克伦特罗检测方法的应用

□ 吴钰冰 华南农业大学食品学院

克伦特罗检测方法的应用

□ 吴钰冰 华南农业大学食品学院

近年来，不良商家违法使用“瘦肉精”引起食品质量安全问题，克伦特罗是“瘦肉精”的其中一种。本文以检测现象的不同为依据，讨论各种检测方法的特点，并展望检测技术的研究前景，以期对肉类安全检测有一定的参考作用。

克伦特罗；免疫分析法；检测方法

盐酸克伦特罗（Clenbuterol Hydroch loride，CL）是一种肾上腺类神经兴奋剂，能显著提高胴体的瘦肉率。现如今，我国明令禁止添加使用并不断提高检测技术。检测CL的方法有高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱－质谱法（GC-MS）和免疫分析技术（IA）等。本文概述免疫分析技术在检测肉类中CL的应用，以期对实际检测有一定的参考作用。

1 免疫分析法在肉类中克伦特罗检测的应用

1.1 放射免疫分析法（RIA）

RIA以标记抗原与反应系统中未标记抗原竞争结合特异性抗体，测定待检样品中抗原量。RIA虽然具有特异性强、灵敏度高、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等优点，但也存在放射污染和危害，常用核素半衰期短、试剂盒稳定期不长等诸多不足。目前，国外已生产出测定CL的试剂盒产品，还用受体代替抗体结合CL，使检测限高达到2.4 ng/g。

1.2 时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）

TRFIA是以具有独特荧光特性的镧系元素及其螯合剂作为示踪物，建立的一种新型的非放射性微量分析技术。

TRFIA有效地消除激发光、杂散荧光等背景光对检测极限的限制，降低非特异性信号，达到极高的信噪比，大大超过放射性同位素所能达到的灵敏度，且具有标记物制备方便、储存时间长、无放射性污染、检测重复性好、操作流程短和不受样品自然荧光干扰等优点[1]。

TRFIA方法学研究和临床应用发展迅速，国内外相继研制了多种TRFIA仪和配套的商品化试剂盒。如果研制成检测CL的时间分辨荧光免疫分析技术试纸条，将实现现场检测。

1.3 酶联免疫分析法（ELISA）

ELISA基于酶免疫法（EIA），将试剂抗体或试剂抗原用酶进行标记，试剂与标本中相应的抗原或抗体反应后，测定复合物中的酶。常见的类型有双抗夹心法、间接法、双抗夹心法、竞争法。ELISA法具有设备简单、酶标记物半衰期长、灵敏度高等优点，适合对活体动物作大批量样品的快速分析；缺点是酶活性受环境影响大，且该法检测结果假阳性率较高[2]。ELISA法应用广泛，国内外在这方面的研究也比较多，方法发展比较成熟。应致力于研究灵敏度高、多残留测定的酶联免疫试剂盒，开发亲和力高、特异性强的抗体[3]。

1.4 化学发光酶免疫法（CLEIA）

CLEIA是基于RIA和ELISA发展的一种分析方法，以辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶作为标记酶，以鲁米诺等发光剂作为底物，利用过氧化氢与鲁米诺构成的化学发光体系进行标记反应，以检测CL浓度[4]。CLEIA灵敏度高、线性范围宽、光信号持续时间长，分析方法简便快速，易于自动化。结果稳定、误差小，样品系直接自己发光，使分析结果灵敏、稳定、可靠、安全性好，免除了使用放射性物质。应用化学发光酶免疫法检测动物性食品中的克伦特罗残留前景可观，但国内外尚处于初步阶段，有待加强研发。

1.5 胶体金免疫法（GICT）

GICT法利用了金颗粒具有高电子密度的特性与正负电荷相吸的原理，使标记物在相应的配体处大量聚集形成肉眼可见红色或粉红色斑点。GICT法具有检测快速、简单、抗基质干扰强等优点，适合基层现场筛查的快速检测活动，但特异性和灵敏度较差。因此，存在一定的误判的可能性[5]。GICT法被认为是检测CL最有前途的技术之一，可以继续研发定量或半定量检测纸条及通用检测纸条。

2 结语

ELISA、RIA由于自身限制不能实现现场快速检测，而且检测设备和检测费用昂贵。GICT和TRFIA灵敏、检测快速和方便，是今后研究和开发检测CL等残留物的重要方向。目前，克伦特罗检测技术已被广泛应用于常规检测中，但是其假阳性高、检测设备不易携带等缺点仍然存在，当下的研究方向应把廉价、准确、迅速融为一体。参考文献

[1]雷红涛,高秀洁,潘科,等.克伦特罗时间分辨荧光免疫检测方法的建立[J].中国食品学报,2006(1):6-10.

[2]肖红玉,刘国艳,史贤明.克伦特罗的检测方法[J].中国饲料,2005(12):31-33.

[3]韩春卉,江涛,李燕俊,等.黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒稳定性研究[J].食品科学,2013(14):315−318.

[4]李细芬.克伦特罗化学发光酶免疫分析方法的研究[D].天津科技大学,2010.

[5]李超辉,陈雪岚,郭亮,等.胶体金免疫层析法定量检测猪肉中克伦特