TBX3在胃癌组织中的表达及临床意义

李海英　崔敏　牟清海　曹璋

【摘 要】目的：探讨胃癌组织中TBX3的表达水平及其与临床病理特征的相关性。方法：采用免疫组织化学对130例胃癌组织中TBX3的表达进行检测，分析其与肿瘤临床病理特征的相关性。结果：胃癌组织中TBX3阳性表达率为36.2%（47/130），TBX3在胃癌组织中的阳性表达在不同胃癌大小组间差异有统计学意义。TBX3在胃癌组织中的阳性表达与患者性别、年龄、病理分型、肿瘤部位、淋巴结有无转移、静脉内有无癌栓、神经有无侵犯均无统计学意义（P>0.05）。结论：TBX3可能涉及促进胃癌的进展、侵袭、转移，可作为提示胃癌患者的有效预后预测因子之一。

【关键词】胃癌；TBX3；免疫组化

【Abstract】Objective To investigate the expression of TBX3 in gastric carcinoma.Methods Immunohistochemical methods was used to detect the expressions of TBX3 in 130 samples of gastric carcinoma.Results We examined the positive expression rate of TBX3 in big gastric cancer was significantly higher than that in small gastric cancer tissues.Statistically，the expression of the TBX3 protein were not associated with clinical and pathological parameters，including sex，age，pathological type，tumor location，lymph node metastasis，intravenous tumor thrombus，have infringement nerve（P>0.05）.Conclusions These results suggest that expression of the TBX3 play a role in the development of gastric carcinoma，which may provide a new target of therapy.

【Key words】TBX3；Immunohistochemistry；Gastric carcinoma

0 前言

原发性胃癌（primary gasytic cancinoma，pGC）是我国比较常见的恶性肿瘤之一，同样也是癌症患者死亡的主要疾病之一，其发病原因尚未完全明了，但肿瘤的转移无疑是胃癌病人术后死亡的主要原因。虽然传统的手术切除一直被临床医生视为是一种有效治疗胃癌的方法，但是患者的生存时间、预后一直是与胃癌肿瘤的大小、神经的侵犯，淋巴结的转移等密切相关连。所以，寻找到胃癌肿瘤转移的生物学行为有关的特异性指标，将非常有助于临床上选择相应的治疗方法进而对其预后作出正确的评价。

目前研究认为，T-box（ TBX） 基因家族里的成员在无脊椎动物和脊椎动物的胚胎发育过程中有重要的调节作用，特别在动物胚胎的形态和组织发生过程中更为显著[1]。TBX3基因作为一个转录因子从而调节其下游效应基因的表达[2] 。TBX3基因之所以与肿瘤的发生发展关系密切，是因为其属于调控发育相关的转录因子[3]，本实验研究TBX3基因在胃癌中的表达水平，探讨其在胃癌发生发展过程中的作用及相关性。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取了滨州医学院附属医院和齐鲁医院桓台分院（2010年12月～2013年6月）行手术切除，病理科有完整临床资料，病理切片证实为胃癌的患者标130例，术前均未进行放疗及化疗或靶向治疗、均行胃癌根治术、病理切片均经资深病理专家按照2010年版WHO胃肠道肿瘤临床病理学分类及分期标准进行，所选病例均经病理学确诊为胃腺癌。

1.2 材料及试验设备

所有的病理标本都经过10%的甲醛固定，脱水处理及常规石蜡包埋，蜡块作5mm切片备用，以作免疫组化学用片。胃癌石蜡切片脱蜡水化，枸橼酸钠抗原修复，加入TBX3一抗4℃孵育过夜，滴加二抗。PBS冲洗后滴加DAB显色，待肿瘤细胞内的目标蛋白着色而背景未着色时终止显色。苏木精复染，经盐酸酒精、氨水、梯度乙醇、二甲苯处理后封片，镜检。以PBS代替一抗作为阴性对照。免抗人TBX3多克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组化两步法染色并严格按照试剂盒的说明书操作，阴性对照组：PBS磷酸缓冲液代替-抗体作阴性对照。

1.3 阳性结果判定

TBX3染色定位于细胞核，采用半定量积分法结合Berry的分级法，按染色程度及阳性细胞数所占的比例来计分确定表达水平分为4级，肿瘤细胞染色与阴性对照组相同者计分为0，染色呈较弱的淡黄色计1分，染色呈黄色或深黄色计2分，染色呈棕黄色计3分。按阳性细胞数的所占比例分为4级，阳性细胞数<10%计为1分，阳性细胞数10-25%计为2分；阳性细胞数25-75%计为3分，阳性细胞数≥75%，计为4分。以上两项分数的乘积0-3为（-），4-5分为（+），6-7分为（++），8分以上为（+++），小于等于3分为阴性结果，大于3分为阳性结果。

1.4 统计学方法处理

应用SPSS18.0统计学软件对数据进行分析，胃癌组织与癌旁组织中TBX3阳性表达率的比较，临床及病理因素中TBX3表达率的差异性均采用x2 检验，各组之间的多重比较采用Nemenyi检验，P<0.05表示差异有统计学的意义。

2 结果

2.1 TBX3与胃癌临床病理特征的关系

胃癌组织中TBX3阳性表达率为36.2%（47/130），130例胃癌患者按照性别、年龄、肿瘤大小、病理分型、肿瘤部位、有无淋巴结转移、有无静脉内癌栓、有无神经侵犯等分成各组，结果显示，肿瘤越大的患者的TBX3表达水平明显高于肿瘤小的患者（P<0.05），但是与胃癌患者的性别、年龄、病理分型、肿瘤部位、有无淋巴结转移、有无静脉内癌栓、有无神经侵犯均无明显的相关性（P>0.05），见表1。

3 讨论

胃癌作为世界第三大常见恶性肿瘤，其死亡率也位于所有肿瘤的前3位。中晚期胃癌患者预后差，中位生存时间短。随着现代医学的发展，探索新的治疗靶点及预后预测指标对于制定肿瘤整体治疗策略十分重要。胃癌的发生与发展是一个复杂性的多阶段的过程，胃癌的治疗策略研究目前多集中于多学科的综合治疗，这就要求对病人进行早期预防、诊断、疗效评价。目前现在较常用的胃癌肿瘤标记物有CEA、CA724、CA19-9等，但是这些指标检测的特异性及灵敏度不够高， 因此，找寻新的血清标记物就显得更加重要。目前很多学者也对胃癌及癌前病变的不同阶段和不同病理类型的分子改变进行了大量的研究。

TBX3基因位于人染色体12号短臂2区4带1亚带，其编码的蛋白包含了723个氨基酸[4]。在肿瘤细胞中，TBX3首先通过多种机制被上调，然后通过参与多种信号通路，最终促进相关肿瘤的侵袭、增殖和转移。TBX3低表达后可减少一种细胞类型增殖凋亡的依赖性增加[5-7]。例如，肝癌细胞中，被激活的果蝇蛋白促使beta-catenin转移至核内，通过T细胞因子直接作用于它们的靶目标TBX3的启动子，最终激活了TBX3的表达，从而促进肝癌细胞的增殖[8]。此外，TBX3过度表达可以导致主要抑制p53途径的p19 ARF 表达的下调，从而抑制细胞的衰老[9-11]。

本研究检测130例胃癌组织中的TBX3的表达情况，结果显示TBX3在胃癌癌旁组织组中低表达，而在胃癌组织中高表达，其在胃癌组织组中的阳性表达率与胃癌癌旁组织中的阳性表达率，有统计学意义；TBX3在胃癌的高年龄组中的阳性表达率高于低年龄组（P<0.05）；肿瘤越大的患者的TBX3表达水平明显高于肿瘤小的患者（P<0.05）；说明随着患胃癌患者的年龄增大及胃癌肿瘤组织的长大，TBX3的蛋白阳性表达率亦随之高升，进而提示，其表达不仅在胃癌的发生发展中起重要作用，与肿瘤生长的生物学特性密切相关。

综上所述，TBX3可能跟胃癌的进展相关联，可以充当患者的预后生物学标志物之一。但由于肿瘤信号途径的错综复杂千丝万缕，TBX3在肿瘤中形成、发展、转移等过程中的信号通路仍不十分清楚，但是随着人们对TBX3基因进一步深入的研究，其有望成为治疗肿瘤的新靶点[12]。

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[责任编辑：田吉捷]