高效液相色谱分类及工作原理

张旦亚 杨吉兴(浙江龙盛化工研究有限公司，浙江绍兴312300)

高效液相色谱分类及工作原理

张旦亚 杨吉兴(浙江龙盛化工研究有限公司，浙江绍兴312300)

随着我国科学技术的快速发展，我国高效液相色谱也随之得到了一定的发展。色谱法就是利用混合物中的各组分在流动相与固定相中分配系数的不同，进行连续反复多次的分配，从而形成差速运动，达到分离的效果。高效液相色谱法是一种新型的分离分析技术。文本主要介绍了高效液相色谱法的分类及工作原理。

高效液相色谱；分类；工作原理；分配色谱法

高效液相色谱法是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，通过高压输液系统，把不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。高效液相色谱已经有将近三十的发展历史，在色谱原理研究、仪器水平、离子分离分析方面有了很大的进步。文本主要介绍了高效液相色谱分类及工作原理。

1 高效液相色谱概念界定及分类

1.1 高效液相色谱概念界定

高效液相色谱——高效液相色法，它是一种与经典液相色谱完全不同的，一种基于仪器方法的高效能的分离方法。高效液相色谱十一局气相色谱理论发展起来的新技术。它被广泛应用于医学药物、环境保护、食品加工、农业种植等方面。但是，由于高效液相色谱法是一种新型的高效能分离技术，在应用上还不是很成熟，仍然处于发展阶段。高效液相色谱的仪器配置包括：色谱泵及控制器、色谱柱、检测器、进样器、数据处理及控制。它采用高压输液泵，高效微粒固定相和高灵敏度检测器进行分析。它的主要特点是：快速、高效、灵敏度强、样品回收利用比较简单。

1.2 高效液相色谱分类

高效液相色谱主要分为以下几类，第一类，液-液分配色谱法，在液-液分配色谱中，流动相与固定相都是液体，它可以适用于所有保养品的分离分析；第二类，液-固吸附色谱，它把固体吸附剂作为固定相。液-固吸附色谱的本质就是依据所测样品在固定固定相上的吸附作用的不同进行分离；第三类，离子交换色谱法，通过离子交换原理和液相色谱相结合对溶液中的阳离子和阴离子进行测定；第四类，离子对色谱，它被广泛应用于强极性有机碱和有机酸的分离分析；第五类，离子色谱法；第六类，空间排阻色谱法，它主要适用于比较大的分子的分离。文本主要对几种常见的常见高效液相色谱进行全面分析介绍，常见的常见高效液相色谱有分配色谱法、吸附色谱法、离子交换色谱法和凝胶色谱法。

2 几种比较常见的高效液相色谱工作原理

2.1 分配色谱法

分配色谱法是常见高效液相色谱种应用最为广泛的一种分离分析方法。它的工作原理是，通过两种完全不相溶的液相，也就是使固定相与流动相按照它们各自的溶解度进行分配。分配色谱法又分为液-液色谱与键合相色谱。液-液色谱通过物理吸附的原理把液相固定相涂抹于所测物品表面。而键合相色谱则是根据化学反应使有机分子键合在所测物品或者是硅胶表面上。在分配色谱中，需要依据溶质、固定相和流动相之间分子的分离作用力对流动相和固定相进行选择。

2.2 吸附色谱法

吸附色谱法又叫液固色谱，顾名思义也就是把固体吸附剂作为固定相。这类固体吸附剂大部分都是一些孔比较多的固体颗粒物，由于这些固体颗粒物表面有很多小孔，所以便于吸附。吸附色谱的工作原理是依据所测物品在固定相上的作用不同进行分离分析。一般会选用氧化铝、聚酰胺、硅胶等具有吸附活性的化学物品作为固体吸附剂。吸附色谱的显著特点就是操作简单，比较适用于分离一些溶解在非极性溶剂中并且具有中等相对分子质量是非离子性的物品分离，比如几何异构体。

2.3 离子交换色谱法

离子交换色谱就是通过被分离物质在离子交换树脂上的离子交换势不相同导致组分分离。比较常见的离子交换剂有，纤维素、合成树脂及硅胶。硅胶不但可以适用于分配色谱，还可以使用离子交换色谱。离子交换色谱工作原理是通过分离离子化合物、有机碱和有机酸等可以电离的化合物和离子基团容易相互作用的化合物，进行分离。

2.4 凝胶色谱法

凝胶色谱法还可以称为尺寸排斥色谱，其工作原理是根据所测物品分子尺寸大小和形状的不同进行分离。凝胶色谱之所以又叫尺寸排斥色谱，是因为凝胶空穴的大小是与所测物品被分离分子的大小大致相吻合的。如果分子太大就会被阻挡在空穴外面，被排斥在外面。而小分子就会进入空穴。一般我们会选用琼脂糖凝胶作为填充材料。同时，流动相也有选择功能，它可以根据载体和所测物品的本质特点决定是选用水或者有机溶剂。除此之外，凝胶色谱的分辨力很高，一般情况下不会发生变性，所以一般会被用来分离分子量比较高的化合物。

3 结语

高效液相色谱虽然几经有了三十年的发展历史，但是在发展的还不算完善，在一定程度上仍然存在一定的缺陷。本文详细分析介绍了高效液相色谱的分类以及工作原理，希望可以加深人们对高效液相色谱的人是与理解，让高效液相色谱更好的为人类服务。高效液相色谱的发展任重而道远，我们必须不断的实践，在实践中总结经验教训，不断优化改造高效液相色谱法。让科学技术带动我国的经济发展。所以，对高效液相色谱的分析与研究对我国各方面的发展都有积极的意义。

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