miRNA在分化型甲状腺癌中的研究进展

魏松锋，高 明

综 述

miRNA在分化型甲状腺癌中的研究进展

魏松锋，高 明

近年来，甲状腺癌发病率呈逐年上升的趋势，其中以分化型甲状腺癌的发病率增加为主。目前以分子标记物为指导的个体化治疗理念为分化型甲状腺癌的规范化诊治提供新的思路，miRNA作为重要的分子标记物在分化型甲状腺癌的发生发展、辅助诊断、治疗和预后等方面的重要地位日益重视，推动miRNAs在DTC规范性诊治领域中的广泛应用。

分化型；甲状腺癌；miRNA

甲状腺结节是内分泌系统的常见病，经高分辨率超声检查发现甲状腺结节的患病率为20%～76%。据文献统计甲状腺结节中甲状腺癌的患病率为5%～15%，其中90%以上的甲状腺癌为分化型甲状腺癌（differentiated thyorid carcinoma，DTC）。近年来，甲状腺癌发病率在许多国家呈逐年上升的趋势，其中主要以占DTC绝大多数的乳头状甲状腺癌（PTC）的发病率增加为主。根据美国癌症联合会统计，2011年美国新发甲状腺癌例数占女性全身各部位恶性肿瘤的5%，成为女性第5位最常见的恶性肿瘤[1]。我国2015年国家癌症中心的数据表明，甲状腺癌已成为我国近十年增长最为迅速的女性恶性肿瘤，已经跃居为30岁之前女性恶性肿瘤的首位[2]。大部分DTC进展缓慢，死亡率低，10年生存率较高。但延误治疗或诊治不规范的DTC也会发生病期加重或复发或远处转移，淋巴结转移和局部复发较常见，严重影响患者的预后。因此，如何更合理地规范化个体化综合治疗DTC患者尤为重要。近年来，以分子标记物为指导的患者个体化治疗理念为DTC的规范化诊治提供了新的思路，其中研究较多的就是MicroRNA（miRNA）。miRNA作为重要的分子标记物在DTC的发生发展、辅助诊断、治疗和预后等方面的重要地位被越来越多的研究证实。

1 PTC中miRNA的差异表达

1.1 miRNAs差异表达在PTC发生发展中的作用 在许多研究中表明碘过量可能与PTC的发生相关，但是由于碘的作用机制较为复杂，其在甲状腺癌中的作用尚未能明确。TSH是调节甲状腺细胞生长及其分泌功能的主要因素，TSH过高与PTC的发生率有关，过多的碘摄入可引起TSH水平的升高。在TSH调节作用方面，cAMP与PIK3的转录调控起着重要作用，而Akama等[3]研究表明miRNA与调控TSH的基因表达有关。TSH可以使正常甲状腺细胞中部分miRNAs表达下调，其中下调较为明显的部分miRNAs在PTC中为高表达。金明月[4]等的研究发现，PTC细胞经碘及TSH处理后，miR-21、miR-221和miR-222表达量均上调，p27kip1蛋白表达量下调，AP-1及AKT蛋白表达量上调。因此，碘、TSH对PI3K/AKT信号通路起到上调作用。此外，三种miRNAs表达量和蛋白AP-1、AKT的表达上调以及p27kip1的表达下调均与碘、TSH的浓度相关。

NF-κB在甲状腺癌发生中的重要的作用已早被阐述[5]。在对乳腺癌的研究中发现miR-146能够通过调控NF-kB的表达而影响乳腺癌细胞的集落形成与转移[6]。在甲状腺癌的研究中也有相似的结果[7]。此外，miR-146还作用于白细胞介素1受体相关激酶-1、肿瘤坏死因子受体相关因子6、IL-8、IL-6等发挥相应作用。KIT是细胞增殖和生长过程中重要的酪氨酸激酶受体，在细胞分化生长中起重要作用，是多种癌症的致癌基因[8]。在PTC研究中，miR-146b、miR-221以及miR-222的靶基因可能为c-酪氨酸蛋白激酶受体（c-KIT），抑制KIT蛋白的生成，使得组织中的KIT表达下调。He等[9]研究者对PTC的检测发现，在大多数PTC标本中miR-146、miR-221和miR-222都有过度表达，而对KIT蛋白的检测则明显下降或无法检出。其可能的原因是miRNAs与KIT的部分区域关键部位结合出现单核甘酸多态性，从而导致KIT转录下降和KIT蛋白水平的低下，促进PTC的形成[10]。有研究表明miR-146、miR-221和miR-222过度表达的甲状腺癌患者的预后会相对的较差[11-12]，通过原位杂交的技术有学者发现miR-146b的高表达在PTC中较滤泡状甲状腺癌（FTC）和未分化癌（ATC）更为普遍[13]。

PTEN/PI3K/AKT信号通路是生物体内重要的生存信号通路，在甲状腺癌组织中也可被激活，调节细胞的凋亡，增殖和迁移，在肿瘤形成和发展过程产生重要的作用。PTEN是一种肿瘤抑制基因，主要是通过脂质磷酸酶活性作用于PI3K的下游靶分子PIP3，从而阻断PI3K/AKT信号通路所介导的细胞生长、代谢及存活，实现其抑癌作用。PI3K活化的增强或者是PTEN活化的减弱导致AKT活化增强[14]。激活的AKT通路可以抑制p27kip1，进而影响细胞周期的蛋白的表达[15]。Talotta等[16]在一项对大鼠甲状腺细胞的研究中，通过抑制miR-21增加了PTEN的表达，从而减少了肿瘤细胞的增殖，迁移和侵袭，相反增加miR-21的量则可观察到相反的结果。miR-221和miR-222的序列与p27kip1的3’UTR区域内有多个结合位点，推断其为miR-221和miR-222的靶基因。两者通过负向调节p27kip1蛋白的表达影响细胞周期，从而加强了细胞的增殖[17]。相反，抑制二者的表达，又可以使p27kip1的蛋白水平增加[16]。Mardente通过[18]体外研究发现，miR221/222可以通过抑制PTEN从而促进了人甲状腺乳头状癌细胞系BCPAP和未分化癌细胞系CAL62增值。

RET/PTC-RAS-BRAF信号通路改变是PTC的重要分子学表现[19]。BRAF基因突变持续激活BRAF激酶,造成MAPK信号传导通路持续活化，细胞无限制分裂、增殖，而促进肿瘤形成[20]。许多研究表明miRNAs与甲状腺癌相关基因突变状态有极强的关联性。Huang等[21]研究发现，在BRAF基因突变的PTC及正常甲状腺细胞株中有多种miRNAs存在差异表达，推测这些miRNAs可能与BRAF基因突变有关。在RET/PTC融合基因的细胞中，也发现多种不同差异表达的miRNAs，部分miRNAs可能参与PTC发生的过程[22]。Nikiforova等[23]比较了BRAF、RAS、RET/PTC这三种不同突变的PTC，多种miRNAs表现出差异表达。在BRAF基因突变的样本中，miR-221、miR-222、miR-146b表达具有明显差异，miR-187在RAS突变的样本中表达下降，而在RET/PTC突变组中miR-155出现明显上调。2010年发表在《THYROID》杂志的文章显示，在BRAF基因突变的PTC中miR-146b表达显著高于对照的BRAF基因未突变组[24]。但Sheu等[25]研究却显示，miR-146b、miR-181b、miR-21、miR-221、miR-222虽然在PTC癌灶与正常甲状腺组织之间有表达差异，却未能发现在BRAF基因突变型组与野生型组差异有统计学意义。

对于miRNAs的失调与甲状腺相关基因的关系，仍处于不断研究中，实验结果的差异可能受标本类型、例数和检测方法等因素的影响，有待大样本分组进行深入研究。虽然目前报道了一系列的miRNAs在甲状腺乳头状癌中表达异常，但对这些miRNAs的功能研究还相对缺乏，他们在甲状腺癌发生发展中的具体机制还不为人们熟知。由于不同的miRNA可以同时与不同的目的mRNA结合，同一miRNA可以同时与同一目的mRNA结合，这些特殊的生物学行为对单一的miRNA研究带来了困难。所以未来我们还需借助于大数据的分析手段如基因组学、转录组学等组学的优势，深入地研究miRNAs的表达异常怎样驱动甲状腺癌发生。

1.2 miRNAs在PTC中的表达及与临床病理特征关系 许多学者在miRNAs与甲状腺肿瘤的关系方面做了大量研究，包括在甲状腺结节组织和患者血液中采用miRNA芯片分析和逆转录荧光定量PCR等方法进行分析，这对于甲状腺结节性质的判断以及甲状腺癌侵袭和预后判断有重要作用。虽然PTC属于高分化肿瘤，预后较好，10年生存率90%以上，但在部分PTC甚至是微小PTC早期就可出现淋巴结转移，甚至侵犯周围神经、血管及肌肉等组织，生物学行为与大多数PTC有着明显不同。若能通过miRNAs的检测预测PTC临床生物学特征，则具有重要临床意义。

一系列运用基因芯片等方法对PTC的miRNAs表达情况分析可见，与正常的甲状腺组织相比，多种miRNAs在PTC中有不同水平的上调或下调，如miR-21、miR-146、miR-155、miR-181、miR-197、miR-221、miR-222、miR-224等。2005年，He等[9]首先通过微阵列分析技术分析了15例PTC患者的30个标本，发现许多异常表达的miRNAs。与周围正常甲状腺组织中的表达相比，miR-221、miR-222、miR-146的表达有明显差异。PTC中有淋巴结转移和无淋巴结转移的组织标本中miR-146具有很大的差异，暗示了其在PTC的转移中具有重要作用。此外，功能研究表明miR-146可以调控细胞周期、迁移及转移[26-27]。许多PTC的miRNA研究证明miR-221/222上调与甲状腺癌的临床病理特征高度相关[28-29]。Sun等[30]的研究表明在高表达miR-221/222患者中更容易发生中央区淋巴结的转移，TNM分期也会更高。在体外的功能研究中发现，miR-221/222可以促进甲状腺乳头状癌细胞系的增殖能力、克隆形成能力及细胞迁移能力。Gao等[31]按照侵袭转移能力的强弱将PTC细胞株（IHH4）分为强弱两组，在裸鼠中种植后，观察淋巴结的转移及miRNAs的表达情况。结果显示，与侵袭相对弱组比较，侵袭较强组中有11种差异表达的miRNAs与转移相关，其中miR-let-7b、miR-200a、miR-222、miR-106、miR-193表达上调，而miR-199b、miR-26a、miR-34、miR-29、miR-15a、miR-16 表达下调。推测这些miRNAs可能与PTC的侵袭能力和淋巴转移有关。为了观察miRNAs表达异常与PTC侵袭性之间的关系，Yip等[32]通过对PTC中miRNAs表达的研究发现，与非侵袭性相比，侵袭性PTC患者组织中miR-146b、miR-221、miR-222、miR-155 和miR-31的表达上调，而miR-1、miR-34b、miR-130b、miR-138表达下调。其中miR-146b和miR-222的上调和miR-34b和miR-130b的下调具有显著差异，且在进一步的验证试验中同样具有统计学意义。此外，miR-146b在BRAF基因突变的肿瘤中与侵袭性PTC明显相关。而且MET可能为miR-34b和 miR-1的靶基因，表现为在侵袭性肿瘤中，miR-34b和miR-1表达下降，而MET相应高表达。Yu等[33]对245例PTC患者、良性结节患者及正常成人的miRNAs的检测分析发现，相对于良性结节和正常成人，PTC患者血清中let-7e、miR-151-5p和miR-222的表达明显增高，3种miRNAs对于诊断敏感性及特异性均较高。且3种miRNAs的表达与肿瘤大小、肿瘤分期等临床病理特征有较强的相关性。在肿瘤被切除后，血清中的miR-151-5p和miR-222表达相应下降。通过Pearson相关分析显示，组织与血清的miRNAs具有相关性。

大量的研究已经证明miRNAs在其他的恶性肿瘤中的转移及预后发挥着重要的作用。一些先进的研究技术如二代测序技术已经能够帮助我们识别成千上万miRNAs，然而只有一小部分的miRNAs被证明与甲状腺癌的侵袭、转移相关。单靠这些少量的miRNA去合理的评估患者的病情，指导治疗和预后尚存在困难。因此，我们仍需要大量的体内和体外的研究去寻找更多的与甲状腺癌临床病理特征相关miRNAs，揭示其促进甲状腺癌发生与发展的生物学机制。

1.3 miRNAs表达在PTC诊断中的应用 据统计分析，甲状腺结节中有5%～15%是甲状腺癌，因而临床中有相当大部分甲状腺结节无需行手术切除。甲状腺FNA细胞学检查被认为能较好地对甲状腺结节进行术前鉴别，但除因受采集细胞数、病理细胞数的临床经验等因素的限制，其应用受限，且约10%～40%结节的FNA细胞学检查不能明确诊断。鉴于miRNAs相对于其他RNA具有相对稳定、容易检测等优点，因而借助miRNAs的检测实现对甲状腺结节的准确诊断应运而生。

多种良性甲状腺疾病和甲状腺癌可以通过几种miRNAs得以区分。研究发现，在滤泡性腺瘤中，miR-339和miR-224表达明显上调[34]；在桥本甲状腺炎中则可见到miR-141的表达下调[35]；Graves病中则发现 miR-154、miR-376b 和miR-431下调明显，而且其下调可能与病情活动有密切相关性。PTC中miR-146b、miR-221和miR-222表达明显升高；miR-187则在FTC中表达上调；而ATC中miR-125b和miR-26a表达下调[32]，miR-146a则表达上调，并且后者可能通过NF-kB中起作用。

Pallante等[26]通过对比穿刺针吸活检取到的肿瘤组织与正常组织miRNAs表达发现有5种miRNAs相对有较高表达水平，其中miR-221、miR-222和miR-18b具有显著差异。Nikiforova等[36]利用7种高表达的miRNAs在穿刺标本进行检测，结果发现miRNAs具有较好的应用价值。若以单个miRNA增加2倍以上为标准，试验诊断的准确度95%，敏感度为100%，特异度94%；若多个miRNAs增加2倍以上，则肿瘤的诊断准确度上升为98%，敏感度为88%，特异度100%。Chen等[37]通过用RT-PCR检测分析手术标本以及细针穿刺活检标本发现，与FTC、增生结节和正常甲状腺组织相比，在PTC中miR-146b具有明显高表达，而在FTC，滤泡状腺瘤以及良性结节样增生组织中表达水平很低，并成功在细针穿刺的标本中得到验证。Mazeh等[38]研究发现miR-221在27例PTC细针穿刺组织中19例表达上调，且其诊断PTC敏感性、特异性、阴性预测值、阳性预测值、准确率可分别达95%、100%、96%、100%和98%。

Kitano等[39]对FNA难以诊断的47例甲状腺结节手术切除后的甲状腺组织通过RT-PCR方法进行了miRNAs的表达分析显示，与良性甲状腺腺瘤相比，34种miRNAs在恶性肿瘤中的表达差异具有统计学意义，其中miR-146b、miR-222、miR-221等 14种 miRNAs表达上调，而 miR-126、miR-7、miR-451、miR-144等20种miRNAs表达下调。其中，miR-7、miR-126对良恶性的鉴别诊断准确性最高，ROC曲线下面积分别达0.81和0.77，并认为两者有助于FNAB的术前诊断。Vriens等[40]对104例不同类型甲状腺组织的miRNAs表达谱分析发现，miR-100、miR-125b、miR-138、miR-768-3p过度表达于滤泡细胞起源的恶性肿瘤中。将此4种miRNAs运用在125例FNA诊断不清的样本中区别良恶性肿瘤，其整体准确率为79%，其中miR-138在FNA样本中的准确度75%。Keutgen等[41]分析29例FNA难诊断的甲状腺结节组织的miRNAs表达情况，发现将 miR-222、miR-21、miR-181a、miR-146b运用在特定模型中后，整体的敏感性、精确性、特异性均较好。而将其运用在72例细胞病理诊断不明确的FNA标本上，在甲状腺结节良恶性鉴别上的敏感性为100%、特异性为86%。

虽然现有的研究已经初步显示了miRNAs在甲状腺癌诊断方面的应用价值及其潜在优势，但这些miRNAs的变化仅是一个量的变化而并非质的变化，这一特点使得miRNAs在临床的病理诊断中应用受到限制。随着检测miRNAs的技术如原位杂交技术、RT-PCR、测序技术的不断完善，越来越多的miRNAs的临床意义将被人们认识，这将为甲状腺癌的诊断和预后带来很大的帮助。

2 甲状腺滤泡癌中miRNAs的差异表达

在临床上，因甲状腺滤泡癌（follicular thyroid carcinoma,FTC）与滤泡性腺瘤等良性结节影像学表现相似，临床常规检查如彩色超声准确率低，影响FTC的早期治疗。因此通过miRNAs的表达，提高FTC患者的诊断率，降低此类患者的漏诊率对FTC患者具有积极而重要的意义。但目前，针对FTC相关miRNA的研究还较少。

Stokowy等[42]通过对23例FTC、20例滤泡腺瘤和4例正常甲状腺组织的分析研究发现，FTC与滤泡状腺瘤组织之间存在差异表达的miRNAs，其中miR-192、miR-197、miR-328及miR-346，特别是miR-197和miR-346在FTC中过度表达。将miR-197和miR-346转染至FTC株后发现，任何一个在体外过度表达都可以诱导细胞增殖，而如果其表达被抑制，肿瘤细胞生长也会停滞。在PTC中过度表达的miR-221和miR-222不在滤泡瘤样病变中发挥作用。此外，miR-197和miR-346的过度表达可抑制相应靶基因在体内外的表达水平。miR-197的靶基因ACVRl和TSPAN3在FTC中比滤泡腺瘤中表达明显下调，而miR-346靶基因EFEMP2和CFLAR在FTC中表达也有所下调。因而推测这些miRNAs和靶基因可用于术前诊断。Nikiforova等[36]的研究发现，在典型FTC中 miRNAs表达上调最多有 miR-187、miR-221、miR-155、miR-222和miR-224等，而在嗜酸细胞亚型中观察到miR-183、miR-187、miR-197、miR-221、miR-222和 miR-339表达升高。对几类甲状腺癌的miRNA表达进行对比发现，滤泡上皮组织来源分化程度不一的甲状腺癌组织相应miRNA表达差异也不同。miR-187，miR-22l，miR-222及miR-181b在癌组织中均较高表达，但表达增高程度在各肿瘤组织中略有不同。其中miR-187在PTC中表达平均增高达73.7倍，在FTC中增高在33.4～53.7倍之间，而在低分化癌中增高为23.5倍。miR-22l在PTC中表达平均增高为19.1倍，在FTC中增高在3.6～46.9倍之间，在低分化癌中增高为20.6倍。

此外，Colamaio等[43]通过对miR-191在滤泡腺瘤、FTC、PTC、甲状腺去分化癌和PTC滤泡亚型的表达分析发现，miR-191在FTC、滤泡腺瘤和PTC滤泡亚型中均表达下调。在FTC和滤泡腺瘤中，CDK6的过表达与miR-191的表达下降有关，认为miR-191可能通过调节CDK6来发挥作用。因此认为miR-191的表达下降在甲状腺滤泡组织类型的腺瘤中起重要作用。Vriens等[40]对104例甲状腺标本的和125例FNA诊断不清的样本miRNAs分析显示，仅miR-125b在FTC中过度表达。

尽管研究miRNA与分化型甲状腺癌发生、发展的分子生物学与遗传学机制有重要的意义。但目前尚无分化型甲状腺癌特异性miRNA并应用于术前诊断、靶向治疗及术后随访，但随着精准医疗的理念深入人心，借助临床大样本的基因组学、转录组学手段，miRNAs在DTC发生及发展的分子生物学机制一定会取得突破性进展，从而推动miRNAs在DTC规范性诊治领域中的广泛应用。

[1]Siegel R,Naishadham D,Jemal A.Cancer statistics,2012[J].CA Cancer J Clin,2012,62(1):10-29.

[2]Chen W,Zheng R,Baade PD,et al.Cancer statistics in China,2015[J].CA Cancer J Clin,2016,66(2):115-132.

[3]Akama T,Sue M,Kawashima A,et al.Identification of microRNAs that mediate thyroid cell growth induced by TSH[J].Mol Endocri⁃nol,2012,26(3):493-501.

[4]金明月关海霞单忠艳.碘及TSH对甲状腺乳头状癌细胞miRNA表达的影响[J].现代肿瘤医学,2015(9):1184-1187.

[5]Li X,Abdel-Mageed AB,Mondal D,et al.The nuclear factor kap⁃pa-B signaling pathway as a therapeutic target against thyroid can⁃cers[J].Thyroid,2013,23(2):209-218.

[6]Hurst DR,Edmonds MD,Scott GK,et al.Breast cancer metastasis suppressor up-regulates miR-146,which suppresses breast cancer metastasis[J].Cancer Res,2009,69(4):1279-1283.

[7]Zhang X,Li D,Li M,et al.MicroRNA-146a targets PRKCE to modulate papillary thyroid tumor development[J].Int J Cancer,2014,134(2):257-267.

[8]Peter B,Hadzijusufovic E,Blatt K,et al.KIT polymorphisms and mutations determine responses of neoplastic mast cells to bafetinib(INNO-406)[J].Exp Hematol,2010,38(9):782-791.

[9]He H,Jazdzewski K,Li W,et al.The role of microRNA genes in papillary thyroid carcinoma[J].Proc Natl Acad Sci USA,2005,102(52):19075-19080.

[10]Taganov KD,Boldin MP,Chang KJ,et al.NF-kappaB-dependent induction of microRNA miR-146,an inhibitor targeted to signal⁃ing proteins of innate immune responses[J].Proc Natl Acad Sci USA,2006,103(33):12481-12486.

[11]Chruscik A,Lam AK.Clinical pathological impacts of microR⁃NAs in papillary thyroid carcinoma:a crucial review.Exp Mol Pathol,2015,99(3):393-398.

[12]Sun Y,Yu S,Liu Y,et al.Clinical study expression of miRNAs in papillary thyroid carcinomas is associated with BRAF mutation and clinicopathological features in Chinese patients[J].Int J Endo⁃crinol,2013,doi:10.1155/2013/128735.

[13]Guo Z,Hardin H,Montemayor-Garcia C,et al.In situ hybridiza⁃tion analysis of miR-146b-5p and miR-21 in thyroid nodules:di⁃agnostic implications[J].Endocr Pathol,2015,26(2):157-163.

[14]Ward Y,Lake R,Martin PL,et al.CD97 amplifies LPA receptor signaling and promotes thyroid cancer progression in a mouse mod⁃el[J].Oncogene,2013,32(22):2726-2738.

[15]Koff A.How to decrease p27Kip1 levels during tumor develop⁃ment[J].Cancer Cell,2006,9(2):75-76.

[16]Talotta F,Cimmino A,Matarazzo MR,et al.An autoregulatory loop mediated by miR-21 and PDCD4 controls the AP-1 activity in RAS transformation[J].Oncogene,2009,28(1):73-84.

[17]Visone R,Russo L,Pallante P,et al.MicroRNAs(miR)-221 and miR-222,both overexpressed in human thyroid papillary carcino⁃mas,regulate p27Kip1 protein levels and cell cycle[J].Endocr Relat Cancer,2007,14(3):791-798.

[18]Mardente S,Mari E,Massimi I,et al.HMGB1-Induced Cross Talk between PTEN and miRs 221/222 in Thyroid Cancer[J].BioMed Res Int,2015,2015(12):512027.

[19]Sadow PM,Heinrich MC,Corless CL,et al.Absence of BRAF,NRAS,KRAS,HRAS mutations,and RET/PTC gene rearrange⁃ments distinguishes dominant nodules in Hashimoto thyroiditis from papillary thyroid carcinomas[J].Endocr Pathol.2010;21(2):73-79.

[20]Zalesna I,Hartman ML,Czyz M.BRAF mutation in progression and therapy of melanoma,papillary thyroid carcinoma and colorec⁃tal adenocarcinoma[J].Postepy Hig Med Dosw,2016,70:471-488.

[21]Huang Y,Liao D,Pan L,et al.Expressions of miRNAs in papil⁃lary thyroid carcinoma and their associations with the BRAFV600E mutation[J].Eur J Endocrinol,2013,168(5):675-681.

[22]Cahill S,Smyth P,Finn SP,et al.Effect of ret/PTC 1 rearrange⁃ment on transcription and post-transcriptional regulation in a papil⁃lary thyroid carcinoma model[J].Mol Cancer,2006,5(1):70.

[23]Nikiforova MN,Tseng GC,Steward D,et al.MicroRNA expres⁃sion profiling of thyroid tumors:biological significance and diagnos⁃tic utility[J].J Clin Endocrinol Metab,2008,93(5):1600-1608.

[24]Chou CK,Chen RF,Chou FF,et al.miR-146b is highly ex⁃pressed in adult papillary thyroid carcinomas with high risk fea⁃tures including extrathyroidal invasion and the BRAF(V600E)mu⁃tation[J].Thyroid,2010,20(5):489-494.

[25]Sheu SY,Grabellus F,Schwertheim S,et al.Lack of correlation between BRAF V600E mutational status and the expression profile of a distinct set of miRNAs in papillary thyroid carcinoma[J].Horm Metab Res,2009,41(6):482-487.

[26]Pallante P,Battista S,Pierantoni GM,et al.Deregulation of mi⁃croRNA expression in thyroid neoplasias[J].Nat Rev Endocrinol,2014,10(2):88-101.

[27]Deng X,Wu B,Xiao K,et al.MiR-146b-5p promotes metastasis and induces epithelial-mesenchymal transition in thyroid cancer by targeting ZNRF3[J].Cell Physiol Biochem,2015,35（1）：71-82.

[28]Lee JC,Zhao JT,Clifton-Bligh RJ,et al.MicroRNA-222 and mi⁃croRNA-146b are tissue and circulating biomarkers of recurrent papillary thyroid cancer[J].Cancer,2013,119（24）:4358-4365.

[29]Acibucu F,Dokmetas HS,Tutar Y,et al.Correlations between the expression levelsofmicro-RNA146b,221,222 and p27 Kip1 protein mRNA and the clinicopathologic parameters in papil⁃lary thyroid cancers[J].Exp Clin Endocrinol Diabetes,2014,122(3):137-143.

[30]Sun Y,Yu S,Liu Y,et al.Expression of miRNAs in Papillary Thy⁃roid Carcinomas Is Associated with BRAF Mutation and Clinico⁃pathological Features in Chinese Patients[J].Int J Endocrinol,2013,2013(2):128735.

[31]Gao Y,Wang C,Shan Z,et al.miRNA expression in a human papillary thyroid carcinoma cell line varies with invasiveness[J].Endocr J,2010,57(1):81-86.

[32]Yip L,Kelly L,Shuai Y,et al.MicroRNA signature distinguishes the degree of aggressiveness of papillary thyroid carcinoma[J].Ann Surg Oncol,2011,18(7):2035-2041.

[33]Yu S,Liu Y,Wang J,et al.Circulating microRNA profiles as po⁃tential biomarkers for diagnosis of papillary thyroid carcinoma[J].J Clin Endocrinol Metab,2012,97(6):2084-2092.

[34]Dorris ER,Smyth P,O'Leary JJ,et al.MIR141 Expression Differ⁃entiates Hashimoto Thyroiditis from PTC and Benign Thyrocytes in Irish Archival Thyroid Tissues[J].Front Endocrinol(Lausanne),2012,3:102.

[35]Liu R,Ma X,Xu L,et al.Differential microRNA expression in peripheral blood mononuclear cells from Graves'disease patients[J].J Clin Endocrinol Metab,2012,97(6):E968-E972.

[36]Nikiforova MN,Chiosea SI,Nikiforov YE.MicroRNA expression profiles in thyroid tumors[J].Endocr Pathol,2009,20(2):85-91.

[37]Chen YT,Kitabayashi N,Zhou XK,et al.MicroRNA analysis as a potential diagnostic tool for papillary thyroid carcinoma[J].Mod Pathol,2008,21(9):1139-1146.

[38]Mazeh H,Mizrahi I,Halle D,et al.Development of a microR⁃NA-based molecular assay for the detection of papillary thyroid carcinoma in aspiration biopsy samples[J].Thyroid,2011,21(2):111-118.

[39]Kitano M,Rahbari R,Patterson EE,et al.Expression profiling of difficult-to-diagnose thyroid histologic subtypes shows distinct ex⁃pression profiles and identify candidate diagnostic microRNAs[J].Ann Surg Oncol,2011,18(12):3443-3452.

[40]Vriens MR,Weng J,Suh I,et al.MicroRNA expression profiling is a potential diagnostic tool for thyroid cancer[J].Cancer,2012,118(13):3426-3432.

[41]Keutgen XM,Filicori F,Crowley MJ,et al.A panel of four miR⁃NAs accurately differentiates malignant from benign indeterminate thyroid lesions on fine needle aspiration[J].Clin Cancer Res,2012,18(7):2032-2038.

[42]Stokowy T,Wojtas B,Krajewska J,et al.A two miRNA classifier differentiates follicular thyroid carcinomas from follicular thyroid adenomas[J].Mol Cell Endocrinol,2015,399(5):43-49.

[43]Colamaio M,Borbone E,Russo L,et al.miR-191 down-regula⁃tion plays a role in thyroid follicular tumors through CDK6 target⁃ing[J].J Clin Endocrinol Metab,2011,96(12):E1915-E1924.

文稿所含图表的具体要求

本刊采用三横线表，如遇有合计和统计学处理内容（如t值、P值等），则在此行上面加一条分界横线；表内数据要求同一指标有效位数一致，一般按标准差的1/3确定有效位数。表格中注释用的角码符号采用单个角码的形式，按a、b、c、d、e、f…顺序选用，在表注中依先纵后横的顺序依次标出。单一角码用于表示P＜0.05；若用表示P＜0.01，则用双角码，如“aP＜0.05；aaP＜0.01”。线条图的高宽比例以5∶7为宜。

图片要求有良好的清晰度和对比度，建议采用tif格式，按其在正文中出现的先后次序连续编码。组织（病理）学图片应注明染色方法和放大倍数。图片若为人像，应征得本人的书面同意，或遮盖其能被辨认出系何人的部分。

照片的大小以9 cm×6 cm为宜，每幅照片的背面应贴上在正文中出现的序码并注明上下方向。大体标本照片应有尺度标记。照片中需标注的符号(包括箭头)请另用纸标上，不要直接写在照片上，照片不可折损。机上下载的大体和组织、细胞图片应改拍为像片刊出。

R736.1

A

1007-6948(2017)06-0684-05

10.3969/j.issn.1007-6948.2017.06.032

国家自然科学基金（81472580）

天津医科大学肿瘤医院甲状腺颈部肿瘤科，国家肿瘤临床医学研究中心，天津市“肿瘤防治”重点实验室（天津 300060）

高明，E-mail:headandneck@126.com

（收稿：2016-11-12 修回：2017-10-25）

（责任编辑 张静喆）