大肠杆菌对抗菌药物耐药情况的检测

苏 萍

(山东省安丘市大汉河畜牧兽医管理站,山东安丘 262100)

大肠杆菌对抗菌药物耐药情况的检测

苏 萍

(山东省安丘市大汉河畜牧兽医管理站,山东安丘 262100)

本文主要通过对某农场分离出来的大肠杆菌运用Kirby-Bauer药敏纸片法测试在兽医临床中的常用抗菌药共21种，得到的结果显示具有非常严重的耐药现象。在大肠杆菌中普遍存在多种耐药性，磺胺类、四环素类、喹诺酮类等抗菌药的耐药率均比较高。抗菌药物耐药情况的出现会直接影响治疗效果，需要给予高度重视并进行充分探索。

抗菌药物 大肠杆菌 耐药

抗菌药可对各种动物疾病进行有效预防和治疗，与此同时其还能够有效促进动物生长，故广泛应用于畜牧业中。但是，随着兽医临床滥用抗菌药的现象越来越严重，大量耐药菌的出现成了严重影响人类健康和畜牧业发展的危险因素[1]。本文通过测试和分析大肠杆菌的耐药性，希望可以为兽医临床合理应用抗菌药提供借鉴。

1 材料与方法

（1）试验菌和培养基：试验菌来源于中国兽医药品监察所检测技术研究室，共分离出8株大肠杆菌；采用中国药品生物制品检定所的CMCC44113（大肠杆菌质控菌株ATCC25922）和MH琼脂（普通琼脂和水解酪蛋白）。（2）药敏纸片的来源和应用：中国药品生物制品检定所提药敏纸片，共选择21种，其中专门制备的4种为氟苯尼考、二氟沙星、沙拉沙星、达氟沙星。喹诺酮类药物主要包括：氧氟沙星、环丙沙星、诺氧沙星等。氯霉素类药物主要包括：奥格门丁、氨苄西林、阿莫西林。头孢类药物主要包括：头孢曲松、头孢噻吩。四环素类药物主要包括：四环素；氨基糖苷类药物不仅包括庆大霉素和阿米卡星，同时还包括链霉素和卡那霉素。磺胺类药物主要包括：复方新诺明、磺胺甲基异恶唑。（3）具体试验方法：采用Kirby-Bauer药敏纸片法，其具有操作方便、难度小等优点，与实验室要求的快速测定、大批量测定等要求完全符合。（4）确定5种兽医专用药物的药敏纸片浓度：应用经过专门程序制备得到的纸片，先确定纸片中具体药物量，然后创建与之相符合的标准后，依据上述5种药物的最低抑菌浓度，参考同类药品的纸片药物颔联，其中氟苯尼考的纸片药物量为30μg，二氟沙星、恩诺沙星均为10μg，沙拉沙星、达氟沙星均为5μg。（5）确定药敏判断标准：按照NCCLS提供的判断标准确定所有药物的药敏标准。（6）测定各种菌对药物的耐药性，依据的耐药性机制为国际上对药敏实验的规定，测定具有代表性意义的药物种类，依据代表性药物的敏感程度，判定同类药物的具体药物敏感性情况。（7）通过WHO制定的数据统计软件统计分析涉及的全部数据，并进行充分讨论。

2 试验结果

2.1 大肠杆菌耐药发生性率排序

萘啶酸排名第1位，四环素排名第2位，磺胺甲基异恶唑排名第3位，复方新诺明排名第4位，喹诺酮类（第2、3代）排名第5位，氨苄西林排名第6位，阿莫西林排名第7位，氯霉素排名第8位，链霉素排名第9位，卡那霉素排名第10位，头孢噻吩排名第11位，庆大霉素排名第12位，奥格门丁与氟苯尼考分别排名第13位和第14位，第15位则是阿米卡星与头孢曲松。排名前5的耐药率分别为19.7%、18.6%、16.1%、14.9%、13.7%。

2.2 抗生素的耐药情况

仅1株对24种抗菌药菌敏感，其他菌株则表现出≥二重耐药现象；除阿米卡星和头孢曲松之外，有2株对22种抗菌药耐药；初氟苯尼考、头孢曲松、阿米卡星外，有4株对21种抗菌药耐药；除克拉维酸、氟苯尼考、阿米卡星、头孢曲松外，有8株对20种抗菌药耐药；有10株对第3代喹诺酮类敏感；有9株对第2代喹诺酮敏感。

3 结语

由本次研究可知，从用药农场中分离出来的大肠杆菌均具有较高的耐药性。相比于同类喹诺酮类药物，大肠杆菌对诺氟沙星和氧氟沙星的耐药率更高[2]。入选的24种抗菌药中，耐药率≥70%的抗菌药应暂停所使用；耐药率在30%～70%范围内的抗菌药可作为次选药物；耐药率≤30%的抗菌药中包括头孢曲松钠，在兽医临床中不宜使用头孢类的第3代新药，作为人畜共用药，克拉维酸和阿米卡星可积极使用和推广。氟苯尼考是兽医的专用药之一，其亦是治疗常见病的首选药物，但是用过程中必须掌握方法和剂量。虽然本品应用时间较短，但已经出现耐药性[3]。兽医临床用药中的耐药性问题需要引起高度重视，并将其作为临床考察项目之一，以提高药物治疗效果。此外，饲料中尽量减少抗菌药，治疗过程中必须按照科学合理的要求给药，尽可能在食品动物养殖中减少或避免滥用抗菌药物的现象[4]。在针对ESBLs（超光谱β内酰胺酶）大肠杆菌治疗中，以往选择的氟喹诺酮药物已经无法满足实际要求，产ESBLs菌株的检出率和氟喹诺酮药物用量表现出正相关。同时，由于种种客观因素的制约，导致药物滥用问题变得愈加严峻。基于此，需要谨慎使用抗菌药物，尽可能的抑制细菌耐药性的发展速度。

选择头孢吡肟联合碳氢霉烯药物治疗中，由于碳氢霉烯药物更多的是应用在大肠埃希菌感染治疗中，大肠杆菌中产ESBLs菌株的检出率和用量表现为正相关。ESBLs通过接合和转化形式，促使细菌内部耐药基因大范围扩散，在一定程度上加剧医院交叉感染概率。

[1] 李新正，张桂枝，杨陇.常用抗菌药物对鸡致病性大肠杆菌的抑菌效果研究[J].黑龙江畜牧兽医，2012，（2）：103-104.

[2] 郭潇木，杨铜，贺丹丹，等.广东地区猪源大肠杆菌耐药性及其系统发育群的研究[J].中国畜牧兽医，2014，41（1）：182-186.

[3] 刁有江，范学政.山东省部分地区禽源致病性大肠杆菌的血清流行病学调查与耐药性检测[J].中国兽药杂志，2014，48（2）：14-19.

[4] 何敏，陈敏，黄立.大肠杆菌对抗菌药物耐药机制的研究进展[J].养禽与禽病防治，2010，（9）：4-7.

[5] 司红彬，吴永继，黄丽云，等.黄檗与抗菌药联合抗耐药大肠杆菌的作用研究[J].河南农业科学，2015，44（2）：123-126.