中药材黄芩对幽门螺杆菌体外抗菌活性的作用分析

赵军

中药材黄芩对幽门螺杆菌体外抗菌活性的作用分析

赵军

目的分析中药材黄芩对幽门螺杆菌(Hp)体外抗菌活性的作用, 为治疗Hp感染胃病患者提供科学的参考数据。方法采用热回流方法从黄芩粗粉中提取黄芩乙醇提取物以及黄芩苷, 经过高效液相色谱(HPLC)鉴定黄芩苷的浓度, 再采用试管二倍稀释法选择合适的培养基, 通过体外药敏试验分析黄芩苷与黄芩乙醇提取物对 Hp的体外抗菌活性作用机制。结果从120 g黄芩粉中所摄取的6.02 g黄芩苷经过HPLC鉴定后其纯度达到95.88%, 通过试管二倍稀释法药敏试验测定黄芩乙醇提取物对10株Hp的最低抑菌浓度(MIC)90、MIC50值分别为2.61 mg/ml、3.25 mg/ml, 黄芩苷对10株 Hp的MIC90、MIC50值分别为1.31 mg/ml、1.05 mg/ml, 黄芩苷与黄芩乙醇提取物均具有良好的体外抗Hp活性, 黄芩苷对Hp的MIC90、MIC50值优于黄芩乙醇提取物。结论中药材黄芩对 Hp体外抗菌活性的作用比较显著, 具有重要的实验研究价值, 值得推广研究。

黄芩；幽门螺杆菌；体外抗菌活性；作用

黄芩属于草本植物, 将黄芩的根入药处理能够具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎的功效。在已经发现的黄酮类化合物中, 含量最高且作用最为明显的是黄芩苷。本研究将根据相关工作经验, 分析黄芩乙醇提取物以及黄芩苷对 Hp体外抗菌活性的作用机制, 为治疗Hp感染胃病患者提供科学的参考数据。现总结如下。

1 材料与方法

1. 1 试剂与药材试剂：95%乙醇、硫酸、氢氧化钠等；药材：黄芩；HPLC材料：黄芩苷对照品；实验菌株：选取一些胃黏膜组织, 将10株Hp临床Ⅰ～Ⅳ型胃黏膜组织均匀的涂在SKINOW培养基上, 与此同时放置在36.8℃的环境中, 适量加入催化剂, 孵育1 d后, 观察菌落形态以及生化反应, 且快速进行实验, 最终鉴定为Hp。

1. 2 方法

1. 2. 1 制备黄芩乙醇提取物称取25 g黄芩, 干燥粉碎之后收集于标本瓶中, 加入已经配置好的70%乙醇中, 以浸没黄芩为宜；用70%乙醇热回流提取≥2次, 合并提取液, 减压回收乙醇至无醇味提取物, 浓度为0.45 g/ml。

1. 2. 2 制备黄芩苷称取120 g黄芩粗粉, 以10倍水煎煮2次, 25 min/次, 合并煎煮2次后的液体, 加入浓盐酸, 在80℃温度下静置1 d, 将沉淀液放入烧杯中, 加120 ml水进行搅拌, 使得黄芩苷全部溶解, 加入90%乙醇, 搅拌后加热滤液至48℃, 以浓酸进行调配, 抽滤沉淀物, 50℃真空干燥,最终制得黄芩苷。

1. 2. 3 黄芩苷的含量、纯度测定称取0.88 mg黄芩苷置于12 ml容量瓶中, 加入适量甲醇摇匀, 对照品溶解且稀释至0.21 mg/ml储备液中；配制对照品溶液。称取0.88 mg黄芩苷置于12 ml容量瓶中, 加入适量甲醇摇匀, 对照品溶解且稀释至0.21 mg/ml储备液中；测定样品含量。取供试品溶液,量取15 μl进入到HPLC中, 记录HPLC色谱峰面积；与此同时称取15 μl样品进入到HPLC中, 按照外标法计算峰面积,得出黄芩苷含量, 与对照品相比较则为黄芩苷纯度。

1. 2. 4 体外药敏试验Hp临床菌株的分离培养和鉴定。通过抑菌试验发现, 使用简单的煎煮法提取药物进行相关抑菌试验能够观察到黄芩和黄芩苷对Hp的体外抗菌活性。药敏试验：采用试管二倍稀释法, 取12支无菌试管, 每一支试管中均加入0.88 ml布氏肉汤, 第1支试管中加入制备药液0.95 ml, 倍比稀释至第10支试管中, 第11支试管与第12支试管不添加任何药液, 作为对照试验。12支试管分别加入已经制备好的Hp菌液中, 大约有1020个细菌, 在38℃微氧环境为6%～9% CO2、6%～8% O2、33.4% H2下进行培养, 在2 d后观察其培养结果。

1. 3 观察指标分析黄芩乙醇提取物与黄芩苷对10株 Hp的MIC90、MIC50值, 将检测所得MIC值从低到高进行累计分布率计算, 累计分布率≥50%时的最低MIC值为MIC50,≥90%时最低MIC值为MIC90。

2 结果

从120 g黄芩粉中所摄取的6.02 g黄芩苷经过HPLC鉴定后其纯度达到95.88%, 通过试管二倍稀释法药敏试验测定黄芩乙醇提取物对10株 Hp的MIC90、MIC50值分别为2.61 mg/ml、3.25 mg/ml, 黄芩苷对10株 Hp的MIC90、MIC50值分别为1.31 mg/ml、1.05 mg/ml, 黄芩苷与黄芩乙醇提取物均具有良好的体外抗Hp活性, 黄芩苷对Hp的MIC90、MIC50值优于黄芩乙醇提取物。

3 讨论

Hp是一种螺杆状细菌, 目前最为推崇的一种治疗方法是三联疗法, Hp根除率达到89.9%以上［1］。Hp是一种特殊的胃黏膜表面细菌, 采用西药治疗费用过高, 药物的副作用较大, 因此给患者带来了最巨大的经济压力和精神压力。

黄芩的主要成分有黄芩素、汉黄芩素以及黄芩苷等, 主治温热病、上呼吸道感染以及肺热咳嗽、胎动不安等疾病,其临床抗菌性好, 且不产生抗药性。本文的相关实验中, 从120 g黄芩粉中所摄取的6.02 g黄芩苷经过HPLC鉴定后其纯度达到95.88%, 通过试管二倍稀释法药敏试验测定黄芩乙醇提取物对10株 Hp的MIC90、MIC50值分别为2.61 mg/ml、3.25 mg/ml, 黄芩苷对10株 Hp的MIC90、MIC50值分别为1.31 mg/ml、1.05 mg/ml。由此可见, 由黄芩配伍的中药复方具有较强的抗Hp作用。

富含黄芩成分的灭幽汤治疗Hp胃病患者能够具有显著效果［8］, 能够在一定程度上帮助修复胃黏膜。富含黄芩的三黄泻心汤和黄芩苷不受到Hp的生长曲线影响［2］, 可有效抑制胃腺癌细胞中的白细胞介素-6(IL-6)的表达［3］。黄芩联合埃索美拉唑治疗Hp感染胃病患者能够显著优于三联治疗法［4,5］, 在一定程度上提高Hp感染胃病患者的免疫力, 毒副作用小, 因此黄芩具有代替抗生素的功能与价值。

综上所述, 中药材黄芩对 Hp体外抗菌活性的作用比较显著, 具有重要的实验研究价值, 值得推广研究。

［1］ 彭学. 幽门螺旋杆菌感染及非甾体抗炎药对消化性溃疡出血的影响研究. 实用心脑肺血管病杂志, 2011, 19(2):220-221.

［2］ 王莉萍. 埃索美拉唑三联疗法对Hp阳性消化性溃疡患者的治疗效果. 求医问药(学术版), 2012, 10(6):112-113, 471.

［3］ 陈维存. 消化性溃疡复发因素的探讨与综合防治. 中国农村卫生事业管理, 2011, 31(8):866-867.

［4］ 华利霞, 山努佳. 辛开苦降法治疗慢性胃炎的Meta分析. 中国继续医学教育, 2015, 18(19):189-191.

［5］ 韦永光. 黄芪建中汤治疗幽门螺旋杆菌阳性胃溃疡37例临床观察. 中国民族民间医药, 2015, 18(11):99, 101.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.08.098

2017-02-14］

110000 沈阳市第九人民医院药剂科