黄蜀葵花、茎、叶多糖与黄酮含量比较

陈云香，刘国钢，陈 敏 ，时维静*， 王 茜， 窦金凤

(1.安徽科技学院 食品药品学院，安徽 凤阳 233100；2.杭州艺福堂茶业有限公司，浙江 杭州 310051)

黄蜀葵花、茎、叶多糖与黄酮含量比较

陈云香1，刘国钢2，陈 敏1，时维静1*， 王 茜1， 窦金凤1

(1.安徽科技学院 食品药品学院，安徽 凤阳 233100；2.杭州艺福堂茶业有限公司，浙江 杭州 310051)

目的:比较黄蜀葵花、茎、叶多糖和黄酮的含量。方法:采用UV法测定黄蜀葵花、茎、叶中的多糖和黄酮，采用HPLC法测定黄蜀葵黄酮中金丝桃苷的含量。结果:黄蜀葵花多糖浸膏得率26.0%，多糖含量17.0%；黄蜀葵茎多糖浸膏得率12.3%，多糖含量11.6%；黄蜀葵叶多糖浸膏得率19.0%，多糖含量14.8%。黄蜀葵花黄酮浸膏得率30.5%，总黄酮含量3.45%；黄蜀葵茎黄酮浸膏得率10.0%，总黄酮含量0.68%；黄蜀葵叶黄酮浸膏得率16.5%，总黄酮含量1.05%。黄蜀葵茎和叶未检测到金丝桃苷，黄蜀葵花中金丝桃苷含量为1.86%，符合2015版《中国药典》规定。结论:黄蜀葵不同部位的多糖和黄酮含量存在较大差异，黄蜀葵茎和叶不可替代黄蜀葵花，但可以用于提取多糖。本试验为黄蜀葵的开发利用提供参考数据。

黄蜀葵;不同部位；多糖；黄酮

黄蜀葵Abelmoschusmanihot( L.) Medic.为锦葵科秋葵属多年生草本植物，始载于宋代掌禹锡所著《嘉佑本草》[1]。黄蜀葵在我国大部分地区均有分布或栽培[2]。历代本草多用其花入药，其次是种子、根，茎和叶少用。现代化学研究表明，黄蜀葵花主要含黄酮类成分，种子主要含氨基酸和不饱和脂肪酸，根中主要为多糖类物质[3]。目前对黄蜀葵花和根研究应用较多，以黄蜀葵花为主要原料的三类新药“黄葵胶囊”已经上市，用于治疗肾炎、类风湿性关节炎等疾病。黄蜀葵根含黏质(黄蜀葵多糖)可用作润滑药，在食品工业中用作增稠剂和稳定剂[4]。每年10月后栽培基地花采收后，根待来年再发，大量的茎和叶被抛弃。因黄蜀葵的主要活性物质是黄酮和多糖，本文比较黄蜀葵花、茎、叶三个不同部位多糖和黄酮含量，为黄蜀葵的开发利用提供参考数据。

1 材料与方法

1.1 试药与仪器

黄蜀葵试验材料于2015年10月25日采自安徽省黄山歙县桂林镇黄蜀葵生产基地，经安徽科技学院食品药品学院时维静教授鉴定为秋葵属黄蜀葵Abelmoschusmanihot( L.) Medic.的花、茎和叶。

金丝桃苷(批号1779-7058)购自上海诗丹德生物技术有限公司；葡萄糖(批号116305-141045)购自上海阿拉丁生化科技有限公司；芦丁(100080-201207) 购自中国药品生物制品检定所；甲醇、乙腈和磷酸均为色谱纯；水为超纯水；浓硫酸、重蒸酚、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠、正丁醇等均为分析纯。

LC-20AT型分析半制备高效液相色谱仪(日本岛津公司)；TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；RE-3000旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；CP225D准微量天平(北京塞多利斯仪器系统有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 黄蜀葵多糖提取 将烘干的黄蜀葵花、茎、叶粉碎，分别取其粉末30.0 g，料液比为1 ∶12.5，加热回流提取3次，每次3 h，合并水提液并浓缩。加入95%乙醇，使溶液中乙醇的体积分数为75%，置冰箱24 h。收集沉淀粗多糖，真空干燥箱干燥，计算得率，备用。

1.2.2 Sevage法除蛋白质 分别取不同部位的黄蜀葵粗多糖5.0 g,以适量水溶解。按多糖水溶液体积1/4加入Sevage试剂(三氯甲烷-正丁醇4 ∶1)混合，充分振荡后静置，离心除去蛋白层，如此反复操作，至无游离蛋白为止。浓缩，干燥，计算得率，备用。

1.2.3 葡萄糖标准溶液制备 精确称取无水葡萄糖10.0 mg，蒸馏水溶解后定容到50 mL容量瓶中，配置成200 mg/L的葡萄糖储备液。

1.2.4 葡萄糖标准曲线绘制 精密吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL葡萄糖溶液，分别定容至10 mL容量瓶中，移取葡萄糖标准系列溶液各1 mL，分别置于10 mL具塞试管中，依次加入5%苯酚溶液1.0 mL,充分振荡后迅速加入浓硫酸6.0 mL，摇匀，室温下放置30 min，以蒸馏水为空白对照，在490 nm处测定吸光度[5]。

1.2.5 黄蜀葵多糖测定 精密称取不同部位的黄蜀葵多糖浸膏各5 mg，置100 mL容量瓶中，加水充分溶解，定容至刻度。精密移取黄蜀葵多糖溶液各1 mL，按“1.2.4”项下方法测吸光度，计算出黄蜀葵花、茎和叶多糖含量。

1.2.6 黄蜀葵黄酮提取 将烘干的黄蜀葵花、茎、叶粉碎，分别取其粉末20.0 g，加入10倍量的60%乙醇，回流提取1 h，提取2次，过滤，合并上清液，回收乙醇，水浴浓缩至稠状，于真空干燥箱干燥，计算得率，备用。

1.2.7 芦丁标准溶液制备 精密称取芦丁对照品 10.0 mg，置 50 mL 量瓶中，用 70% 乙醇溶解，并定容至刻度，振荡摇匀，配制成 200 mg/L 的对照溶液，备用。

1.2.8 芦丁标准曲线绘制 吸取芦丁对照品溶液 0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，置 10 mL 量瓶中，加5% 亚硝酸钠溶液 0.3 mL，摇匀，放置 6 min，加10%硝酸铝溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min，再加 4%氢氧化钠溶液4 mL，摇匀，用 30%乙醇定容至刻度，放置15 min后，在506 nm处测定吸光度[6]。

1.2.9 黄蜀葵总黄酮测定 精密称取不同部位黄蜀葵黄酮浸膏0.1 g，定容到50 mL量瓶，各取1.0 mL置10 mL 量瓶中，按“1.2.7”项下方法操作检测，计算出黄蜀葵花、茎和叶总黄酮含量。

1.2.10 测定金丝桃苷色谱条件 采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)，检测波长：360 nm，流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(15:85)，流速：1.0 mL/min，理论板数按金丝桃苷峰计算不低于10 000[7]。记录色谱图谱。

1.2.11 对照品溶液的制备 精密称定金丝桃苷标准品0.3 mg，置于2 mL容量瓶中，用色谱甲醇定容，混匀，再精密吸取100 μL，置2 mL容量瓶中，甲醇定容，混匀，得对照品溶液。

1.2.12 金丝桃苷标准曲线绘制 采用自动进样精密吸取金丝桃苷对照品溶液4、6、8、10、12 μL，以峰面积积分值为纵坐标，金丝桃苷的进样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线。

1.2.13 金丝桃苷测定 精密称取总黄酮浸膏粉各10.0 mg，置于25 mL的容量瓶中，加入适量色谱甲醇，超声30 min(60 ℃、250 W)，取出，放冷，加色谱甲醇至刻度，混匀，取续滤液，按“1.2.8”项下条件测定，进样量10 μL。

2 结果与分析

2.1 标准曲线方程与相关系数

采用UV法检测多糖和黄酮，采用HPLC法测定金丝桃苷，各标准曲线方程、相关系数与线性范围见表1。

表1 各标准曲线方程、相关系数与线性范围

2.2 多糖测定结果

详见表2，多糖浸膏得率在12.3～26%，总多糖含量在11.6～17.0%之间。

2.3 总黄酮结果

详见表2，黄酮浸膏得率在10.0～30.5%,总黄酮含量在0.05～3.45%之间。

2.4 金丝桃苷含量

黄蜀葵茎和叶中金丝桃苷含量极少，达不到检测线。黄蜀葵花中金丝桃苷含量符合2015版《中国药典》含量>0.50%(见表2)。检测图谱见图1。

A．金丝桃苷标准品；B. 黄蜀葵花；1金丝桃苷峰

提取部位Extraction多糖浸膏得率Yieldofpolysaccharide总多糖含量Polysaccharidecontent黄酮浸膏得率Totalflavonoidsextractionrate总黄酮含量Totalflavonoidscontent金丝桃苷含量Hyperincontent黄蜀葵花26.017.030.53.451.86黄蜀葵茎12.311.610.00.68-黄蜀葵叶19.014.816.50.05-

从表2可以看出，黄蜀葵不同部位多糖含量花>叶>茎，黄蜀葵不同部位总黄酮花>茎>叶。金丝桃苷在茎和叶中未检出，表明金丝桃苷是黄蜀葵花中黄酮的指标性成分。

3 讨论

近年来，关于黄蜀葵多糖和黄酮化合物的研究越来越多，大部分集中在黄蜀葵花，对黄蜀葵茎和叶的研究则相对较少[8]。黄蜀葵中不同部位多糖和黄酮化合物的含量比较也未见报道。本试验比较了黄蜀葵花、茎、叶中的多糖和黄酮含量，并证明了金丝桃苷是黄蜀葵花中黄酮的指标性成分。

本试验中紫外可见分光光度仪测定多糖和黄酮均采用文献法，测定黄蜀葵中金丝桃苷采用2015版《中国药典》中方法，方法简便、准确、经典，所得数据可靠。结果表明，黄蜀葵花多糖浸膏得率26.0%，多糖含量17.0%；黄蜀葵茎多糖浸膏得率12.3%，多糖含量11.6%；黄蜀葵叶多糖浸膏得率19.0%，多糖含量14.8%。黄蜀葵花黄酮浸膏得率30.5%，总黄酮含量3.45%；黄蜀葵茎黄酮浸膏得率10.0%，总黄酮含量0.68%；黄蜀葵叶黄酮浸膏得率16.5%，总黄酮含量1.05%。黄蜀葵花中金丝桃苷含量为1.86%，符合2015版《中国药典》规定。黄蜀葵不同部位的多糖和黄酮含量存在较大差异，黄蜀葵茎和叶可以用于提取多糖，但不可替代黄蜀葵花使用。

[1]王茜，王啟之，时维静，等．响应面法与正交设计法优化黄蜀葵总黄酮闪提工艺比较[J]．安徽科技学院学报，2015，29(5)：24-31．

[2]章庆华．歙县黄蜀葵高产栽培管理技术要点[J]．农村经济与科技，2013，24(6)：177-178．

[3]温锐，谢国勇，李旭森，等．黄蜀葵化学成分与药理活性研究进展[J]．中国野生植物资源，2015，34(2)：37-44．

[4]王雪梅，施文婷，吴迷迷，等．黄蜀葵胶中的糖分析[J]．食品科学，2011，32(6)：256-260．

[5]杨毕超，时维静，章庆华，等．安徽省药用菊花多类成分含量比较[J]．安徽科技学院学报，2013，27(5)：50-54．

[6]刘利军，于艳，时维静，等．安徽省3种药用菊花总黄酮含量比较[J]．安徽科技学院学报，2012，26(4)：47-50．

[7]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2015:306.

[8]李春梅，王涛，张祎，等．中药黄蜀葵花化学成分的分离与鉴定(Ⅰ)[J]．沈阳药科大学学报，2010，27(9)：711-714．

(责任编辑：马世堂)

Comparison of Polysaccharides and Flavones Content in Abelmoschus Manihot Different Parts

CHEN Yun-xiang1, LIU Guo-gang2, CHEN Min1, SHI Wei-jing1*, WANG Qian1，DOU Jin-feng1

(1.College of Food and Drug, Anhui Science and Technology University, Fengyang 233100, China;2.Hangzhou Efuton Tea Limited Company, Hangzhou 310051,China)

Objective: To compare polysaccharides and flavones content in Abelmoschus manihot different parts. Methods: Polysaccharides and flavones of Abelmoschus manihot flower, stem and leaf were determined by UV. Hyperoside of Abelmoschus manihot was determined by HPLC. Results: The polysaccharide extract yield of flowers is 26.0% and polysaccharide content is 17.0%. The polysaccharide extract yield of stems is 12.3% and polysaccharide content is 11.6%. The polysaccharide extract yield of leaves is 19.0% and polysaccharide content is 14.8%. The flavones extract yield of flowers is 30.5% and flavones content is 3.45%. The flavones extract yield of stems is 10.0% and flavones content is 0.68%. The flavones extract yield of leaves is 16.5% and flavones content is 1.05%. Hyperoside in Abelmoschus manihot stems and leaves was not detected. Hyperoside content in Abelmoschus manihot flowers is 1.86%. Conclusion: There is a big difference of polysaccharides and flavones content in Abelmoschus manihot different parts. This test provides reference for the development and utilization of Abelmoschus manihot.

Abelmoschus Manihot; Different parts; Polysaccharide; Flavonoids

2016-06-01

省级大学生创新创业训练计划项目(S10879CX33，108792015051)；滁州市科技局“高校发明专利技术研究项目”(201305)。

陈云香(1994-)，女，福建省泉州市人，在读本科生，主要从事中药及药物制剂研究。*通讯作者：时维静，教授，E-mail:shiwj@ahstu.edu.cn。

R927.2

A

1673-8772(2016)06-0050-04