高效液相色谱法测定食品中纳他霉素的检测方法分析

□ 朱盈蕊 李 琦 仵军红 郑州市食品药品检验所

高效液相色谱法测定食品中纳他霉素的检测方法分析

□ 朱盈蕊 李 琦 仵军红 郑州市食品药品检验所

本文建立了一种检测食品中纳他霉素的分析方法。样品采用甲醇超声提取，流动相为甲醇：11%（体积分数）乙酸溶液，流速为1.00 mL/ min，波长为305 nm，加标回收率为97.6%～104.2%，相对标准偏差小于6%，该方法简单、快速，为纳他霉素的进一步开发和利用提供依据。

纳他霉素是一种无臭、无味，低剂量且安全性高的天然防腐剂，能显著抑制酵母菌、霉菌真菌等，被广泛应用于乳酪、果汁、肉制品和糕点等食品中。我国《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》（GB2760-2014）规定了不同食品中纳他霉素的使用限量。为更好地保证此类食品安全，确保食品中防腐剂的使用在有效的控制范围内，建立一种快速、高效的检测方法十分必要。

目前，对纳他霉素的检测方法主要有薄层层析法、分光光度法、加压毛细管电色谱、高效液相色谱法和高效液相色谱串联色谱法等。本文采用高效液相色谱法检测糕点中纳他霉素的含量，通过对前处理方法和色谱分离条件的优化来达到检测限量低、灵敏度高的目的。

试验部分

仪器与试剂

Agilent 1260型液相色谱仪，配紫外检测器，安捷伦科技有限公司；Techcomp CT14RD高速台式冷冻离心机，天美（中国）科学仪器有限公司；VORTEX-5型涡旋混合器，江苏海门其林贝尔仪器制造有限公司；ME201E电子天平，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司。

纳他霉素标准储备溶液：精密称取纳他霉素标准品（纯度＞99%）0.010 0 g，用甲醇定容至100 mL，浓度为100 μg/mL。

纳他霉素标准溶液：准确吸取标准储备溶液1.00 mL于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，其浓度为1 μg/mL。分别准确量取1 μg/mL溶液0.25、0.50、1.25、2.50 mL和 5.00 mL于25 mL容量瓶中，用甲醇定容于刻度，作标准系列。

甲醇、乙酸为色谱纯，其余试剂均为分析纯，试验用水为超纯水，样品购自本地超市。

试验条件

C18反相色谱柱（5μm，4.6× 250 mm）；流动相为甲醇∶11%乙酸溶液=50∶50；流速为1.00 mL/min，波长为305 nm；进样量为10 μL。

样品处理

精确称取5.00 g样品，置于50 mL离心管中，加入30 mL甲醇，于涡旋混合器上混合均匀，超声提取30 min，加水10 mL混合均匀后置于离心机上以10 000 r/min离心10 min，上清液过0.45 μm滤膜，滤液待上液相色谱测定。

结果与讨论

色谱条件的优化

纳他霉素难溶于大部分有机溶剂，微溶于水，易溶于乙酸，试验选择甲醇-乙酸溶液为流动性，并对不同乙酸浓度和比例进行讨论。由试验可得,当甲醇和乙酸溶液比例为50∶50时，纳他霉素达到最大响应值；乙酸体积分数为11%时，纳他霉素的峰型最佳。因此选择甲醇∶11%乙酸溶液为50∶50的比例为流动性对纳他霉素进行测定。

对纳他霉素标准系列浓度进行测定，以纳他霉素质量浓度为横坐标，相应峰面积为纵坐标绘制标准曲线。结果表明：纳他霉素质量浓度在0.01～0.20 μg/mL，与其峰面积呈线性关系。回归方程为y=28.011 4c-4.334 7e-2，线性相关系数为0.999 9。将对照品逐步稀释，当稀释至0.02 μg/mL以下时，纳他霉素峰高在3倍基线噪声以下，故0.02 μg/mL为其最低检出浓度；按测定方法计算，定量检出限为0.04 mg/kg。

方法的回收率

在两种糕点空白样品中添加3个浓度水平的纳他霉素标准溶液，作加标回收率实验，结果见表1。由表1可知，纳他霉素在糕点中的加标回收率为93.6%～104.2%，相对标准偏差为为＜6%。

表1 纳他霉素的回收率

结论

本方法采用高效液相色谱法测定纳他霉素含量，选取糕点为实验材料，通过优化实验条件，得纳他霉素质量浓度在为0.01～0.20 μg/mL范围，与其峰面积呈线性关系。最低检出浓度为0.02 μg/mL，定量检出限为0.04 mg/kg，加标回收率为93.6%～104.2%，相对标准偏差＜6%。该方法操作简单、快速，准确可靠，为食品中纳他霉素的分析检测提供了一定的参考依据。

存在问题及展望

纳他霉素对真菌类有明显的抑制作用，对细菌和乳酸菌效果不大，若专一使用纳他霉素无法达到预期效果，因此与其他防腐剂协同使用应是未来的重点研究方向。

纳他霉素作为一种天然防腐剂以其安全、健康的特点而备受人们的关注，我国的纳他霉素产业起步较晚，产量较低，普及率不高。随着对其研究的逐步深入以及生产技术的逐步提高，会极大地推动纳他霉素的普及使用，也能更好地发挥其防腐作用。

朱盈蕊（1986-），女，汉族，河南邓州人，郑州市食品药品检验所，硕士研究生。研究方向：食品安全与分析。