柿拟盘多毛孢菌的生物学特性研究

章一鸣+何永宏+邱有尚+周志斌+丁榆+韩有魁

（1.湖州职业技术学院艺术与设计学院，浙江湖州 313000；2.云南省保山市隆阳区果树蔬菜技术推广站，678000；3.云南农业大学，云南昆明 650201）

摘 要 通過实验，对甜柿黑腐病病原菌进行生物学特性进行研究。结果显示：不同培养基配方、温度、酸碱度、碳源、氮源和光照对菌丝的生长有一定影响，菌丝生长的最适宜培养基是柿树砧木根煎汁根培养基，最适温度是30℃，最适光照为24h全日光照，最适pH是4，最适碳源为葡萄糖，最适氮源为硝酸钠。

关键词 甜柿黑腐病；生物学特性；柿拟盘多毛孢菌

中图分类号：S436.67 文献标志码：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2016.24.030

柿子树是柿科、柿属落叶大乔木，品种很多，生长在温带与热带[1]。在我国已有3000多年的栽培历史了，主要分布在陕西、河南、山东和河北，占全世界的50%以上[2]。柿子树不仅产果，果实鲜美，而且作为绿化景观树种，其作用甚大[3]。2013年，在云南省保山地区发现了甜柿根腐病，关于病原菌（pathogenic bacterium）生物学特性和培养性状的研究报道较少；为此，2013年下半年，开展了甜柿根腐病的相关实验与分析，总结了不同环境因素下病原菌的生长状况，为深入研究甜柿根腐病的发病机理提供数据支持。

1 材料与方法

1.1 试验材料

2013年4月，在保山市柿树种植园区采集病害树木标本，2014-2015年，通过常规真菌分离法，通过柯赫氏法则进行验证确定病原菌后，进行了菌株的纯培养，并保存了下来。

1.2 生物学特性测定的实验方法

1.2.1 营养条件对病原菌生长的影响

取PDA菌株菌丝，将其置于PDA培养基中央，在25℃恒温箱中培养7 d，菌丝长满培养皿后，用打孔器在距离培养皿中心相同的位置的圆周上取菌块，菌块的直径为5mm，将菌块分别接入马铃薯葡萄糖培养基、马铃薯蔗糖培养基、查氏培养基、水琼脂培养基、燕麦片培养基、玉米粉培养基、柿树砧木根煎汁培养基，在26℃培养箱中进行培养；5d后用十字交叉法对病原菌菌落直径进行测定，重复3次，共计21皿，记录数据。

1.2.2 温度对病原菌生长的影响

取PDA菌株菌丝，将其置于PDA培养基中央，在25℃恒温箱中培养7 d，菌丝长满培养皿后，用打孔器在距离培养皿中心相同的位置的圆周上取菌块，菌块的直径为5mm，并将其置于温度为5、10、15、20、25、30、35℃七个不同培养箱中进行培养；5d用十字交叉法对病原菌菌落直径进行测定，记录数据，每个温度梯度重复3次，共计21皿。

1.2.3 pH对病原菌生长的影响

用HCL和NaOH溶液调节培养基pH浓度（HCL和NAOH的浓度均为0.1mol/L），从而配制成不同pH的PDA平板。将直径5mm的菌饼分别接种于pH3-11的PDA平板上，置于26℃的培养箱中培养。6d后，用十字交叉法测量菌落生长直径，记录数据。每个pH梯度重复3次，共计27皿。

1.2.4 光照对病原菌生长的影响

将直径5mm的菌饼接于PDA平板，设定4种光照条件：16∶8（白天∶夜晚）自然光照、12∶12（白天∶夜晚）光暗更替、全黑暗、全光照，置于26℃下培养；5d后用十字交叉法对病原菌菌落直径进行测定，记录数据。每个光照梯度重复3次，共计12皿。

1.2.5 碳源对病原菌生长的影响

PDA培养基中葡萄糖是作为碳源的主要成分，本实验将葡萄糖替换成蔗糖、麦芽糖、α-乳糖、可溶性淀粉、甘露醇，从而制成碳源不同，但是其他条件相同的不同培养基，并将5mm菌饼置于这些培养基中央，在26℃培养箱中培养。5d后测量菌落的平均直径值，记录数据。每个碳源重复3次，共计18皿。

1.2.6 氮源对病原菌生长的影响

查氏培养基中硝酸钠是作为氮源的主要成分，本实验将硝酸钠替换成蛋白胨、尿素、甘氨酸、硫酸铵、氯化铵、硝酸钾，从而制成氮源不同，但是其他条件相同的不同培养基，并将5mm菌饼置于这些培养基中央，在26℃培养箱中培养，5d后测量菌落的平均直径值，记录数据，以比较不同氮源对菌丝生长的影响，每个氮源重复3次，共计21皿。

2 结果与分析

2.1 培养基对病原菌菌丝生长、菌丝颜色及形态的影响

病原菌菌丝在7种不同成分的培养基上生长情况差异较大，在柿树砧木根煎汁培养基中生长最快，菌落平均直径达到5.96cm；在PDA培养基生长次之，菌落直径为5.06cm，但是在水琼脂培养基中生长是最缓慢的，菌落直径3.85cm。

2.2 碳源对菌丝生长的影响

菌丝生长的适宜碳源为葡萄糖，以葡萄糖为碳源时，菌落平均直径最大，为5.07cm；菌丝在以甘露醇和可溶性淀粉为碳源的培养基中生长缓慢，分别为3.00cm和3.41cm。菌丝在以α-乳糖、麦芽糖、蔗糖为碳源的培养基中的平均直径分别为4.23、3.81、4.36、3.69cm。

2.3 氮源对菌丝生长的影响

菌丝生长的适宜氮源为硝酸钾和硫酸铵，其中以硝酸钠为氮源时，数据显示其菌落平均直径最大，为3.97cm，表明病原菌生长最适氮源为硝酸钠；菌丝在以蛋白胨、氯化铵为氮源的培养基中生长最为缓慢，分别为1.80cm和1.91cm。菌丝在以甘氨酸、硫酸铵、尿素、硝酸钾为氮源的培养基中的平均直径分别为3.20、3.66、3.15、3.60cm。

2.4 温度对病原菌菌丝生长的影响

菌丝生长的适宜温度区间为25～30℃。其中菌丝在30℃下生长时，菌落平均直径最大，为6.41cm；菌丝在5℃时，无法生长；在10℃和35℃生长非常缓慢。

2.5 pH对病原菌菌丝生长的影响

病原菌菌丝在所调制的各种pH浓度培养环境下均能生长，但是菌丝生长的适宜pH区间为3～5，菌丝在pH为4的培养基下长势最好，可以表明病原菌较偏爱酸性条件。

2.6 光照对病原菌菌丝生长的影响

菌丝在不同光照条件下都能生长菌落颜色及形态基本无差异，最适光照为24 h全光照，菌落平均值达到6.21cm。

3 结论与讨论

研究结果表明，营养条件、环境温度，土壤酸碱度等条件对柿拟盘多毛孢菌的菌丝生长具有影响。菌丝在马铃薯葡萄糖培养基上生长最好；相比其他pH而言，病原菌在pH为4的环境条件下生长最好；数据也表明最适合病原菌生长的温度条件为30℃；本实验中，菌丝在24 h全光照的条件下生长最适宜。

鉴于以往对于此病害的研究报道很少，本文通过对柿拟盘多毛孢菌生物学特性的研究，明确病菌的生长环境条件，为病害的深入研究提供一手数据，为病害的防治提供相关借鉴，为其他科属植物的根腐病防治提供参考。

参考文献

[1]贺士元.北京植物志（下册）[M].上海：上海出版社，1988.

[2]中国科学院西北植物研究所.秦岭植物志（第一卷第4册）[M].北京：科学出版社，1983.

[3]余忠保，吴洪思.庭院绿化树种柿子树的特征特性及栽培技术[J].现代农业科技，2011（14）：218.

（责任编辑：赵中正）