基因多态性与高血压患者高危因素的关系及其机制，旨在为临床高危高血压患者临床防治提供指导。

1 资料与方法

1.1 临床资料：2014年10月至2015年10月选取80例原发性高血压患者为高血压组，纳入标准：①我国2010年修订的《高血压防治指南》诊断标准[1]；②均为汉族人群；③均签署知情同意书，愿意配合调查研究。排除标准：①近期应用过甲氨蝶呤、叶酸、茶碱、维生素B6、维生素B12等药物；②合并脑卒中、糖尿病或心肝肾功能不全者；③恶性肿瘤或慢性肾病所致的继发性高血压者。男45例，女35例，年龄18～75岁，平均(48.8±3.4)岁；另选取80例健康体检者为对照组，患者经心、肝、脑、肾及血液系统等检查证实为身体健康，男43例，女37例，年龄18～72岁，平均(48.2±3.6)岁，两组性别、年龄比较无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方 法

1.2.1 收集受试者临床资料：记录两组性别、年龄、体质量(BMI)、腰臀比、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)。受试者于立体位测量腰围及臀围，腰围、臀围应用刻度为0.1cm的软皮尺测量，腰臀比(WHR)=腰围/臀围。应用台式血压计测量患者血压，受试者取坐位，于静息状态下向袖带内充气，同时触诊肱动脉，待脉搏消失后，汞柱继续升高20～30mmHg后缓慢放气，听到第一次声响时为汞柱收缩压，声音消失后为汞柱舒张压。

1.2.2 生化指标测定：空腹状态下抽取两组静脉血，离心处理后应用全自动化生化分析仪测定两组甘油三脂(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、总胆固醇(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)。

1.2.3 Ghrelin基因多态性测定：①两组患者均抽取静脉血3mL，应用盐析法提取DNA，待DNA溶解于TE溶液后，测定其在280nm下的分光光度植，并计算每个样本浓度及纯度，根据所需要的浓度将DNA原液稀释至合适浓度工作液；②设计DNA引物：上游引物序列5’-GCTCCGGTAGGTCACG-3’；下游引物序列5’-CCTGGGTCAAGTGTCGGAG-3’；③PCR反应体系：分别在DNA样本中加入2μL模板DNA，4μL上游引物，4μL下游引物，2μLdNTs，5μL10×PCR buffer，32.5μL，0.5μL Taq Polymerase；④PCR扩增条件：样液在94℃中预变性5min，然后变性 45s，退火61℃ 45s，延伸72℃ 45s，末端延伸72℃ 5min，并在退火阶段收集荧光信号。⑤采用荧光定量PCR仪测定TapMan探针上的FAM荧光信号。等位基因频率=(2×纯合子+杂合子)/(2×受体人数)。按照Hardy-Weinberg平衡法对群体代表样本进行分析。

1.3 统计学方法：基因型分布频次及频率应用χ2检验，计量资料中符合正态分布的数据应用数标准差(±s)表示，采用t检验，应用多元Logistic回归分析Ghrelin基因多态性与高血压危险因素的关系，P＜0.05具有统计学意义。

2 结 果

2.1 高血压与对照组基因型及频次对比：与对照组相比，高血压组患者CC、CA、AA型基因频率分布为68. 75%、17.50%、13.75%，等位基因C、A频率分别为0. 185、0.875，对照组分别为18.75%、35.00%、46.25%，等位基因C、A频率分别为0.125、0.815，见表1。

表1 高血压与对照组基因型及频次对比n(%)

2.2 原发性高血压患者不同基因型相关危险因素对比：Ghrelin基因CC型高血压患者血清TC、LDL-C、TG、SBP、DBP、WHR、BMI水平显著高于CA型及AA型(P＜0.05)，而HDL-C低于CA型及AA型(P＜0. 05)，CA型与AA型在各指标的比较上无统计学意义(P＞0.05)，见表2。

表2 原发性高血压患者不同基因型相关危险因素对比(s)

表2 原发性高血压患者不同基因型相关危险因素对比(s)

基因型 TC (mmoL/L) TG (mmoL/L) LDL-C (mmoL/L) HDL-C (mmoL/L) SBP (mmHg)(mmHg) WHR BMI (kg/m) DBP CC型 5.26±0.88 4.89±0.70 4.42±0.69 0.98±0.85 158.34±0.69 88.93±.0.82 84.23±0.93 28.93±2.45 CA型 3.22±0.76 3.52±0.58 3.41±0.71 2.58±0.69 139.9±0.72 72.62±0.88 77.22±0.97 25.85±2.12 AA型 3.08±0.74 3.11±0.60 3.28±0.73 2.39±0.70 141.2±0.70 71.99±0.86 76.98±0.93 24.98±2.09 F 8.256 7.562 8.399 6.852 5.363 6.425 7.225 8.963 P 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

2.3 Ghrelin基因多态性与相关危险因素的关系：以BMI＜24.0kg/m2为正常，≥24.0kg/m2为异常；以TC＜220mg/dl为正常，≥220mg/dl为异常；LDL-C＜105mg/ dL为正常，≥105mg/dL为异常，TG＜150mg/dl为正常，≥150mg/dL为异常，HDL-C＞55mg/dl，≤55mg/dl，以WHR(男/女＜0.95/0.8)为正常，WHR(男/女)≥0. 95/0.8为异常。以Ghrelin基因CC型基因型为因变量，以相关危险因素异常值为自变量进行Logistic多因素分析，Ghrelin基因CC型与TC异常、LDL-C异常、SBP异常、DBP异常、BMI异常有关(P＜0.05)，见表3。

3 讨 论

血浆中Ghrelin主要由胃黏膜分泌，并可促进下丘脑中枢释放促生长激素，从而发挥促进脂肪形成、调节摄食、增加营养物质摄取等多方面作用[2]。近年发现，机体能量代谢水平的改变会影响Ghrelin分泌，在外周组织如冠状动脉、主动脉、心肌及肺动脉组织中均表达Ghrelin受体，这提示Ghrelin可通过非生长激素依赖的方式调节心血管效应。Virdis等[3]表明，高血压患者中血浆Ghrelin水平显著高于正常人群，且Ghrelin水平与血压水平呈正相关，这提示Ghrelin可能参与血压调节。Gibas-Dorna等[4]研究指出，影响Ghrelin在高血压中的作用主要与其基因启动子区单核苷酸(Arg51Gln)上的A等位点向C等位点突变有关。Ghrelin中不同基因型的Arg51Gln C/A其对Ghrelin调控作用也不同，AA基因调控的Ghrelin具有舒张血管及维持血压稳定的作用，而CC基因调控的Ghrelin具有收缩血管及升高血压的作用。AC基因型一般情况下不表达，但当外界一些不利因素刺激下可向CC基因转变，从而起到收缩血管及升高血压的作用。本研究中高血压组患者Arg51Gln位点中CC型比例显著高于对照组(P＜0.05)，从而表明Arg51Gln位点中CC型与高血压的发生有密切的关系。

表3 Ghrelin基因多态性与相关危险因素的关系

为进一步了解Ghrelin不同基因型与高血压患者相关代谢指标的关系，本研究测定了高血压患者血脂、体质量、腰臀比等相关指标，结果显示，Ghrelin基因CC型高血压患者血清 TC、LDL-C、TG、SBP、DBP、WHR、BMI水平显著高于CA型及AA型(P＜0.05)，且经Logistic多因素进一步分析可知，Ghrelin基因CC型与TC异常、LDL-C异常、SBP异常、DBP异常、BMI异常有关(P＜0.05)，表明Ghrelin基因多态性除了与血压异常有关外，还与机体血脂代谢异常有密切的关系。从本实验中可推出Ghrelin-Arg51Gln基因多态性对高血压的可能作用机制如下：①高血压的发生是由多因素共同参与的结果，该病发生除了与遗传因素有关外，还与后天所在环境、饮食、生活习惯等因素有关。Ghrelin-Arg51GlnA/C可通过调节血脂代谢过程从而影响血压水平。血脂代谢异常及紊乱是由遗传因素与环境因素共同作用所致，由于血脂代谢紊乱会影响高血压水平，因此可推测两者是由相同的基因进行调控的，相互作用相互影响。血脂异常会增加血液粘稠度，使得血管管腔变窄，导致血流变慢，使得血压升高。②血脂代谢紊乱会影响细胞膜结构及膜上钙离子转运，影响细胞膜生化性质，影响细胞膜流动性及钙离子通道，破坏血管正常生理结构，导致血压升高。(3)血脂代谢紊乱会损伤血管内皮细胞功能，并会影响脂质过氧化代谢途径，从而影响机体中NO及血管前列腺素生成，促使血栓烷、内皮素等收缩血管性物质大量释放，导致血压增加。

[1] 中国高血压防治指南修订委员会.中国高血压防治指南2010[J].中华心血管病杂志，2011，39(7)：579～616.

[2] 张莹丽，尹虹.Ghrelin与代谢综合征[J].中华临床医师杂志(电子版)，2015，(7)：1198～1200.

[3] Virdis A，Duranti E，Colucci R，et al.Ghrelin restores nitric oxide availability in resistance circulation of essential hypertensive patients：role of NAD(P)H oxidase[J].Eur Heart，2015，36(43)：3023～30

[4] Gibas-Dorna M，Nowak D，Piatek J，et al.Plasma ghrelin and interleukin-6 levels correlate with body mass index and arterial blood pressure in males with essential hypertension[J]. Physiol Pharmacol.2015，66(3)：367～372.

The Relationship between Ghrelin Gene Polymorphism and Essential Hypertension in Patients with Risk Factors

LIU Bin， et al

(The People's Hospital of Cangzhou，Hebei Cangzhou061000，China)

Objective：To investigate the relationship between the human growth hormone releasing peptide(Ghrelin)and the essential hypertension.Methods：80 cases of patients with essential hypertension were studied and 80 cases of healthy were selected from October 2014 to October.The Ghrelin gene polymorphism assays of two groups were used with TaqMan-PCR method and Ghrelin gene polymorphism in patients with risk factors for hypertension were analyzed.Results：Compared with the control group，patients with hypertension CC，CA，AA genotype frequency distribution was 68.75%，17.50%，13.75%，allele C，A frequencies were 0.185，0.875，the control group were 18.75%，35.00%，46.25%，allele C，a frequencies were 0.125，0.815. Ghrelin gene CC type serum triglycerides in patients with hypertension(TC)，low density lipoprotein(LDLC)，total cholesterol(TG)，systolic blood pressure(SBP)，diastolic blood pressure(DBP)，waist-hip ratio (WHR)，body mass(BMI)were significantly higher than those of CA and AA genotype(P＜0.05)，whereas HDL-C and lower than the CA type AA type(P＜0.05).Chi square and Logistic multivariate analysis showed that the Ghrelin gene type CC was associated with TC abnormalities，LDL-C abnormalities，SBP abnormalities，DBP abnormalities，and BMI abnormalities.Conclusion：Ghrelin gene polymorphism and risk factors lead to high blood pressure，such as abnormal TC，LDL-C exception，SBP abnormality，DBP abnormality，BMI and abnormal，and therefore，Ghrelin gene polymorphism may be involved in essential hypertension pathogenesis.

Ghrelin gene polymorphism； Hypertension； Low-density lipoprotein； Pathogenesis

1006-6233(2017)01-0013-04

A【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2017.01.005

河北省科技支撑项目，(编号：ZL20140072)