黄曲霉毒素M1及其常见检测方法

宋 瑞

(石家庄市畜产品质量监测中心，河北石家庄 050041)

黄曲霉毒素M1及其常见检测方法

宋 瑞

(石家庄市畜产品质量监测中心，河北石家庄 050041)

黄曲霉毒素 M1主要是由于奶牛饲入被黄曲霉毒素污染的饲料，经过羟基化作用而产生的。是目前发现的毒性、致癌性较强的天然有毒物。本文主要从黄曲霉毒素 M1的化学性质、对人体的危害以及常见检测方法进行了阐述。

黄曲霉毒素M1 常见检测方法

牛奶中的黄曲霉毒素M1主要是由于奶牛饲入被黄曲霉毒素污染的饲料，经过羟基化作用而产生的。黄曲霉毒素M1的理化性质非常稳定，不会因为加热、消毒等因素消除。黄曲霉毒素M1是目前发现的毒性、致癌性较强的天然有毒物，它能够破坏人及动物的肝脏组织，严重时可导致肝癌甚至死亡。随着人们生活水平的提高，黄曲霉毒素M1的危害也逐渐引起老百姓的关注。相关专家、学者对黄曲霉毒素M1的研究也越来越深入，本文从黄曲霉毒素的来源、化学性质、对人体的危害以及检测方法四方面进行了阐述。

1 黄曲霉毒素 M1的理化性质

黄曲霉毒素 M1的分子式为 C17H12O7，分子量为 328，是一类毒性非常强的二氢呋喃香豆素衍生物，熔点 299℃，形状为长方形片状、无色结晶，365nm 紫外光下照射呈蓝紫色荧光。黄曲霉毒素 M1可以溶于多种有机极性溶剂，如氯仿、乙腈、甲醇。黄曲霉毒素 M1具有较为稳定的化学结构，对光、热、酸都较为稳定，不易分子结构的变化，因此牛奶常见的消煮方式都不易使之消除。

2 黄曲霉毒素 M1的来源

黄曲霉毒素是黄曲霉、寄生曲霉等霉菌产生的代谢产物。主要产生原因是粮食未及时晾干或存储不当，极易被黄曲霉污染，产生黄曲霉毒素。有学者研究较易被黄曲霉污染的粮食，首先是玉米、花生及其制品，其次是小麦、高粱，豆粕等。牛奶中出现黄曲霉毒素 M1，主要是把发霉的粮食作为饲料饲喂奶牛，其中的黄曲霉毒素会转变为黄曲霉毒素 M1并于 24 小时内进入到牛奶中；其次是牛奶在储存环节，存储方法不当也会造成牛奶中出现黄曲霉毒素M1。

3 牛奶中黄曲霉毒素 M1的限制标准

欧盟牛奶中黄曲霉毒素 M1的含量≤0.05mg/L 或 50ppt。我国牛奶中黄曲霉毒素 M1的国家规定为≤0.5μg/kg。由此可见，我国牛奶中普遍含有黄曲霉毒素 M1的数值较大，这需要我们兽医工作者进一步研究适当的方法降低我国牛奶中黄曲霉毒素 M1的含量。

4 黄曲霉毒素 M1的检测方法

黄曲霉毒素 M1的检测方法有很多种，有薄层色谱法、高效液相色谱法、酶联免疫法、荧光光度法等。

4.1 酶联免疫法

酶联免疫法测定黄曲霉毒素 M1的基础是抗原抗体反应。首先微孔板包被具有特异性的单克隆抗体。加入黄曲霉毒素标准、样品溶液，加入酶标记物，加入显色剂，加入反应停止液后使颜色由蓝转变为黄色。在 450nm 处读取数据。酶联免疫法是检测黄曲霉毒素 M1最常用的方法，该法具有实际操作较为简单、整体实验耗时较短、测定结果较为准确的优点，经常作为半定量实验使用，需要准确的数据则需要进一步使用更精密的仪器。

4.2 薄层色谱法

本方法常用于半定量测定黄曲霉毒素 M1实验。黄曲霉毒素M1具有荧光性，可将牛奶样品提取浓缩后，通过点板、溶剂展开，使黄曲霉毒素 M1在薄层板上分离，设置薄层色谱扫描仪波长为 365nm 的，会产生蓝紫色荧光，据此来进行结果的定性定量。薄层色谱法操作较为简单易行且所用试剂为常用试剂，但是由于牛奶中可能会有其他荧光物质，从而产生干扰，造成测定误差。

4.3 免疫亲和层析净化高效液相色谱法

该方法是将亲和柱内含有的黄曲霉毒素 M1抗体交联在固体支持物上，与黄曲霉毒素 M1发生键合，形成较为稳定的复合体。用水除去杂质，然后洗脱吸附的黄曲霉毒素 M1，收集洗脱液。用带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定洗脱液中黄曲霉毒素 M1含量。该方法采用：25 %乙腈水溶液为流动相，流速为 1 ml/min，采用高压输液系统，将流动相泵入色谱柱，在柱内分离后，进入检测器读取数据。该此方法具有较好的灵敏度、特异性，测定结果准确可靠等优点。目前已较为广泛地应用于黄曲霉毒素 M1的测定。该方法具有快速、灵敏度高、准确、自动化程度高等优点，但高效液相色谱仪价格较贵且具体操作较为烦琐。

4.4 液相色谱-质谱联法

液相色谱-质谱联用技术是在液相色谱的基础上加入了质谱系统，将牛奶中的黄曲霉毒素 M1经过浓缩提取后，在液相色谱串联质谱仪上分离、离子化，从而得到质谱图。液质联用是将色谱与质谱优势合二为一，将色谱的高分离能力和质谱的高选择性相结合，该方法所采用的母离子为 329.0，定量子离子 273.5，定性子离子 259.5，离子化方式 ESI+。流动相为流动相：0.1%甲酸溶液，乙腈-甲醇溶液。流动相流动速度：0.3 mL/min。本方法具有高灵敏度、基质效应低、响应值较高，检测结果准确等优点。

5 小结

综上所述，伴随着人们对食品安全的认识逐渐提高，人们以广泛了解牛奶中黄曲霉毒素M1的危害。牛奶一旦含有黄曲霉毒素M1，会严重影响百姓的身体健康。因此，检测牛奶中黄曲霉毒素M1非常重要，在常见的几种方法中，初筛可以使用酶联免疫法，需要精确定量的可以使用高效液相色谱法、液相色谱质谱串联法等。同时，在牛奶安全生产中黄曲霉毒素M1所带来的危害、消除黄曲霉毒素 M1的方法、精确检测其的方法都应引起我们兽医工作者严密的关注。