肝胆胰恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群的变化及临床意义

华付 杨大刚 孙诚谊

(贵阳医学院附属医院肝胆外科，贵州 贵阳 550004)

肝胆胰恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群的变化及临床意义

华付 杨大刚△孙诚谊

(贵阳医学院附属医院肝胆外科，贵州 贵阳 550004)

肝胆胰； 恶性肿瘤； 外周血； T淋巴细胞亚群

机体的免疫情况与恶性肿瘤的发生和发展有着密切的联系。当宿主的免疫功能低下或受到抑制时，肿瘤发生率高；且肿瘤一旦发生又可通过其产生的免疫抑制因子进一步抑制机体的防御功能。在抗肿瘤免疫中，细胞免疫尤其是T淋巴细胞的作用更为重要。T淋巴细胞参与机体的抗肿瘤免疫应答，其亚群的数量是反应机体免疫功能的重要指标。本文应用流式细胞仪检测肝胆胰恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群的数量，以了解这部分患者的免疫功能情况。

1 资料与方法

1.1 临床资料

所选对象均为2011年4-10月在我科住院的患者。肿瘤组31例，男17例，女14例，年龄34～74岁，平均(59.6±11.3)岁。其中肝癌8例、胆管癌9例、胆囊癌2例、壶腹周围癌5例，胰头癌7例。病理诊断10例，临床诊断21例。所有病例均未应用化疗、放疗和其他对免疫功能有影响的药物。非肿瘤组为35例，男20例，女15例，年龄25～78岁，平均(53.1±15.9)岁。其中胆囊结石25例，胆囊息肉1例，胆总管结石6例，胆总管下端狭窄1例，脾血管瘤1例，肝血管瘤1例。所有病例均排除肿瘤相关疾病及对免疫功能有影响的药物使用史。

1.2 研究方法

1.2.1 仪器与试剂 BD公司FACSCanto流式细胞仪(美国BD公司)；绝对计数管(BD True count Tubes)；BD Tritest CD3/4/8抗人荧光试剂；溶血素(BD Simultest IMK-Lymphocyte Lysing Soloution)。

1.2.2 方法 研究对象入院后抽取空腹肘静脉血2 mL于EDTA-K2(乙二胺四乙酸二钾)抗凝管中，向True count管中分别加入20 μL抗体和50 μL的抗凝全血，混匀后于室温暗处孵育15 min。加入FACS(1×)溶血素2 mL，充分混匀后于室温暗处孵育10 min。1 000r/min离心5 min，弃上清，加2 mL磷酸盐缓冲液(PBS)洗1次。1 000r/min再次离心5 min，弃上清，加0.5 mL PBS充分混匀，24 h内上流式细胞仪进行分析。应用CaliBRITE标准微球、FACSCanto软件调节PMT电压、荧光补偿及灵敏度，应用FACS Diva分析软件对处理好的标本进行CD3+，CD4+，CD8+绝对计数。

1.3 统计学处理

2 结 果

肿瘤组和非肿瘤组年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。肿瘤组T细胞亚群与非肿瘤组比较，肿瘤患者CD3+、CD4+绝对计数降低，CD8+绝对计数升高，CD4+/CD8+比值降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 恶性肿瘤组患者T细胞亚群与非肿瘤组比较/(个/μL)

3 讨 论

恶性肿瘤的发生、发展与机体的免疫状态密切相关。正常的免疫系统在机体抗肿瘤的免疫监视功能中起重要作用。T细胞及其亚群是机体的主要效应细胞，在维持机体免疫平衡中起着重要作用。当它们在数量和功能上发生改变时，就会导致机体免疫功能紊乱而出现一些病理现象[1-2]。FCM根据淋巴细胞表面标志的不同可检测各细胞亚群的数量和比例，包括T淋巴细胞(CD3+)、B淋巴细胞(CD19+)、NK细胞(CD16+CD56+)，其中T淋巴细胞可进一步测定辅助/诱导T淋巴细胞(CD3+CD4+)、抑制/细胞毒T淋巴细胞(CD3+CD8+)[3]。不同的T细胞亚群有不同的免疫功能，CD3+抗原分子通常分布在成熟T细胞表面，故CD3+T细胞数量可代表机体总T细胞数量，反应机体总的细胞免疫状态。而CD4+T细胞通常代表T辅助细胞，CD4+细胞对抗体的生成、巨噬细胞及细胞毒T淋巴细胞的活化有辅助和放大效应，在免疫应答中处于中心地位，可识别肿瘤细胞分泌的可溶性抗原，参与B细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞和细胞毒T细胞的激活，进而发挥抗肿瘤作用。CD8+T细胞通常代表T抑制细胞，抑制机体免疫应答。CD4+/CD8+的比值反应了机体细胞免疫功能状态是否稳定，比值降低代表细胞免疫功能降低[4-6]。本研究结果显示：恶性肿瘤患者的CD4+细胞明显降低，反应患者T细胞的辅助功能下调，在产生抗体、杀伤癌细胞等方面的能力都明显下降。恶性肿瘤患者CD4+细胞降低，CD8+细胞增高，CD4+/CD8+的比值低于非肿瘤患者。提示肝胆胰恶性肿瘤患者存在细胞免疫功能低下。有研究[7]显示CD4+/CD8+比值随着肿瘤分期的提高而明显降低，提示肿瘤患者T细胞亚群功能的损害与临床分期有明显关系。由此可见通过观察CD4+/CD8+比值可以对肿瘤患者预后有初步的判断。

通过本研究可发现恶性肿瘤患者存在T细胞介导的细胞免疫改变和紊乱，因此检测患者外周血T细胞亚群的变化可直接反应机体的免疫功能状态。而检测肿瘤患者T细胞亚群水平对评估他们的细胞免疫功能及为临床进一步对恶性肿瘤治疗效果的评价提供临床参考依据，也为肿瘤的免疫增强治疗提供了理论依据。

[1] 路秦龙,郑锴,张鹏,等.胸腺切除术对重症肌无力胸腺瘤患者外周血T细胞亚群的影响及临床意义[J].实用医学杂志,2013,29(21):3549-3550.

[2] 路静.外周血T 细胞亚群检测在恶性肿瘤中的价值[J].中国现代药物用,2014,8(20):35-36.

[3] 李春海.临床诊疗指南免疫学分册[M].北京:人民卫生出版社,2008:31-34.

[4] 吉春字,杨异,赵珩,等.手术对肺癌患者外周血T细胞亚群的影响[J].上海医学,2004,27(10):763-764.

[5] 王嘉,曲秀娟,张敬东,等.肠癌患者外周血T淋巴细胞亚群数量及临床意义[J].中国医科大学学报,2014,4(43):289-292.

[6] 田文斐,高伟.食道癌患者根治性放疗前、后T细胞亚群的变化[J].检验医学,2012,27(4):321-323.

[7] 周晋华.流式细胞术分析不同分期的恶性肿瘤外周血T淋巴细胞亚群的变化[J].临床肿瘤杂志,2009,7(14):619-621.

R730.23

B

1000-744X(2016)04-0384-02

2015-06-16)

△通信作者,E-mail:gygd_yangdg@sina.com