药品微生物计数方法及方法适用性探析

马德宁 金桂花 崔铉 张玉玲

药品微生物计数方法及方法适用性探析

马德宁 金桂花 崔铉 张玉玲

药品计数方法的适用性实验是必不可少的，在实际的检验过程中也还存在着一些问题和不足。对于克林霉素磷酸酯阴道凝胶在制剂过滤的过程中，可能会出现薄膜被阻塞的情况，可以采用加入一定剂量浓度为10%的氯化钙溶液的方式进行处理。对于药品进行采用微生物检验方法是适当的，这能够提高专业人员的素质，改善质量控制的效果。文章就对药品微生物计数方法以及方法的适用性等进行探究和分析，以促进药品微生物计数水平。

药品微生物；计数方法；适用性

药品微生物计数方法是一种检查在有氧条件下生产的细菌和真菌的方法，这种方法检查的准确性受到多种因素的影响[1]。常见的因素包括微生物的分布、过程、标准、方法等的适当性等。同时，检查确定的微生物计数不符合规定的药物，除了检查方法的因素之外，还受到药品生产过程中多种因素的影响，包括药物的生产设备、环境、材料、工艺和人员等[2]。在生产和检验过程的众多影响因素中，检验方法的适用性直接影响着检查的效果，本文将针对这一方面展开研究，确定检验方法的适用性和检验结果的准确性。

1 药品生物计数方法的建立和确认

药物生物计数方法的建立和确认，主要从方法的选择、建立与确认、药剂的特殊性等方面展开。

（1）选取操作简单、快速以及适用的方法[3]。在选取方法时应该尽量选择操作比较简单过程比较少的方法，这样能够减少操作过程中带来的人为污染事件的发生，损伤试剂中的微生物。同时，对于需要加入试剂的方法应该综合考虑试剂对检验样本中微生物的影响。对于需要加入较强抑菌作用试剂的方法，最好采用薄膜过滤法进行试验。在对样本中的微生物进行检查时，应该充分的考虑药品的抑菌强度、用途以及生产工艺等。

（2）药品检验方法的建立和确认。应该根据被检验药品的具体特性，选择合理的检验方法，以确定方法的可行性和有效性[4]。如果没有得到实验室确认的方法，通常存在一定的风险，最终影响检验结果的可靠性。在本次研究中对一款口服的中药制剂选取不同的检验方法进行试验，结果显示不同方法之间存在差异，其中1: 100的检验方法最能够体现药品的实际污染程度，其他比例的方法会导致出现不同程度的错误判断。

2 计数方法适用性试验

2.1 菌液制备

接种铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基。30℃～35℃培养18～24 h；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20℃～25℃培养24～48 h。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1 ml含菌数为小于100 cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基中，培养5～7 d，加入3～5 ml含0.05%聚山梨酯的无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用含0.05%聚山梨酯的无菌氯化钠溶液制成每1 ml含孢子数小于100 cfu的孢子悬液。

2.2 样品的处理

在检验工作开展之前，应该采用合理的方法将药物制备成试液，通常采用的制液方法有采用45℃的水将药物胶囊溶解，对比硬度比较大的药物采用均浆仪进行打碎处理[5]。为了降低胶囊以及药物添加物产生的药渣对实验结果的影响，可以采用过滤的方法进行处理。对于浓度比较大、颜色比较深以及药渣比较多的药物，在进行过滤之后可以采用稀释的方法进行处理。对于存在非溶性溶剂的药物，应该检查药物的活性，确保采用的中和剂是对微生物没有毒害的，即中和剂与微生物具有相容性。

2.3 加菌方法

与2015年之前版本的药典微生物限度检查方法相比，不仅是微生物限度检查技术验证名称的改变，相关的操作方法也有所改变。如以前的操作方法规范是直接选择一个合适浓度的菌液加到平皿中。而以往的1 ml菌液中大致存在50～100 cfu的微生物。2015年后要求加菌使用的供试液需要在满足上述条件的同时满足新的两个条件，从操作上来说相对复杂，若提供的供试液容积较大，则可能存在不宜计数的问题。

因此随着加菌方法发生的变化， 根据最新的《中国药典》的规定加菌液的量应该不超过试验试液的1%，为了保证操作的方便可以吸取9.9 ml的试液和0.1 ml的菌液，液体混合之后应该保证单位毫升的菌液量不超过100 cfu，菌液的量、与试液的混合均匀程度以及菌液的浓度等，都会影响检验结果的成功与否，因此检验计数之前应当采取适当的方法对供试液中的菌数进行初步确定，如比浊法。

2.4 抗菌活性的去除或者是灭除

对于具有抗菌活性的药物，首先可以采用稀释以及增大试液体积的方法，降低抑菌的强度。也可以添加一定剂量的中和剂、灭菌剂等去除抑菌剂的活性[6]。例如对于碘酊药物可以采用加入一定剂量的硫代硫酸钠的方法，中和药物的抑菌性。对于克林霉素磷酸酯阴道凝胶在制剂过滤的过程中，可能会出现薄膜被阻塞的情况，可以采用加入一定剂量浓度为10%的氯化钙溶液的方式进行处理。

3 结论

在实际的检测过程中，应该选择适用的方法，保证检测的准确性和结果的可靠性[7]。同时，在本次的研究过程中还发现，检验人员的能力、素质等也会对适用方法的确定以及检测结果准确性产生影响[8]。很多检验人员由于并不是微生物专业的或者缺乏良好的专业素质，没有进行及时的相关知识的培训。最终导致不能够对各种检验方法具有完全清晰的认识，对于计数方法的操作方法、步骤以及结果观察等都存在着不恰当的地方，给检验的结果带来的不良的影响。另外，实验检验过程中没有对过程质量进行严格的控制，导致质量控制不到位。因此，未来对于实验检验质量还要进一步加强。

[1] 李趣嫦，江艳芳． 《中国药典》2010版与2015版微生物限度检查法对四种药物检测结果的比较[J]． 中国药品标准，2015，16（2）：86-90．

[2] 国家药典委员会． 中华人民共和国药典：2015年版四部，指导原则[M]． 北京：中国医药科技出版社，2015：387-388．

[3] 孙莺，郭朝晖，宋京都． 8种医院制剂微生物限度检查方法验证[J]．中国药事，2014，28（8）：839-842．

[4] 刘鹏，战宏利，严倩倩，等． 中成药口服给药制剂及其原料药微生物污染相关性分析[J]． 药物分析杂志，2014，34（6）：1068-1072．

[5] 田冬梅，史春辉，娄志红，等．药品微生物计数方法及方法适用性探讨[J]．中国药物评价，2017，34（2）：97-99，103．

[6] 杨晓莉，李辉，马英英，等．中国药典2015年版非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法解读[J]．药物分析杂志，2016，36（6）：1101-1107．

[7] 徐晓洁，冷佳蔚，王志宏，等． 具有抗菌活性的中药固体制剂微生物限度检查计数方法研究[J]．中国药事，2015，29（9）：946-950．

[8] 罗达龙，覃蓝，李夷君．盐酸氨溴索缓释胶囊微生物限度检查的方法学验证[J]．临床医药文献电子杂志，2016，3（12）：2439-2440．

如何撰写论文的“材料和方法”

材料和方法（临床资料）是执行科研的关键部分，对于要进行的研究工作，必须按照实际情况，在事先：（1）选择好合乎一定条件的、一定数量的研究对象；（2）采用一定的实验、诊断或治疗方法（包括实验步骤、方法、器材试剂、药品）；（3）经过一定时期的观察，相同条件下的对照组，与他人结果比较并综合分析。这部分内容要求简明准确、材料完整可信。

Analysis the Methods of Pharmaceuticals Microbial Count and Applicability of Methods

MA De’ning JIN Guihua CUI Xuan ZHANG Yuling Yanbian Institute for Food and Drug Control, Yanbian Jilin 133000, China

The applicability experiment of drug counting method is essential, and there are still some problems and def i ciencies in the actual inspection process. In the process of preparation of clindamycin phosphate vaginal gel, the film may be blocked and can be treated by adding a calcium chloride solution of a certain concentration of 10%. Microbiological testing of drugs is appropriate, which improves the quality of professionals and improves quality control. This article explores and analyzes the methods of microbial count of drugs and their applicability, so as to promote the level of microbial count of drugs.

pharmaceutical microorganisms; counting methods;applicability

R97

A

1674-9316（2017）20-0106-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．20．055

延边州食品药品检验所，吉林 延边 133000通信作者：金桂花