法氏囊活性六肽BHP对新城疫疫苗的免疫增强作用

殷玉瑾　张聪张　巫凡　王臣

摘要：本研究拟以新城疫疫苗联合人工合成的BHP免疫鸡。通过人工合成法氏囊活性六肽，将其作为佐剂添加到新城疫弱毒疫苗中免疫雏鸡。本次实验表明，新城疫疫苗和法氏囊活性六肽（BHP）联合使用免疫后，法氏囊指数与PBS组和疫苗纽相比，差异极显著（P<0.01）；新城疫疫苗和法氏囊活性六肽联合使用免疫后，鸡的抗体效价与PBS对照组和新城疫疫苗组相比，差异显著（P<0.05）。本研究为进一步研制新型免疫佐剂提供依据。

关键词：法氏囊；BHP；脾脏指数；法氏囊指数

佐剂是一种特殊的物质，当在动物体内注入这种特殊的物质就能改变动物机体的免疫反应（细胞免疫和体液免疫反应）的水平和/或类型，能增强抗原的免疫原性但没有抗原性。又称免疫佐剂。当前我们可以利用的疫苗种类繁多，但很多疫苗免疫原型弱，诱导的免疫反应程度低，不能对鸡群产生良好的免疫保护作用，因此需要研发合适的佐剂，来增加疫苗对鸡群的免疫保护作用。BHP是通过反相高压液相色谱柱层析，质谱和氨基酸分析等技术从法氏囊组织液中分离到一种新型的小肽，其氨基酸排列顺序为：丙氨酸-甘氨酸-半胱氨酸-半胱氨酸-天冬酰胺-甘氨酸（Ala-Gly-Cys-Cys-Asn-Gly）。BHP的摩尔质量为523.152Da，等电点为5.74，电荷为-0.15。本实验中，将BHP添加到新城疫疫苗中研究其对新城疫疫苗的免疫增强作用，从而将BHP作为免疫佐剂在临床上的应用提供依据并且为进一步研究奠定基础。

一、材料与方法

1.试验材料

105只雏鸡，购于河南省洛阳市峪口禽业有限公司；新城疫弱毒苗，辽宁益康生物制品有限公司；新城标准强毒F48E9，由本实验室保存；BHP由上海科肽生物科技有限公司合成。

2.动物的分组及免疫

将105只雏鸡平均分成三组，即PBS对照组、新城疫（ND）疫苗对照组、新城疫（ND）疫苗+六肽（BHP）组，每组35只。在0d时首免，首次免疫两周后进行二免，所有的鸡在第21 d进行攻毒实验。

3.雏鸡法氏囊指数的测定

首免后14 d和21 d，分别从三组中随机抽取5只，处死并收集其法氏囊，同时记录每只鸡的体重，及其相应的法氏囊的重量，计算法氏囊指数。

4.HI抗体效价的测定

首免后21d，从三组中，分别随机抽取5只鸡，进行心脏采血。离心5min，离心结束后收集血清：做好标记，在冰箱中保存。然后进行微量血凝试验（HA）和微量血凝抑制试验（HI）。

二、结果与分析

1.法氏囊活性六肽（BHP）对雏鸡法氏囊器官发育的影响

法氏囊活性六肽与鸡新城疫疫苗联合使用，能够促进法氏囊的生长发育，对法氏囊的生长发育影响较大（如图1）。

2.法氏囊活性六肽（BHP）对HI抗体效价的影响

试验中分别测定PBS组、疫苗组、疫苗+肽组三组鸡共15只鸡的血清，各组鸡的抗体滴度（如图2）。结果表明：新城疫苗与法氏囊活性六肽（BHP）联合使用，能够显著提高鸡的体液免疫水平，提高疫苗的Ⅲ抗体效价，增强鸡群抗感染的能力。

三、讨论

许多佐剂都可以添加到疫苗中使用，但是部分佐剂具有副作用，如能引起机体的局部反应或全身不良反应，甚至对机体产生毒害和损伤作用，在兽医临床中广泛使用的是油性佐剂，因为它具有无副作用和其它不良反应，因此，研制新的和最佳的辅助佐剂已成为许多研究者研究的焦点，在许多出版物中已经有很多研究者着重对小分子肽进行研究，在本研究中就对新型免疫增强剂BHP进行了初步的研究。本研究表明，法氏囊活性六肽和新城疫疫苗联合使用不能促进鸡脾脏器官的发育，但能够促进法氏囊的生长发育，对法氏囊的生长发育影响较大。新城疫苗与法氏囊活性六肽（BHP）联合使用，能够显著提高鸡的体液免疫水平，提高疫苗的HI抗体效价，增强鸡群抗感染的能力。