不同柑橘品种及保健品中辛弗林含量的比较

刘 伟，袁洪燕，苏东林，单 杨，张菊华

（1.湖南省农业科学院湖南省农产品加工研究所，湖南 长沙 410125；2.中南大学隆平分院，湖南 长沙 410125）

不同柑橘品种及保健品中辛弗林含量的比较

刘 伟1,2，袁洪燕1，苏东林1，单 杨1，张菊华1

（1.湖南省农业科学院湖南省农产品加工研究所，湖南 长沙 410125；2.中南大学隆平分院，湖南 长沙 410125）

以温州蜜柑、椪柑等多个柑橘品种幼果（皮渣）及市售减肥保健品为供试样品，通过反相高效液相色谱（HPLC）建立了辛弗林的色谱测定方法，探讨了辛弗林含量在不同柑橘品种以及不同发育时期的变化特点。结果表明：柑橘幼果中的辛弗林含量变化范围为2.034～8.020 mg/g，平均含量为4.106 mg/g；果皮中为0.994～4.017 mg/g，平均含量为2.766 mg/g；保健品膳食补充剂中为1.323～40.772 mg/g，与标示的含量基本相符；同一采收期的柑橘幼果辛弗林平均含量由高到低依次为温州蜜柑＞椪柑＞尾张＞杂柑＞酸橙＞脐橙＞本地早＞朋娜＞宫川；随着生长期的延长，柑橘幼果和果皮中辛弗林含量均呈现下降趋势。

柑橘；辛弗林；保健品；变化

我国柑橘资源丰富，2014年种植面积达242万hm2，产量为3 494.22 万t，面积和年产量均居世界第一位。我国每年产生柑橘皮渣超过1 000万t，其内含辛弗林5.5万t[1-2]。目前，除少量柑橘皮渣用于陈皮（凉果）等加工外，其他基本上没有得到利用，造成资源的巨大浪费[3-6]。

辛弗林（synephrine）又名对羟福林、交感醇、脱氧肾上腺素，存在于芸香科柑橘属植物中[7-9]。辛弗林具有收缩血管、升高血压的作用，还有较强的扩张气管和支气管的作用，临床用于治疗支气管哮喘以及手术和麻醉时出现的低血压、虚脱及休克等症状[10-12]。同时，辛弗林还具有提高新陈代谢、增加热量消耗、提高能量水平等功效[13-17]。2004年4月美国FDA禁止膳食补充剂中添加麻黄碱[18]，辛弗林由于结构和内源性神经递质与肾上腺素和去甲肾上腺素相似，已逐步替代麻黄碱广泛应用于医药、食品、饮料等保健品行业。目前，国内生产辛弗林或其制品的公司很少，大量依赖进口。因此，笔者以温州蜜柑、椪柑等多种柑橘品种落果（皮渣）为原料，测定其辛弗林含量，并与市售减肥保健品中辛弗林含量进行比较，探索主要柑橘品种幼果期辛弗林活性成分含量的分布及变化规律，一方面为辛弗林生产企业提供更有效的原材料，促进辛弗林医药和保健价值的开发；另一方面提高资源综合利用效率，推动我国柑橘产业的发展。

1 材料与方法

1.1 试验材料

收集湖南、江西、四川、广东、云南、浙江6个省不同产地、不同品种的柑橘幼果及果皮样品共33个。其中，宽皮柑橘有椪柑、尾张、宫川、本地早、温州蜜柑、小蜜橘等11个；橙类有脐橙、朋娜、广柑等共5个；其他如酸橙、杂柑、蜜橘、葡萄柚等9个。另外，收集美国减肥保健品8个。

1.2 仪器与试剂

主要试验仪器有：高效液相色谱仪，型号1100，配有四元泵及自动进样器、DAD 检测器（美国安捷伦公司）；KQ-600DB 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；FZ-102型微型植物粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司）；KDC-160HR 型离心机（科大创新股份有限公司中佳分公司）；FA2104 型电子天平（上海伦捷机电仪表有限公司）。

主要试验试剂有：乙腈（色谱纯，Fisher Scientific公司）、甲醇（分析纯，Fisher Scientific公司）、辛弗林标准品（94-07-5）（纯度98.0%，美国sigma公司）。

1.3 试验方法

1.3.1样品制备样品粉碎、筛分、烘干，备用。平行称取两份试料，每份试料1.00 g（精确到0.01 g），置于50 mL离心管中，加入40%甲醇水溶液10.0 mL，50℃下超声处理30 min，以10 000 r/min离心10 min，收集上清液，残渣均以10 mL提取剂重复提取两次。合并上清液，定容至50 mL，用0.45 μm微孔滤膜过滤，待测。

1.3.2对照品制备精密称取辛弗林标准品10 mg，置10 mL 容量瓶中，加40%甲醇至刻度作为对照品溶液。

1.3.3色谱条件Agilent Poroshell 120 Bonus-RP C18色谱柱（3 mm×150 mm，2.7 μm）。流动相为0.1%乙酸水溶液（A）和乙腈 （B）；流速 0.3 mL/min。梯度洗脱程序条件：0～2 min 0%～5% B；2～25 min 5%～35% B；25～35 min 35%～75% B；35～38 min 75%～95% B；38～48 min 95%～100% B。检测波长 225 nm，柱温20 ℃，进样量2 μL，保留时间定性，外标法定量。

1.3.4结果计算试样中辛弗林含量以质量分数ω计，单位mg/g。计算公式：

式中：ρ，样液中辛弗林的质量浓度（mg/L）；V，样液体积（mL）；m，试料质量（g）；n，稀释倍数。计算结果小数点后保留3位有效数字。

1.3.5检测方法验证（1）线性关系及检出限：按1.3.2方法配制一系列不同稀释度的辛弗林标准溶液，按照1.3.3的色谱条件进样分析，重复测定5次。以峰面积为纵坐标（Y），质量浓度（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算标准曲线的回归方程及相关系数。（2）精密度：精密吸取200 mg/L标准品溶液，按1.3.3 的色谱条件连续进样6 次，测定各自的峰面积，根据测定结果计算相对标准偏差RSD。（3）重现性：精密称取同一供试样品6份，按1.3.1 的方法平行制备6 份样品溶液，按1.3.3的色谱条件进样，记录峰面积，并计算辛弗林含量。（4）稳定性：精密称取同一供试样品，按1.3.1 方法制备的样品溶液，在1.3.3的色谱条件下，分别于0、2、4、6、8、12、16、20、24、48 h 进样，测定供试品中辛弗林的含量。（5）回收率：精密称取已知含量的SRM（酸橙提取物标准参考物质0.65%）3份（约100 mg每份），按照1.3.1 的方法制备供试品溶液，各份中加入200 mg/L辛弗林标准品溶液对照品溶液0.4、2、10 mL，按1.3.3的色谱条件进样，依法平行测定3次，计算回收率。

2 结果与分析

2.1 检测方法的验证

2.1.1线性关系考察及检出限如图1所示，辛弗林的保留时间为8.731 min，由辛弗林标准品溶液获得回归方程Y=3.586 6 X-1.202 5，R2=0.999 5（图2）。这表明辛弗林在5.00～800 mg/L范围内线性关系良好。经试验验证，辛弗林的最低检出限为0.01 mg/L。

图1 辛弗林单标图谱

图2 辛弗林标准曲线

2.1.2精密度精密度试验的相对标准偏差RSD =0.91%，表明该检测方法的精密度良好。

2.1.3重现性重现性试验的相对标准偏差RSD＜1%。

2.1.4稳定性稳定性试验的相对标准偏差RSD＜3%。

2.1.5回收率如表1所示，低、中、高添加水平的平均回收率分别为97.40%，100.06%，101.24%，回收率符合GB/T27404—2008标准中规定的回收范围95%～105%。

表1 加样回收率试验

2.2 不同样品辛弗林含量的比较

2.2.1不同柑橘品种及保健品中辛弗林含量的比较从表2中可以看出，柑橘幼果中的辛弗林含量变化范围为2.034～8.020 mg/g，平均含量为4.106 mg/g；果皮中的含量变化范围为0.994～4.017 mg/g，平均含量为2.766 mg/g；保健品膳食补充剂中辛弗林的含量变化范围为1.323～40.772 mg/g，与标示的含量基本相符，除3号补充剂（标签写明是中草药）中辛弗林含量低于柑橘落果外，其他6个保健品中的辛弗林含量均较高，平均含量为25.426 mg/g。

2.2.2不同柑橘品种间辛弗林含量的比较如图3所示，不同柑橘品种之间辛弗林含量存在较大差异。同一采收期（6月28日）的柑橘幼果辛弗林平均含量由高到低依次为温州蜜柑＞椪柑＞尾张＞杂柑＞酸橙＞脐橙＞本地早＞朋娜＞宫川。其中，温州蜜柑中辛弗林含量最高，平均为8.020 mg/g（DW，下同）；其次是酸橙和杂柑，辛弗林平均含量为4.647～4.829 mg/g；本地早和朋娜排第三，辛弗林平均含量为2.696～2.973 mg/g；宫川的辛弗林含量最低，平均为2.034 mg/g；不同等级间辛弗林含量的差异达显著水平。宽皮橘类柑橘幼果中辛弗林的平均含量较高，甜橙类次之，与张文娟[19]、毛华荣等[20]的研究报道一致。

表2 不同柑橘品种及保健品中辛弗林含量的比较

图3 不同柑橘品种辛弗林含量的比较

2.2.3不同采摘时间对辛弗林含量的影响柑橘幼果在发育过程中，辛弗林作为生理代谢物其含量会发生变化。通过掌握辛弗林含量随生长期的变化规律，可以指导原料的采摘和收购。由图4可知，不同采集时间同一品种的辛弗林含量差异较大，随着生长期的延长，柑橘幼果和果皮中辛弗林含量均呈现下降趋势。6月28日采摘的椪柑、脐橙及杂柑幼果中辛弗林含量较高，8月之后含量均不同程度的降低。辛弗林在3个品种中的变化趋势略有不同，6月28日的椪柑幼果中辛弗林含量高达7.578 mg/g，而8月4日的椪柑中含量仅为2.250 mg/g，下降了70.31%，椪柑中的辛弗林含量随生长期的延长持续降低，下降幅度最大；脐橙幼果从最初的3.482 mg/g下降至2.071 mg/g，下降了40.52%，脐橙中的辛弗林含量随生长期的延长缓慢降低，是3个品种中辛弗林含量下降幅度最小的；6月28日的杂柑中辛弗林含量为4.829 mg/g，到8月7日下降到2.686 mg/g，下降了44.38%，杂柑中辛弗林含量随生长期的延长初期变化平缓，至8月4日后急剧降低，后期变化波动较大。韦正等[21]在研究陈皮时发现，7月采摘的橘皮中辛弗林含量较高，12月以后采摘的橘皮中辛弗林含量变化趋于稳定；毛华荣等[20]的研究表明，柑橘第二次生理落果辛弗林含量均较第一次有所降低。该试验与上述报道在辛弗林含量最高的采摘时期不尽相同，但是在辛弗林的变化趋势上是一致的。因此，6月的椪柑、脐橙、杂柑等柑橘品种中辛弗林含量较高，可以将6月确定为辛弗林提取原料的适宜采集时间。

图4 不同柑橘品种不同生长期辛弗林含量的动态变化

3 结 论

研究表明，辛弗林含量在不同柑橘品种之间具有显著差异，不同采集时间的同一品种的辛弗林含量差异也很大。柑橘幼果中的辛弗林含量变化范围为2.034～8.020 mg/g，平均含量为4.106 mg/g；果皮中的含量变化范围为0.994～4.017 mg/g，平均含量为2.766 mg/g；保健品膳食补充剂中辛弗林的含量变化范围为1.323～40.772 mg/g，与标示的含量基本相符，除3号补充剂（标签写明是中草药）的辛弗林含量低于柑橘落果中的含量，其他6个保健品中辛弗林含量均较高，平均为25.426 mg/g；同一采收期的柑橘幼果辛弗林平均含量由高到低依次为温州蜜柑＞椪柑＞尾张＞杂柑＞酸橙＞脐橙＞本地早＞朋娜＞宫川，其中温州蜜柑、椪柑、尾张、脐橙、宫川等品种间辛弗林含量的差异达显著水平，酸橙和杂柑、本地早和朋娜之间的差异不显著；随着生长期的延长，柑橘幼果和果皮中辛弗林含量均呈下降趋势。

辛弗林是柑橘属植物中主要的生物碱成分，对不同的柑橘品种不同时期进行分析比较，分析其含量的差异性和规律性，有利于柑橘类产品加工时原料的选择及地方柑橘资源的开发利用，并为柑橘品种选育及遗传亲缘关系研究提供科学依据。

[1] 单 杨，刘 伟，李高阳. 柑橘工业国际标准体系建设研究[J]. 中国食品学报，2014，14（6）：1-8.

[2] 单 杨. 我国相橘工业现状及发展趋势[J]. 农业工程技术（农产品加工业），2014，（4）：13-17.

[3] 付复华，李忠海，单 杨，等. 柑橘皮渣综合利用技术研究进展[J].食品与机械，2009，（5）：178-184.

[4] 封红梅，曲 敏，刘 伟，等. 柑橘皮渣中高酯果胶的提取与纯化[J].食品与机械，2011，（3）：59-62.

[5] 孙金辉，陈海桂，卢沿钢，等. 柑橘皮渣生物转化利用研究进展[J].食品科学，2011，（19）：312-315.

[6] 汤建国，汪秋安，单 杨. 从柑橘皮中超声提取橙皮甙[J]. 精细化工，2004，21（3）：171-173.

[7] Takei H，Hirabuki M，Yoshizaki F. Analysis of synephrine in the peel of citrus fruit，immature Citrus fruit and decoctions of Chinese medicinal prescriptions containing these crude drugs by capillary electrophoresis[J]. Anal. Sci.，1999，15：1017-1020.

[8] Wheaton T A，Stewart I. Biosynthesis of synephrine in Citrus[J]. Phytochemistry，1969，（8）：85-92.

[9] He X G，Lian L Z，Lin L Z，et al. HPLC-ES/MS in phytochemical analysis of sour orange （Citrus aurantium L.）[J]. J. Chromatogr. A，1997，791：127-134.

[10] Penzak S R，Jann M W，Gold J A，et al. Seville（sour）orange juice：Synephrine content and cardiovascular effects in normotensive adults[J]. Journal of Clinical Pharmacology，2001，41：1059- 1063.

[11] 王国荣. 薄层扫描法测定酸橙枳实（壳）中辛弗林和N-甲基酪胺的含量[J]. 药物分析杂志，1994，14（4）：48.

[12] Nagao T，Tanimura T. Distribution of biogenic amines in the cricket central nervous system[J]. Anal. Biochem.，1988，171：33-40.

[13] 王 淳，刘振丽，宋志前，等. 中药枳实提取工艺研究[J]. 中国实验方剂学杂志，2008，14（9）：23-25.

[14] 沈莲清，张 超. 个青皮中辛弗林两种提取分离方法的比较研究[J].食品与生物技术学报，2008，27（6）：14.

[15] 黄 伟，刘友平，赵祎姗，等. 枳实、枳壳中辛弗林含量比较分析[J].中药与临床，2011，2（3）：21-23

[16] Blanck H M，Serdula M K，Gillespie C，et al. Use of nonprescription dietary supplements for weight loss is common among Americans[J]. J. Am. Diet.Assoc.，2007，107：441-447.

[17] Haaz S，Fontaine K R，Cutter G，et al. Citrus aurantium and synephrine alkaloids in the treatment of overweight and obesity：an update[J]. Obes. Rev.，2006，（7）：79-88.

[18] Lane C S，Katherine E S，Mary B S，et al. Determination of ephedrine qlkaloids in dietary supplement standard reference materials[J]. Anal. Chem.，2005，77：3101-3112.

[19] 张文娟. 柑橘幼果功能成分提取分析及抗氧化活性研究[D]. 杭州：浙江大学，2015.

[20] 毛华荣，傅虹飞，王鲁峰，等. 不同柑橘品种生理落果中橙皮苷和辛弗林含量测定[J].食品科学，2009，30（14）：223-226.

[21] 韦 正，陈鸿平，杨 丽，等. 同一植株不同生长期橘皮中辛弗林含量动态变化规律研究[J]. 中国实验方剂学杂志，2013，19（10）：80-84.

（责任编辑：成 平）

Comparison on the Content of Synephrine in Different Varieties of Citrus and Dietary Supplements

LIU Wei1,2，YUAN Hong-yan1，SU Dong-lin1，SHAN Yang1，ZHANG Ju-hua1
（1. Hunan Agricultural Product Processing Institute, Hunan Academy of Agricultural Sciences, Changsha 410125, PRC; 2. Longping Branch Graduate School, Central South University, Changsha 410125, PRC）

This study aims to analyze the changes of synephrine in the different young fruit (peel) and dietary supplements during different growing periods for the utilization of citrus resources. Reversed phase high performance liquid chromatography (HPLC) is established for determination of synephrine. The results were as follows: The synephrine content in young fruit of citrus ranged from 2.034 to 8.02 mg/g, the average is 4.106 mg/g; and ranged from 0.994-4.017 mg/g in citrus peel, the average of 2.766 mg/g; and ranged from 1.323 to 40.772 mg/g in dietary supplements, basically consistent with the actual content marked. The order of average content in different citrus varieties at the same harvest was Wenzhou Satsuma ＞ Ponkan ＞ Owari ＞ Miscellaneous Citrus＞ lime ＞ Navel Orange ＞ Bendizao mandarin ＞Navelina navel ＞ Miyagawa, signifcant difference among Wenzhou Satsuma, Ponkan, Owari, Navel Orange and Miyagawa. With the fruits growing, the contents of synephrine in young fruit and peel showed a signifcant downward trend.

citrus; synephrine; dietary supplements; changes

book=61,ebook=69

Q946.88

A

1006-060X（2016）12-0061-05

10.16498/j.cnki.hnnykx.2016.012.020

2016-10-07

湖南省自然科学联合培养基金项目（14JJ6066）

刘 伟（1983-），男，陕西宝鸡市人，助理研究员，主要从事农产品精深加工研究。

张菊华