FOXP1与Livin基因表达对淋巴瘤病理特征及临床预后评价价值

夏靖媛，徐 薪

FOXP1与Livin基因表达对淋巴瘤病理特征及临床预后评价价值

夏靖媛，徐 薪

目的 探讨叉头框蛋白P1(FOXP1)与Livin基因表达对淋巴瘤临床病理特征及预后的评价价值。方法 选择2013-08至2015-08间在我院肿瘤科住院治疗的弥漫性大B细胞淋巴瘤患者80例为观察组，40例反应性淋巴结增生患者为对照组，观察并分析两组FOXP1与Livin表达情况。分析淋巴瘤患者FOXP1、Livin表达与临床病理特征的关系。结果 观察组FOXP1及Livin高表达的比例分别为77.5%、60.0%，均显著高于对照组比例20.0%、5.0%，差异具有统计学意义(P<0.05)。淋巴瘤患者中，高中危+高危IPI、原发部位(节内)、Non-GCB者FOXP1高表达比例分别为92.3%、86.2%、86.7%，比例更高，差异具有统计学意义(P<0.05)，存在B症状、高中危+高危IPI、Non-GCB者Livin高表达的比例分别为81.2%、80.8%、73.3%，比例更高，差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 弥漫性大B细胞淋巴瘤内FOXP1及Livin表达水平与其临床特征、病理类型存在密切关系。

淋巴瘤；B细胞；预后；肿瘤标记物

弥漫性大B细胞淋巴瘤是最常见的非霍奇金淋巴瘤，约占所有非霍奇金淋巴瘤的30%～40%，它具有明显的侵袭性，生物学行为活跃，常存在周围浸润及远处播散，预后差[1,2]。由于弥漫性大B细胞淋巴瘤具有特定的临床特征、组织病理学特征及遗传免疫特征，对放疗及化疗敏感，经合理治疗后可以提高生活质量，延长生存时间[3]。但由于该肿瘤存在明显的异质性，对治疗反应性不同，目前临床研究发现一些新的生物学指标可以评判其预后。FOXP1是一种翼型螺旋转录因子，属于FOXP亚家族，它在B细胞发育过程中起关键作用，在健康人体细胞中表达，在多种肿瘤组织中也广泛表达，关于FOXP1在弥漫性大B细胞淋巴瘤表达及与临床病理的关系已有研究，但存在争议。Livin表达于人胚胎组织及肿瘤细胞，属于凋亡蛋白，是目前免疫组化研究的热点[4]。本研究中，笔者通过对照研究，探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤中FOXP1及Livin表达情况。

1 对象与方法

1.1 对象 选择2013-08至2015-08间在我院肿瘤科住院治疗的弥漫性大B细胞淋巴瘤患者80例为观察组，包括男45例，女35例，年龄18～72岁，平均(51.8±3.6)岁。临床分期：Ⅰ期15例，Ⅱ期23例，Ⅲ期27例，Ⅳ期15例；国际预后指数评分：0～2分46例，3～4分34例。另选择40例反应性淋巴结增生患者为对照组，包括男23例，女17例，年龄18～71岁，平均(50.2±3.1)岁。两组在年龄、性别等方面无统计学差异，具有可比性(P>0.05)。本研究经院伦理委员会批准，向患者介绍研究目的及方法，并均签署知情同意书。纳入标准：(1)根据临床表现、实验室检查、影像学检查及病理学检查，符合弥漫性大B细胞淋巴瘤诊断标准[5]；(2)年龄≥18岁，初次确诊并于我院住院治疗，采用同一化疗方案；(3)无其他部位恶性肿瘤，无急性感染性疾病；(4)无严重心脏、肝脏或肾脏功能障碍；(5)自愿接受免疫组化检查；(6)化疗方案包括利妥昔单抗、环磷酰胺、阿霉素、长春新碱及强的松；(7)临床资料完整。

1.2 方法 取得检测标本后，经中性甲醛溶液(10%)固定，石蜡包埋切片，厚度3～4 μm。于烤片机烘烤2 h后置于60 ℃恒温箱处理24 h，应用二甲苯脱蜡、梯度乙醇浸泡脱水后应用枸橼酸修复液高压修复2 min，将3% H2O2滴于组织上以阻断内源性过氧化氢酶，磷酸缓冲盐溶液(PBS)处理后加封闭用羊血清，应用FOXP1单克隆抗体及Livin抗体(两者均购自北京中杉金桥生物技术有限公司)进行一抗孵育，置于4 ℃冰箱过夜，而后置于37 ℃恒温箱中复温，PBS冲洗5 min，共3次。应用50 μl生物素进行二抗孵育处理，置于37 ℃恒温箱中孵育10 min，PBS冲洗5 min，共3次。再应用50 μl链霉素抗生物素-过氧化物酶溶液，置于37 ℃恒温箱中孵育20 min，PBS冲洗5 min，共3次。在切片中添加2滴DAB溶液，显微镜下观察3～10 min控制显色时间，其中阳性显色为棕褐色或棕黄色，以自来水冲洗至终止发色，应用苏木素衬染，1%盐酸乙醇液分化，0.5%氢氧化氨液反蓝10 min，再次脱水透明，置于恒温箱上方，干燥后应用中性树胶封片。FOXP1及Livin均呈棕黄色或棕褐色，前者定位于细胞核中，后者定位于细胞质中，少量混合存在。低倍镜观察定位后采用高倍镜观察，选择10个视野，共计数100个肿瘤细胞，对FOXP1及Livin表达进行记录。染色强度包括0～3分四个等级[6]，其中0分为无染色，1分为浅黄色，2分为黄色，3分为棕黄色、棕褐色。

阳性细胞百分率包括0～3分四个等级[7]：其中0分为阳性细胞≤5%，1分为阳性细胞>5%，≤25%，2分为阳性细胞>25%，≤50%，3分为阳性细胞>50%。表达情况评价采用两者乘积，其中0分为(-)，1～4分(+)，5～8(++)，9～12(+++)，低表达为0分(-)，1～4分(+)；高表达为5～8(++)，9～12(+++)。

1.3 观察指标 分析观察组与对照组FOXP1及Livin表达情况。分析淋巴瘤患者FOXP1、Livin表达与临床病理特征[年龄、性别、IPI(国际预后指数)分型、原发部位、病理类型]的关系。

2 结 果

2.1 两组FOXP1及Livin表达情况的比较 观察组FOXP1及Livin以高表达为主，对照组FOXP1及Livin以低表达为主，观察组FOXP1及Livin高表达的比例均显著高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05，表1)。

表1 两组淋巴瘤患者FOXP1及Livin表达情况的比较 (n;%)

2.2 淋巴瘤患者FOXP1、Livin表达与临床病理特征的关系 淋巴瘤患者中，高中危+高危IPI、原发部位(节内)、Non-GCB(非生发中心)者FOXP1高表达比例更高，差异具有统计学意义(P<0.05)，存在B症状、高中危+高危IPI、Non-GCB者Livin高表达的比例更高，差异具有统计学意义(P<0.05)。FOXP1表达在不同年龄、性别及B症状存在与否方面均无统计学差异，Livin表达在不同年龄、性别及原发部位间差异均无统计学意义(表2)。

表2 淋巴瘤患者FOXP1、Livin表达与病理特征的关系 (n;%)

3 讨 论

弥漫性大B细胞淋巴瘤好发于老年人，男性多见，其特征性临床表现为进展迅速的无痛性肿块，其他常见症状包括发热、体重减轻等，影像学检查有助于病变的定位和定性诊断[8]。其具体的发病机制尚不明确，可能与分子遗传学及免疫机制有关。由于弥漫性大B细胞淋巴瘤侵袭性明显，若得不到及时合理的治疗，预后较差，化疗及放疗是其有效且常用的方法[9]。

弥漫性大B细胞淋巴瘤临床特征、分子遗传学特征存在很强的异质性，因此临床治疗及预后的个体化差异很大。虽然IPI评分可以指导临床治疗和评估预后，但存在一定的误判和差异[10]，因此采用一种易获得且准确的生物学标记是目前临床研究的重点和热点。本研究通过观察FOXP1及Livin表达与弥漫性大B细胞淋巴瘤临床病理特征及预后的关系发现，与反应性淋巴结增生患者比较，弥漫性大B细胞淋巴瘤的FOXP1及Livin高表达的比例均显著增高，差异具有统计学意义，提示淋巴瘤中FOXP1及Livin表达更高，与以往研究结果相似。且淋巴瘤患者中，高中危+高危IPI、原发部位(节内)、Non-GCB者FOXP1高表达比例更高，差异具有统计学意义，存在B症状、高中危+高危IPI、Non-GCB者Livin高表达的比例更高，差异具有统计学意义，提示FOXP1及Livin表达与弥漫性大B细胞淋巴瘤的临床特征及病理特征存在明显的关系。FOXP1属于FOX家族，参与人体多个正常的生理过程，其表达异常与恶性肿瘤、代谢异常及畸形病变有关。有研究发现，健康人体中存在FOXP1表达，在恶性肿瘤组织中，FOXP1表达升高，且不同的肿瘤中其表达存在差异[11]。也有学者通过临床病理分析发现，FOXP1表达与肿瘤患者临床特征及预后存在密切关系[12]。Livin属于凋亡抑制蛋白家族，包括两个亚型，其作用为通过抑制信号转导、蛋白酶等途径抗细胞凋亡。Livin可以存在于人体胚胎组织中，但在健康人体不表达或低表达。在多数肿瘤患者中，Livin呈明显高表达[13]。这与Livin正常凋亡机制受损而导致恶性潜能积累导致肿瘤发生有关。本研究结果说明通过对FOXP1和Livin的检测可以对弥漫性大B细胞淋巴瘤的临床特征及病理特征进行推测和评判，但两者存在一定差异，FOXP1表达在原发部位(节内)间存在差异，而Livin表达在B症状存在与否间存在差异。弥漫性大B细胞淋巴瘤内FOXP1高表达说明肿瘤细胞存在免疫逃逸现象，主要FOX家族蛋白表达密切相关。而弥漫性大B细胞淋巴瘤内Livin高表达则提示细胞凋亡机制存在障碍而反应性导致Livin表达升高[14]。肿瘤微环境中的肿瘤细胞、细胞间质及周围组织间存在复杂而密切的关系，通过检测FOXP1及Livin的表达，可以对肿瘤预后进行评估[15]。

总之，弥漫性大B细胞淋巴瘤内FOXP1及Livin表达升高，且FOXP1及Livin表达水平与其临床特征、病理类型存在密切关系。

[1] 陈 敏,杨桂芳.弥漫大B细胞淋巴瘤两种亚型中多药耐药蛋白的表达差异及临床意义[J].武汉大学学报(医学版),2016,37(2):232-235.

[2]ChuanHe,ZhigangLiu,JieJi,et al.Prognosticvalueofsurvivininpatientswithnon-Hodgkin’slymphoma:ameta-analysis[J].IntJClinExpMed,2015,8(4): 5847-5854.

[3] 齐 彦,廖 斌,杨丽英,等.非霍奇金淋巴瘤中MCM2、Cx43、Skp2蛋白的表达[J].现代肿瘤医学,2016,24(6):958-961.

[4]Bo-YoungOh,Ryung-AhLee,KwangHoKim.siRNAtargetingLivindecreasestumorinaxenograftmodelforcoloncancer[J].WorldJGastroenterol,2011,17(20): 2563-2571.

[5] 王健超,张文燕,丁文双，等.异常表达CD56的弥漫性大B细胞淋巴瘤临床病理观察[J].中华病理学杂志,2016,10(2):78-82.

[6] 范小红,孟亚红,邹健等.乙肝表面抗原阳性的非霍奇金淋巴瘤患者化疗前后T淋巴细胞亚群的变化[J].现代中西医结合杂志,2016,25(9):920-922.

[7] 李贻阳,牛绍清,温 戈,等.基于GELOX方案诱导化疗的Ⅰ-Ⅱ期结外鼻型K/T细胞淋巴瘤根治性放疗的预后分析[J].中华放射肿瘤学杂志,2016,25(2):140-145.

[8] 张亚楠.FOXP1蛋白在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及预后意义[J].重庆医学,2015,44(17):2368-2370.

[9] 朱 丹,王瑛坚.原发性卵巢上皮性恶性肿瘤中Livin和Fas的表达及相关性分析[J].中国实验诊断学,2014,18(8):1312-1314.

[10] 陈廷玉,卢春凤,关宝生,等.宫颈癌中Livin和COX-2蛋白的表达及相关性研究[J].解剖学研究,2015,37(5):398-400.

[11] 胡成如,王靖华,耿怀成,等.叉头框转录蛋白1在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及预后意义[J].临床肿瘤学杂志,2012,17(4):339-342.

[12] 沈 琳,陈波斌,陈 字,等.原发性中枢神经系统淋巴瘤FOXPl和CyclinE的表达及其意义[J].中华血液学杂志,2012,33(8):648-652.

[13]IAbd-Elrahman,VDeutsch,MPick, et al.DifferentialregulationoftheapoptoticmachineryduringmegakaryocytedifferentiationandplateletproductionbyinhibitorofapoptosisproteinLivin[J].CellDeathDis,2013,4(11):e937.

[14] 李 蓉,潘湘涛,陆 晔,等.Livin和Smac蛋白在非霍奇金淋巴瘤中的表达及其临床意义[J].白血病.淋巴瘤,2010,11(8):494-496.

[15] 李文琦,李晓林.Livin和Survivin基因在成人急性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义[J].中国实验血液学杂志,2011,19(4):921-925.

(2016-05-23收稿 2016-08-25修回)

(责任编辑 岳建华)

Value of FOXP1 and Livin in evaluation of prognosis of lymphoma

XIA Jingyuan and XU Xin.Department of Pathology, General Hospital of Chinese People’s Armed Police Force, Beijing 100039,China

Objective To explore the significance of FOXP1 and Livin expressions in the evaluation of clinicopathological characteristics and prognosis of lymphoma.Methods Eighty patients with diffuse large B cell lymphoma treated at our hospital between August 2013 and August 2015 were selected as observation group, with 40 cases of reactive lymph node hyperplasia patients as control group. The expressions of FOXP1 and Livin in the two groups were observed and analyzed. The relationships between the expressions of FOXP1 and Livin in patients with lymphoma and the clinicopathological features were analyzed.Results The percentage of high expressions of FOXP1 and Livin in the observation group was 77.5% and 60% respectively, which was significantly higher than that in the control group (20%, 5%), and the difference was statistically significant (P<0.05). Among the high-risk IPI and non-GCB patients of lymphoma or those with primary lymphoma, high expression rates of FOXP1 were 92.3%, 86.2%, 86.7% respectively, the proportion was higher, and the difference was statistically significant (P<0.05). In the presence of B-symptom, the expression rates of Livin were 81.2%, 80.8%, 73.3% respectively, the proportion was higher, and the difference was of statistic significance (P<0.05).Conclusions The expression level of FOXP1 and Livin in patients with diffuse large B cell lymphoma is closely related to its clinical features and pathological types.

lymphoma; B cell; prognosis; tumor marker

夏靖媛，硕士研究生。

100039 北京，武警总医院病理科

徐 薪，E-mail:xxblueflower@163.com

R365