铵硝营养对番茄幼苗根系中NR、GS活性及表达的影响

魏丽娜，周文灵，陈迪文，黄 莹，敖俊华，江 永，卢颖林

(广东省生物工程研究所(广州甘蔗糖业研究所)/ 广东省甘蔗改良与生物炼制重点实验室，广东 广州 510316)

铵硝营养对番茄幼苗根系中NR、GS活性及表达的影响

魏丽娜，周文灵，陈迪文，黄 莹，敖俊华，江 永，卢颖林*

(广东省生物工程研究所(广州甘蔗糖业研究所)/ 广东省甘蔗改良与生物炼制重点实验室，广东 广州 510316)

番茄；全根；分根；NR；GS；基因表达

1 材料与方法

1.1 植物培养

1.2 试验设计

采用全根和分根2种培养方式。

所有处理均设置6个重复。处理及代码见表1。

1.3 根系干重测定

收获时将地上部和根分开采样，根系用去离子水洗净后用吸水纸吸干，经杀青(105 ℃，30 min)后70 ℃烘至恒重，分别称重，为样品的干重。

1.4 组织中NR、GS活性的测定

参照董园园等[9]的方法。

1.5 番茄组织目的基因表达分析

参考沈静等[10]对水稻质膜质子泵基因表达的方法并进行了必要的修改。总RNA用Trizol提取，提取的RNA样品经1.5 %琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭(ethidium bromide, EB)染色后观察清晰、无拖尾现象和其他杂带，认为RNA样品质量可靠，然后用RNA直接进行反转录，得到cDNA产物，保存于-20 ℃冰箱。

表1 试验处理及代码

表2 试验中所用到的引物序列

根据已经发表的Lycopersiconesculentumnitrate reductase (NR)的mRNA序列(X14060)和Lycopersiconesculentumglutathione synthetase (GS)的mRNA序列(U15059)设计引物。用primer premier 5.0软件设计引物，同时设计Actin基因引物，以作为内参之用(表2，引物由南京金思特科技有限公司合成)。先以肌动蛋白基因Actin作为内参进行PCR扩增。在此基础上，分别对LeNR、LeGS基因进行PCR扩增。所有PCR产物都进行测序验证。

2 结果与分析

2.1 铵硝营养对番茄幼苗根系干重的影响

图中不同字母表示处理间差异显著性达P < 0.05Different letters indicate significant differences (P < 0.05) between treatments by Fisher’s-test (LSD)图1 不同形态N素对番茄幼苗根系干重的影响Fig.1 Effects of different N forms on root dry weight of tomato seedling

图中不同字母表示处理间差异显著性达(P<0.05)Different letters indicate significant differences (P<0.05) between treatments by Fisher’s-test (LSD)图2 不同形态N素对番茄幼苗根系中NR(A)和GS(B)活性的影响Fig.2 Effects of different N forms on NR (A) and GS (B) activity in root of tomato seedling

2.2 铵硝营养对番茄幼苗根系中NR和GS活性的影响

2.3 铵硝营养对番茄幼苗根系中NR、GS基因表达的影响

A，B和C分别代表为100∶0，75∶25和50∶50；D代表N|N处理中供侧；E和F分别代表N|A处理中供侧和供侧；G和H分布代表N|NA处理中侧和供侧图3 不同形态N素对番茄幼苗根系中NR和GS基因表达的影响Fig.3 Effects of different N forms on gene expression of NR and GS in root of tomato seedling

3 讨论与结论

3.1 铵硝营养对根系干重的影响

3.2 铵硝营养对NR、GS活性的影响

3.3 铵硝营养对NR、GS基因表达的影响

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(责任编辑 李 洁)

Effects of Different Nitrogen Forms on Activity and Expression of NR and GS in Root of Tomato Seedlings

WEI Li-na, ZHOU Wen-ling, CHEN Di-wen, HUANG Ying, AO Jun-hua, JIANG Yong，LU Ying-lin*

(Guangdong Bioengineering Institute(Guangzhou Sugarcane Industry Research Institute)/ Guangdong Key Lab of Sugarcane Improvement & Biorefinery, Guangdong Guangzhou 510316, China)

Tomato; Whole-root system; Split-root system; NR; GS; Gene expression

1001-4829(2016)09-2093-07

10.16213/j.cnki.scjas.2016.09.015

2015-06-30

广东省科技计划项目(2016A020221018)；广东省科技计划项目(2015B070701001)；广东省科技计划项目(2014B070705002)；广东省教育部产学研结合项目(2010B090400431)

魏丽娜(1981-)，女，硕士研究生，主要研究方向植物营养和生理生态研究，E-mail:Tel：020-34275633，*为通讯作者：卢颖林，E-mail:luyinglinbox@126.com。

Q945.1;S641.2

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