SLCO1B1 521T>C基因多态性对瑞舒伐他汀钙降脂疗效的影响

张昀赟， 叶小磊， 王美华， 陈季志， 查 芹



SLCO1B1 521T>C基因多态性对瑞舒伐他汀钙降脂疗效的影响

张昀赟1， 叶小磊2， 王美华1， 陈季志1， 查 芹1

目的 观察SLCO1B1 521T>C基因多态性对瑞舒伐他汀钙降脂疗效的影响。方法 纳入2015年1月-2015年12月期间我院神经内科高脂血症患者，均口服瑞舒伐他汀钙片10 mg，一次/日，睡前服用。应用ARMS-PCR方法探索中国人群中SLCO1B1 521T>C的基因型分布频率，并分别检测用药前与用药后1 w、6 w的血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)，并计算其变化率。结果 瑞舒伐他汀治疗1 w后，各组TC、TG、LDL-C、HDL-C变化率差异均无统计学意义(P>0.05)。用药6 w后，TC组和CC组较TT组能显著降低TC、LDL-C及升高HDL-C水平，有统计学意义(P<0.01)，但TC组和CC组间差异无统计学意义(P>0.05)。各组间TG变化率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SLCO1B1 521T>C基因变异可增强瑞舒伐他汀钙降脂疗效。

瑞舒伐他汀； SLCO1B1； 基因多态性； 高脂血症； ARMS-PCR

他汀类药物是目前降脂最有效的药物。但是，不同个体的获益程度不尽相同。有研究显示他汀类药物调脂作用存在的个体间差异可达70%[1]。不同个体的疗效差异主要取决于药物代谢和转运的基因多态性。瑞舒伐他汀钙作为一种有效、安全的新型他汀类药物，疗效也存在个体差异[2]。瑞舒伐他汀钙主要经阴离子转运多肽(OATP1B1)转运进入肝细胞内发挥药效[3]。OATP1B1由SLCO1B1编码，其中521T>C突变位点具有重要的功能意义。国内外目前关于SLCO1B1 521T>C多态性对瑞舒伐他汀影响的研究较少，且均为药代动力学相关研究，药效学尚未见于文献。本研究将探索SLCO1B1 521T>C在中国人群中的突变频率，及其对瑞舒伐他汀钙调脂疗效的影响，为瑞舒伐他汀临床个体化用药提供参考。

1 资料与方法

1.1 研究对象 收集2015年1月-2015年12月于我院神经内科就诊的高脂血症患者。入选病例标准：本院成人高脂血症患者，肝肾功能正常，总胆固醇(TC)≥5.2 mmol/L或甘油三酯(TG)≥1.7 mmol/L，或低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)≥3.12 mol/L，或高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)≤1.16 mmol/L。口服瑞舒他汀10 mg，一次/日，睡前服用作为唯一调脂药物，且给药前2 w内未服用过其他调脂药物。

收集符合上述标准共62例。其中，男34例,女28例，年龄46～86岁，平均(66.16±10.61)岁。

1.2 研究方法

1.2.1 血样的采集 入选患者接受瑞舒他汀治疗前，采集静脉血1 ml入EDTA抗凝试管，-20 ℃冷藏，统一提取DNA。同时采集静脉血2 ml，检测TC、TG、LDL-C 及 HDL-C基础值。患者规律服药1 w及6 w后，分别于服药后10 h左右采集静脉血2 ml，测定治疗后TC、TG、LDL-C 及 HDL-C值。

1.2.2 血液DNA提取 采用Qiagen外周血DNA提取试剂盒提取外周血白细胞DNA，检测DNA质量，用灭菌蒸馏水将提取的DNA稀释一定倍数作为PCR模板。

1.2.3 基因型检测

1.2.3.1 PCR引物建立 SLCO1B1 521T>C目的片段PCR扩增引物根据参考文献进行设计。前向外引物：5’-AAGTAGTTAAATTTGTAATAGAAATGC-3’，反向外引物：5’-GTAGACAAAGGGAAAGTGATCATA-3’；前向内引物：5’-GGGTCATACATGTGGATATAAGT-3’，反向内引物：5’-AAGCATATTACCCATGAACG-3’。

1.2.3.2 PCR扩增体系 PCR扩增体系50 μl：10×buffer 5 μl；2.5 mmol/L dTTP、dATP、dGTP、dCTP 共4 μl，2.5 μmol/L引物各1 μl，Taq DNA聚合酶0.5 μl，DNA模板200 ng，双蒸水补足至50 μl。

1.2.3.3 PCR 反应条件 94 ℃预变性5 min，94 ℃变性30 s，48 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，38个循环，72 ℃再延伸5 min。

1.2.3.4 电泳分型 称取1.25 g琼脂糖粉放入50 ml电泳缓冲液中，微波加热至溶解；将溶液冷却至约60 ℃，加入10 mg/ml溴化乙锭2.5 μl，充分混匀后将倒入胶膜中，插入梳子；移去梳子，根据需要切割凝胶；将凝胶片放入电泳槽中，槽中加入TBE缓冲液至过胶面；10 μl DNA样品与上样缓冲液混合后，加入样品槽中，盖上电泳槽并通电，DNA向阳极移动，直至溴酚蓝和二甲苯青在凝胶中迁移出适当的距离，约需40 min；切断电源，将凝胶从电泳槽中取出，在紫外灯下检查并照相。

2 结 果

2.1 SLCO1B1 521T>C基因型及等位基因分布频率 62例高脂血症患者中，T/T、T/C、C/C基因型分别为42例(67.74%)、14例(22.58%)、6例(9.68%)。等位基因C和T的频率分别为 79.03%和20.97%。

2.2 一般资料比较 3组在年龄、性别、身体质量指数[BMI=体重(kg)/身高2(m)]、高血压病、糖尿病方面差异均无统计学意义(P>0.05)(见表1)。

2.3 SLCO1B1 521T>C不同基因型治疗前后血脂的比较 3组用药前TC、TG、LDL-C、HDL-C水平差异均无统计学意义(P>0.05)(见表2)。用药1 w后，各组TC、TG、LDL-C、HDL-C变化率差异均无统计学意义(P>0.05)(见表3)。用药6 w后，TC组和CC组较TT组能显著降低TC、LDL-C及升高HDL-C水平，有统计学意义(P<0.01)，但TC组和CC组间差异无统计学意义(P>0.05)(见表4)。各组间TG变化率差异无统计学意义(P>0.05)(见表4)。

2.4 不良反应 瑞舒伐他汀治疗1 w后，所有病例均未出现肝功能损害、肾功能损害、肌酶升高等不良反应。治疗6 w后，出现肝功能损害共4例，TT组3例，TC组1例，均占7.14%，未出现肾功能损害、肌酶升高等不良反应。

表1 一般资料比较

表2 治疗前各组血脂水平的比较

表3 治疗1 w后各组血脂变化率比较

表4 治疗6 w后各组血脂变化率比较

与TC、CC组相比较*P<0.01，△P>0.05

3 讨 论

影响药物药代-药效差异的主要因素是药物的吸收、分布、代谢和排泄。只有约10%瑞舒伐他汀钙经CYP450代谢，大部分以原形排出，因此其调脂作用的个体差异可能主要来自于细胞膜上的转运体[4]。瑞舒伐他汀钙主要由阴离子转运多肽(OATP1B1)转运进入肝细胞，同时主要经乳腺癌抑制蛋白(BCRP)外排出肝脏[3]。但有研究显示，中国健康受试者BCRP野生型组和突变组在AUC、Cmax、总清除率和肾清除率上均无显著性差异[5]。OATP1B1由位于染色体12pl2的SLCO1B1编码，SLCO1B1具有高度的遗传多态性，目前研究发现有功能意义改变的突变位点为521T>C和388A>G[6]。521T>C突变使OATP1B1转运能力下降， 388A>G 突变则能升高OATP1B1转运能力[6]。但国内外均有研究显示521T>C突变降低转运体转运的作用远大于388A>G提高的作用，二者同时发生突变后，OATP1B1功能意义的改变仍然是以521T>C为主[7,8]。因此，此次试验我们选取SLCO1B1 521T>C位点作为研究对象。

本研究发现用药1 w后，各组TC、TG、LDL-C水平均明显下降，HDL-C升高，但各组间变化率无明显差异。有相关药动学研究显示SLCO1B1 521T>C突变增加瑞舒伐他汀体内吸收程度，减慢消除过程[9]，与此矛盾。但是用药6 w后，各项指标下降/升高均较前显著，且TC组和CC组较TT组能更显著降低TC、LDL-C及升高HDL-C水平。瑞舒伐他汀中国注册临床研究协作组研究显示，每日服用10 mg瑞舒伐他汀，6 w可发挥最大降脂作用[10]。因此，用药1 w后各组间指标变化率无差异可能与药物尚未完全起效有关。本研究中我们发现肝功能损害现象，TT组和TC组均占7.14%，因此在用药过程中仍需关注肝功能，但SLCO1B1 521T>C基因变异或许对此无影响。

综上所述，SLCO1B1 521T>C基因变异可增强瑞舒伐他汀钙降脂疗效。但本研究样本量小，降脂疗效受其他遗传因素、生活习惯等多方面影响，因此，尚需进行大样本，多因素联合试验综合分析。

[1]Cziraky MJ,Willey VJ,McKenney JM,et al.Statin safety: an assessment using an administrative claims database[J].Am J Cardiol,2006,97(8A):61.

[2]Olsson AG,Pears J,McKellar J,et al.Effect of rosuvastatin on low-density lipoprotein cholesterol in patients with hypercholesterolemia[J].Am J Cardiol,2001,88:504-508.

[3]Kitamura S,Maeda K,Wang Y,et al.Involvement of multiple transporters in the hepatobiliary transport of rosuvastatin[J].Drug Metab Dispos,2008,36(10):2014-2023.

[4]Davidson M,Ma P,Stein EA,et al.Comparison of effects on low-density lipoprotein cholesterol and high-density lipoprotein cholesterol with rosuvastatin versus atorvastatin in patients with type IIa or IIb hypercholesterolemia[J].Am JCardiol,2002,89:268-275.

[5]吴娜琼,郭远林,徐瑞霞,等.他汀类药物代谢相关基因多态性与疗效和安全性的关联[J].临床药物治疗杂志,2012,10(6):10.

[6]田 蕾,韩璐璐,蒋娟娟,等.乳腺癌耐药蛋白BCRP基因多态性对瑞舒伐他汀人体药动学的影响[J].中国新药杂志,2014,23(1):62-66.

[7]王丽萍,周宏颢.基因SLCO1B1和ABCG2突变对中国男性健康人群应用瑞舒伐他汀钙的影响[D].中南大学,2012.

[8]Lee E,Ryan S,Birmingham B,et al.Rosuvastatin pharmacokinetics and pharmacogenetics in white and Asian subjects residing in the same environment[J].Clin Pharmacol Ther,2005,78(4):330-341.

[9]隋双明,金 华,新 华,等.ATP1B1 基因位点 521T→C的突变对瑞舒伐他汀在中国健康人体内药代动力学特征的影响[J].药学学报,2011,46(6):695-700.

[10]瑞舒伐他汀中国注册临床研究协作组.瑞舒伐他汀治疗中国高胆固醇血症患者疗效和安全性的随机双盲多中心对照研究[J].中华心血管病杂志,2007,35(3):207-2011.

Effect of SLCO1B1 521T>C gene polymorphism on lipid lowing of rosuvastatin

ZHANG Yunyun,YE Xiaolei,WANG Meihua,et al.

(Department of Nuerology,The Affiliated Hospital of Ningbo University Medical College,Ningbo 315000,China)

Objective To observe the effect SLCO1B1 521T>C gene polymorphism on lipid lowing of rosuvastatin.Methods From 2015-1 to 2015-12,patients with hyperlipidemia in department of neurology were included.They were treated with rosuvastatin 10 mg,1 times/day,at bedtime. ARMS-PCR was used to explore SLCO1B1 521T>C gene frequency distribution of chinese.The level of cholesterol (TC),triglyceride (TG),low density lipoprotein cholesterol (LDL-C) and high density lipoprotein cholesterol (HDL-C) were detected before treatment and 1 week,6 weeks after treatment,and calculate the rates of change.Results After 1 week of treatment,there was no significant difference in the change rate of TC,TG,HDL-C and LDL-C in all the groups (P>0.05).After 6 weeks of treatment,LDL-C,TC of TC and CC groups were significantly lower than TT group.HDL-C of TC and CC groups was higher.There was statistical significance (P<0.01).But there was no significant difference between TC group and CC group (P>0.05).There was no significant difference in the change rate of TG between the groups (P>0.05).Conclusion SLCO1B1 521T>C gene mutation can enhance the effect on lipid lowing of rosuvastatin.

Rosuvastatin; SLCO1B1; Gene polymorphism; Hyperlipemia; ARMS-PCR

1003-2754(2016)06-0533-03

2016-04-12；

2016-05-30

(1.宁波大学医学院附属医院神经内科，浙江 宁波 315000；2.宁波市医学科学研究所，浙江 宁波 315000)

张昀赟，E-mail：shadow830101@163.com

R743

A