双孢蘑菇菌种质量检验规程

周林，郭尚，萧晋川，赵照林，郭宵飞，刘晓钢，南晓洁，李艳婷，江山，张秋虎

(山西省农业科学院食用菌研究所，太原 030031)



双孢蘑菇菌种质量检验规程

周林，郭尚，萧晋川，赵照林，郭宵飞，刘晓钢，南晓洁，李艳婷，江山，张秋虎

(山西省农业科学院食用菌研究所，太原 030031)

食用菌菌种是食用菌生产的基础，起着非常重要的巨大的作用。双孢蘑菇菌种作为食用菌生产资料进入商业活动中，具有商品的属性。介绍了双孢蘑菇菌种商品质量的检验内容和要求，分析了菌种质量检验中的重点操作规范，提出了双孢蘑菇菌种商品质量检验规程，作为山西省地方标准推荐，供山西的广大双孢蘑菇生产者和菌种生产者以及关联业务人员参考应用。

双孢蘑菇；菌种商品；质量检验

随着我国经济实力的大发展，工农业产量产值在世界中占有越来越重要的位置，我国的食用菌产业不断扩大，生产总量达到3千万吨左右，在世界食用菌生产量中占据第一位[1]。食用菌生产量的增长，菌种是至关重要的。作为生产资料的菌种进入商业活动中具有商品的属性，就有商品的质量标准和相应的检验规则。

双孢蘑菇(Aagaricusbisporus)是主要的食用菌产品之一，微生物分类属于担子菌亚门(Basidiomycotina)、伞菌目(Agaricales)、蘑菇科(Agaricaceae)、蘑菇属(Agaricus)的草腐菌，在全国乃至世界上都是占有重要地位的，对食用菌产业发展具有重大的影响。双孢蘑菇的菌种作为生产资料是其双孢蘑菇生产的重要环节，是生产量和产品质量的第一关键。菌种的生产技术要求和规范以及菌种的商品质量标准和检验，直接影响食用菌的生产和产品质量。为了实现双孢蘑菇菌种生产的技术规范化，质量标准化，推进我国特别是山西食用菌产业走向现代化，维护菌种生产者、经营者和使用者的合法权益，根据我国国家机关，质量管理部门的有关标准、规范，我们系统地，精准地将双孢蘑菇的菌种生产技术与质量管理标准总结出来，供广大双孢蘑菇企业，栽培农户者，菌种生产者以及管理者参考应用。本文系统地介绍双孢蘑菇菌种的质量检验标准。

1 我国双孢蘑菇及其菌种生产与质量标准介绍

我国各级政府以及食用菌管理部门都非常重视食用菌产业的发展和产品质量，制定了很多相关的法规标准，技术规范等，监查管理有关食用菌产业的生产、流通、加工、销售各个环节[2]。双孢蘑菇也有很多相应的国家标准，行业标准以及各省的地方标准和企业标准[3]。我们在制定本技术规范时也参照了很多国家有关标准和双孢蘑菇的有关技术标准，如《中华人民共和国种子法》；《食用菌菌种管理办法》；《GB/T 12728-2006食用菌术语》；《GB/T 23190-2008双孢蘑菇》；《NY/T 528-2010食用菌菌种生产技术规程》；《NY/T 1846-2010食用菌菌种检验规程》；《NY/T 1731-2009食用菌菌种良好作业规范》；《GB/T 19171 双孢蘑菇菌种》；《GB/T 7096 食用菌卫生标准》；《GB191-1990 包装储运图示标准》；《GB4789.28食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》；《NY/T1097-2006食用菌菌种真实性鉴定 酯酶同工酶电泳法》；《GB9688 食品包装用聚丙烯成型品卫生标准》；《DB23 T8 58-2005 双孢蘑菇菌种生产技术规程》；《DB31 T2 42-2000 食用菌菌种 双孢蘑菇》等等。在本文中引用的有关上述标准中的条文，凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误内容)或改订版，均不适用本规程。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本规程。

2 菌种商品生产的工艺流程

菌种生产所包含的内容一般是菌种生产制作涉及到的，生产条件，设备，人员，技术，操作，质量检验，入库，运输，储藏等全过程。

菌种商品生产的工艺流程包括，生产场地选择——环境水源整备——厂区布局与厂房设置——设备与设施——生产原料储备——卫生检验与消毒——培养基制成——分装——灭菌——冷却——接种——培养(检验)——成品——检验合格——入库管理

3 菌种生产场(机关，企业)的责任与义务

菌种场生产食用菌菌种，并作为商品，食用菌的生产资料销售贩卖，必须经过国家有关管理部门审批合格，持有生产，销售食用菌菌种的资质证明[4]。

生产或出售菌种的企业或科研单位，对所生产的菌种以及出售的菌种商品的质量负有责任，并有义务将所生产的菌种商品的使用方法和注意事项向菌种使用者说明。

4 菌种产品质量检验要求

4.1 菌种质量检验(包括母种，原种，栽培种)要符合GB/T19171[5]， NY/T 528-2010[6]， NY/T 1846-2010[7]。

4.2 菌种生产单位要配有专职的质量管理人员和质量检测人员，这些人员应该经过特殊的专业训练，具有一定的专业资质、专业经历和检测技能[4]。

4.3 菌种质量检验采取生产单位常规自检和国家质量管理部门监查检测相结合的方式。生产单位制定质量管理规则，设立专职检验人员，按期进行质量检验，并对全部生产中的质量管理工作统一行使管理职责。菌种生产单位应与国家专管农产品质量和食用菌产品质量的有关单位积极配合，主动接受质量管理和检测。

4.4 菌种质量检验的抽样

4.4.1 质量检验的抽样应具有代表性，按产品的批次进行。母种批次是指同一品种，接种时间，培养方法，培养条件的产品；原种，栽培种批次是指同一种源，制作方法，培养方法，培养条件的产品。

4.4.2 抽样方法采取随机抽取法，按批随机抽取被检样品。母种按品种、培养条件、接种时间分批编号，原种、栽培种按菌种来源、制种方法和接种时间分批编号。

4.4.3 母种、原种、栽培种的抽样量分别为该批菌种量的10%，5%，1%。但每批抽样数量不得少于10支、瓶(袋)；超过100支、瓶(袋)的，可进行两级抽样(参照GB/T19171[5])。

4.5 菌种质量检验项目和检验方法(如表1所示)

表1 菌种质量检验项目和检验方法

表1续

4.5.1 微生物学实验。表1中的菌丝培养过程中的杂菌检验采用培养物镜检，用放大倍数不低于10×40的光学显微镜对培养物的水封片进行观察(参照NY/T1846-2010[7])，每一检样应观察不少于30个视野。

4.5.2 细菌检验。取少量疑有细菌污染的培养物，按无菌操作接入GB4789.28[8]中4.8规定的营养肉汤培养液中，25～28℃振荡培养1～2天，观察培养液是否混浊。培养液混浊，为有细菌污染；培养液澄清，为无细菌污染。

4.5.3 霉菌检验。取少量疑有霉菌污染的培养物，按无菌操作接入PDA中，25～28℃培养3～4天，观察到双孢菇以外的菌落，检查是否有绿色，黑，红，黄，灰等颜色的异常，或有异味出现，可认为有霉菌污染。必要时可以做水封片检验(参照NY/T1846-2010[7])。

4.5.4 菌丝生长速度测定(参照NY/T1846-2010[7]4.5执行)。

母种：用直径90mm的培养皿灭菌后，在无菌条件下倒入使用的(如PDA等)培养基20mL，制成平板，接种平板5个，25℃±1℃下培养，48h后观察是否有污染发生，之后再培养7～10天，观察并记录菌丝每日生长量以及长满平板天数。

原种和栽培种：使用培养基(培养基参照NY/T528-2010[6])如下任选1种。

腐熟麦杆或稻杆(干)77%，腐熟牛粪粉(干)20%,石膏粉1%,碳酸钙2%,含水量62%±1%,pH7.5。

腐熟棉籽壳(干)97%，石膏粉1%,碳酸钙2%,含水量55%±1%, pH7.5。

谷粒(小麦，谷子，玉米，高粱)98%，石膏粉2%,含水量50%±1%, pH7.5。

灭菌后接种，在25℃左右下培养，3日后进行首次观察，以后每周观察1次，菌丝长满之前1周要每日观察，记录菌丝生长速度和长满瓶或袋的天数。

4.5.5 菌种遗传性鉴定(参照酯酶同工酶(Est)鉴定 NY/T1097-2006[9])。

取菌龄为15～20天的试管母种,刮取菌丝,按1∶3∶0.5的比例混合菌丝(g)、0.1mol/L磷酸缓冲液(mL)和石英砂(g),研磨成匀浆,台式离心机10000r/min离心5min,取上清液,按5∶1∶1的比例混合上清液、40%蔗糖和0.01%溴酚蓝溶液作为电泳样品, 4℃下冷藏备用。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳。用pH8.9Tris-HCl缓冲液配制9%分离胶,用pH8.3Tris-甘氨酸作电极缓冲液。点样75μL, 3℃下120V电泳20min后稳压200V,4h。用固蓝RR盐60mg, 0.1mol/L磷酸缓冲液(pH6.0) 80mLα-萘乙酯38mg和β-萘乙酯38mg溶于3mL丙酮配制的染色液染色,显现酶谱,再根据特征带分型。

4.5.6 品种栽培特性试验。将被检母种制成原种。栽培试验要根据供试种类选择适当培养基，接种后分3组(每组3m2)进行常规管理，同时将该母种的出发菌株设为对照，亦做同样处理。根据表2所列项目，做好栽培记录，统计检验结果。对比二者的检验结果，以时间计的检验项目中，被检母种的任何一项时间较对照菌株推迟5天以上(含5天)者，为不合格；产量性状差异显著低于对照菌株者，为不合格；菇体外观形态与对照明显不同或畸形者，为不合格。

表2 母种栽培特性检验项目

4.5.7 各种菌种产品经过上述质量检验，确认其遗传类型与对照相同，再经出菇试验确定产量及品质等栽培农艺性状合格，方可用于扩大繁殖或出售。

5 菌种商品的标签，标志，包装检验

5.1 菌种商品标签、标志、包装

作为商品的菌种产品，要逐一检查后，贴上商品标签。每支、瓶(袋)菌种都要贴有清晰的标签、标志，进行良好的包装。

5.2 菌种商品的标签，标志，包装检验

按照国家标准. GB191-1990 包装储运图示标准》中的规定进行检验。

6 菌种检验合格的判定与检验档案

6.1 根据按以上检验方法检验的结果判断菌种商品是否合格。凡是全部符合质量检验标准的，判定为合格菌种商品，其中任何一项不符合质量检验标准的，判定为不合格菌种商品，不合格菌种商品不得出售。

6.2 菌种商品质量检验记录建立档案，并保存至少2年以上。

7 菌种商品质量保证书及使用说明书

7.1 凡是菌种商品，包括商业销售、研究试验转让、生产示范推广等使用的菌种，其生产单位都要具有菌种产品质量保证书，以示菌种质量合格，并对产品承担义务和责任，做到对使用者负责，对社会负责。

7.2 菌种商品应具备菌种使用说明书，以帮助使用者更好地生产，获得更好的效益。

[1]张俊飚，李波. 对我国食用菌产业发展的现状与政策思考[J]. 华中农业大学学报(社会科学版)，2012(5)：13-21.

[2]李贺，许修宏，王相刚. 我国食用菌技术标准的现状、问题及对策研究[J]. 中国食用菌， 2015(3)：1-6.

[3]郑素月，黄晨阳，张金霞. 我国食用菌质量标准化体系建设及实施概况[J].浙江食用菌，2009,17(3)：6-9.

[4]中国农业部. 食用菌菌种管理办法(农业部令2015年第1号修订) http://www.moa.gov.cn，20150506_4581023.htm，2015-05-06 11:07

[5]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会. GB/T 19171-2003 双孢蘑菇菌种[S].北京:中国标准出版社, 2003.

[6]中国农业部. NY/T 528-2010 食用菌菌种生产技术规程[S]. 北京:中国标准出版社， 2010.

[7]中国农业部. NY/T 1846-2010 食用菌菌种检验规程[S]. 2010.

[8]中国标准化委员会. GB4789.28 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求[S].北京:中国质检出版社，2014.

[9]中国农业部. NY/T 1097-2006 食用菌菌种真实性鉴定 酯酶同工酶电泳法[S].2006.

[10]中国标准化委员会. GB/191-2008 包装储运图示标志[S].北京:中国标准出版社， 2008.

Commodity Quality Inspection Items and Methods ofAgaricusbisporusSpawn

Zhou Lin, Guo Shang, Xiao Jinchuan, Zhao ZhaoLin,Guo Xiaofei, Liu Xiaogang，Nan Xiaojie, Li Yanting, Jiang Shan, Zhang Qiuhu

(Shanxi Provincial Academy of Agricultural Sciences,Institute of Edible Fungi, Taiyuan 030031)

The spawn is very important for development of edible fungus industry.Agaricusbisporusspawn as edible fungus production data to enter the commercial activity, has the attribute of commodity. This paper introduces the inspection contents and requirements ofAgaricusbisporusspawn quality. The rules for the inspection of product quality ofAgaricusbisporusspawn were put forward，and offers reference for the large number ofAgaricusbisporusproducer and the related service personnel.

Agaricusbisporus; Spawn commodity；Quality standard

房春果(1969-)，男，工程师，从事林业生产与林业科研工作，E-mail：346857294@qq.com。

2016-07-06

山西省煤基重点科技攻关项目(FT2014-03);山西省农科院博士基金 (YBSJJ1616)资助

S646.1+1

B

作者简介：周林(1958-)，男，博士，主要从事食用菌资源及菌根食用菌共生机理研究，食用菌生产技术与产品质量保证体系研究，E-mail：nkysyj301@126.com。

DOI.:11.13268/j.cnki.fbsic.2016.06.015