中药蛤蚧治疗非酒精性脂肪肝小鼠的临床观察

潘 磊，崔荣岗，赵保辉，李 华，张忠勇，王旭初



·论 著·

中药蛤蚧治疗非酒精性脂肪肝小鼠的临床观察

目的 研究蛤蚧治疗非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型小鼠的临床效果。方法 选取95只清洁剂雄性昆明小鼠建立NAFLD研究模型，抽签随机分为正常组和模型组，正常组25只给予普通饲料喂养，模型组70只给予高脂饲料喂养，持续喂养6周建立NAFLD模型。模型建立后将模型组中60只抽签随机分为对照组和观察组各30只，两组均给予等渗盐水灌注治疗，观察组加用蛤蚧进行喂养，观察两组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性以及血脂总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)变化。结果 实验小鼠模型成功建立，血脂指标与组织切片与对照组比较，差异具有统计学意义。治疗后观察组ALT(33.54±4.23)IU/L、AST(205.73±20.84)IU/L较对照组(38.75±5.81)IU/L、(221.68±21.25)IU/L明显较低，具有统计学意义(P<0.05)。血脂指标TC(2.82±0.26)mmol/L、TG(1.87±0.36)mmol/L、LDL-C(0.34±0.08)mmol/L较对照组(3.23±0.32)mmol/L、(2.24±0.38)mmol/L、(0.48±0.11)mmol/L明显较低，HDL-C(1.06±0.35)mmol/L较对照组(0.73±0.42)mmol/L明显较高，均具有统计学意义(P<0.05)。结论 蛤蚧能有效降低AST、ALT活性。

非酒精性脂肪肝；NAFLD小鼠模型；蛤蚧

非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)是指除酒精以外其他因素所致的以弥漫性干细胞大泡性脂肪变为主要特征的临床病理综合征，主要包括单纯脂肪变性、非酒精性脂肪肝炎和肝硬化，目前医学上多采用动物模型进行NAFLD的临床病理和药物研究[1-3]。我们建立NAFLD小鼠模型，选取中医药物蛤蚧分组开展药物研究，报告如下。

1 资料与方法

1.1 小鼠模型建立 95只实验小鼠由我院实验室喂养，实验前行常规健康检查均为健康小鼠。其中雌性45只，雄性50只；体重25～31(27.2±1.3)g。随机分为2组，正常组25只，普通饲料配方：面粉25%，玉米面30%，麸皮15%，鱼粉8%，骨粉3%，奶粉2%，豆粕11%，食盐0.5%，鱼肝油0.5%，鸡蛋4%；模型组70只，高脂饲料配方：普通饲料80%，猪油16%，胆固醇2%，猪胆盐2%。均持续灌胃喂养8周后两组各随机抽取取10只禁食12h后处死，取眼眶血1～2 mL和肝脏切片。

1.2 研究方法 模型组60只抽签随机分为对照组和观察组，两组各30只。两组均给予等渗盐水灌注治疗，观察组加用蛤蚧喂养。蛤蚧购自药材市场，通过煮熟切碎加入饲料喂养，10 mg/d，分2次喂养。均持续灌胃喂养2周后处死。

1.3 观察指标 ① 观察两组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)指标活性。② 观察两组总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)变化。检测方法：取眼眶血2 mL离心分离血清后冷存，采用ELISA法和自动生化检测仪严格按说明书操作测定。

2 结 果

2.1 模型建立成功标准 模型组实验室血脂指标检测结果明显高于正常组，且光镜下观察肝脏切片可见肝细胞肿胀，细胞中可见大量脂滴和脂质堆积等明显脂肪肝样病变症状，见表1、图1。

表1 对照组和模型组小鼠实验前后血脂指标比较(±s)

图1 模型组肝细胞肿胀，细胞中可见大量脂滴和脂质堆积等明显脂肪肝样病变

2.2 两组AST、ALT活性比较 观察组治疗后AST、ALT指标较对照组明显较低，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 两组AST、ALT指标检测结果比较(±s)

2.3 两组血脂指标比较 观察组治疗后TC、TG、LDL-C较对照组下降更为明显，HDL-C较对照组显著较高，差异均具有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 两组血脂相关指标结果比较(±s)

3 讨 论

随着生活水平的提高、饮食结构的变化以及体力活动的减少，肥胖、高脂血症、糖尿病等代谢性疾病患者日趋增多[4]，非酒精性脂肪肝发病率也随之增加，且有向年轻群体蔓延的趋势[5-8]。AST、ALT是反映肝细胞病变的重要生化指标，当机体代谢失衡、肝脏细胞沉积时引起的肝脏炎症反应会刺激AST、ALT分泌，同时干细胞摄取过多的游离脂肪酸超过了线粒体的氧化能力，进而促进脂质物合成提高血脂水平[9]。

蛤蚧是中小型的蜥蜴，在动物性中药中较为珍贵，具有补肺益肾、纳气平喘、助阳益精等功效[10]。现代医学发现蛤蚧含有较为丰富的胆碱、肌肽、肉碱等成分，而胆碱、肌肽、肉碱具有较强的抗氧化能力，可清除在氧化应激过程中使细胞膜的脂肪酸过度氧化而形成的活性氧自由基以及α-β不饱和醛，能有效抑制肝脏炎症细胞因子的释放、调节血压血脂进而达到保护肝肾功能、改善脂肪肝炎的作用[11-12]。现代药理学研究证实，蛤蚧含多种游离氨基酸及Fe、Zn、Cu、Se、Co、Mn等微量元素[13]。其中Fe为血红蛋白组成部分，缺乏易引起贫血。Cu对超氧化物歧化酶、细胞色素氧化酶等多种酶的活性有重要影响。Se本身为抗氧化剂，参与谷胱甘肽过氧化物酶的合成，且具有多方面活性，可清除自由基、抗脂质过氧化、保护心肌、肝脏及抗癌，维持细胞膜通透性与稳定性。Co可促进红细胞再生、生血作用。蛤蚧具有抗炎、抗应激、抗氧化衰老、免疫调节等药理作用，应用于非酒精性脂肪肝小鼠模型可形成肝细胞内质网胁迫机制，减轻内质网应激并调节小鼠脂代谢，发挥保肝护肝作用，对NAFLD具有治疗作用[14]。

本次研究结果表明，观察组治疗后AST(33.54±4.23)IU/L、ALT(205.73±20.84)IU/L与对照组相较明显较低，血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C等指标也明显改善，差异均具有统计学意义(P<0.05)，这和李民等[15]的研究结论基本相吻合，可见蛤蚧具有较好的治疗效果。

综上所述，通过NAFLD小鼠模型研究，发现蛤蚧治疗非酒精性脂肪肝效果较为显著，为NAFLD临床治疗的提供参考用药[16]。

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(本文编辑：齐 名； 英文编辑：王建东)

Clinical observation of medicineTokay in nonalcoholic fatty liver therapy

PAN Lei1, CUI Rong-gang1, ZHAO Bao-hui1,LIHua2,ZHANGZhong-yong1,WANGXu-chu1.

1.HebeiProvinceCangzhouHospitalofIntegratedTraditionalandWesternMedicine,Cangzhou,Hebei061001,China;2.People’sHospitalinHebeiProvinceHejianCity,Cangzhou,HeBei061001,China

Objective To research the clinical effect of tokay on treating nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) of model mice. Methods 95 male cleaner kunming mice were selected to establish the study model of NAFLD, and were randomly divided into normal group and model group. 25 mice of normal group were given normal feed and 70 mice of model group were given a high-fat feed, then they were continuously fed for 6 weeks to build NAFLD model. After the model was established, 60 draw in the model group were randomly divided into control group (30 cases) and observation group (30 cases). The two groups were given isotonic saline infusion treatment, and observation group were added with tokay feeding. Serum alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST) activity and lipid acyl of total cholesterol (TC), three glycerin (TG), high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C), low density lipoprotein cholesterol (LDL-C) of the two groups were observed. Results The experimental mice model was successfully established. Compared with control group, lipid indexes and tissue biopsies of observation group had statistically significant difference. ALT and AST of observation group after treatment were significantly lower than the control group and the difference was statistically significant (P<0.05). Blood lipid index of TC, TG and LDL -C were significantly lower than the control group, HDL-C was significantly higher than the control group, and the difference was statistically significant (P<0.05). Conclusion Tokay can effectively reduce the activity of AST and ALT.

nonalcoholic fatty liver disease; NAFLD mouse model; tokay

河北省中医药管理局计划项目(2015290)

1．061001河北沧州，河北省沧州中西医结合医院;2. 061001河北沧州，河北省河间市人民医院

潘 磊，崔荣岗，赵保辉，等.中药蛤蚧治疗非酒精性脂肪肝小鼠的临床观察[J].东南国防医药，2016,18(4):465-467.

R285.6

A

10.3969/j.issn.1672-271X.2016.05.005

2016-01-08；

2016-05-18)