BC-2800Vet兽用全自动血液细胞分析仪应用于部分野生动物红白细胞计数的探讨

黄淑芳，王才益，卞庆松，应志豪，于学伟，龚利洋，陈玎玎

(杭州市虎跑路 杭州动物园，浙江杭州 310008)



BC-2800Vet兽用全自动血液细胞分析仪应用于部分野生动物红白细胞计数的探讨

黄淑芳，王才益，卞庆松，应志豪，于学伟，龚利洋，陈玎玎

(杭州市虎跑路 杭州动物园，浙江杭州 310008)

野生动物血细胞形态各异，大小差异较大，其血细胞计数最准确的方法除传统的手工计数外，市场上出现的兽用血细胞分析仪对其适应性均在探索中。笔者通过杭州动物园圈养的25种野生动物73份血液样本采用BC-2800Vet兽用全自动血液细胞分析仪进行血细胞分析，探索其合适的检测通道。通过红细胞大小、手工计数等参数的比较，初探出黇鹿、羊驼、马鹿、梅花鹿、毛冠鹿、黑麂采用绵羊通道检测结果较可靠，鬣羚、旋角羚羊采用山羊通道检测结果较可靠，大象、黑猩猩、黑白疣猴、金丝猴、狼、赤大袋鼠采用猴通道检测结果较理想，非洲狮、黑豹、金猫、小熊猫、南美海狮则采用猫通道检测结果较好，东南亚虎、白虎、北方貉则采用狗通道检测结果较可靠，白狐则采用猪通道检测结果较理想。

血细胞计数；动物检测通道；野生动物

1947年美国科学家库尔特(W.H.Coulter)发明了用电阻法计数粒子的专利技术，1956年又将该技术应用于血细胞计数获得成功，其原理是根据血细胞非传导性质，以电解质溶液中悬浮血细胞在通过计数小孔时引起的电阻变化进行检测为基础，进行血细胞计数和体积测定，这种方法称为电阻法或库尔特原理[1]。

1962年，我国第一台血细胞计数仪在上海研制成功。在20世纪60年代未血细胞分析仪除可进行血细胞计数外，还可同时测定HGB血红蛋白；70年代，进行血小板计数；80年代，研究出白细胞分类(3分类及5分类)；90年代，则开发出了对网状红细胞进行计数的血细胞分析仪，同时5分类及幼稚细胞检测也更成熟，并发展成为血细胞分析流水线，即计数、涂片染色和读片一体化。

野生动物疾病诊断的重要方式之一就是血液细胞计数技术。动物发病时各种病理变化都会导致内环境发生改变，体液，特别是血液，是内环境的重要组成部分。临床上通过测定血常规生理指标可为疾病的诊断、治疗和判断预后提供参考。其中红细胞数量、红细胞大小、血红蛋白含量测定,对各种贫血的鉴别诊断有着重要意义,是分析贫血性质不可缺少的指标之一。白细胞计数在指导动物疾病诊断和治疗中起着非常重要的作用。

野生动物血细胞形态各异，大小差异较大，目前除了使用传统的手工方式计数外，市面上也开发了很多兽用血细胞分析仪。笔者通过杭州动物园收集的25种野生动物73份血液样本采用BC-2800Vet兽用全自动血液细胞分析仪进行血细胞分析，探索其合适的检测通道，现简介如下，供参考。

1 材料与方法

1.1 仪器及试剂 BC-2800Vet兽用全自动血液细胞分析仪，应用阻抗法进行红白细胞计数，血红蛋白浓度应用比色法测量，体积计量由体积计量单元中的体积计量管和两个光电传感器测定。EDTA-K2抗凝管，载玻片，瑞氏-姬姆萨染色液(BaSO)，冰醋酸，10 g/L亚甲蓝，微量管，血细胞计数板等。

1.2 血液样本 采自杭州动物园圈养的25种野生动物血液样本共73份，其中黇鹿、羊驼各11份，小熊猫10份，马鹿6份，梅花鹿4份，黑猩猩、非洲狮各3份，黑白犹猴、金丝猴、黑豹、狼、棕熊、黑熊、南美海狮各2份，毛冠鹿、黑麂、鬣羚、旋角羚羊、大象、金猫、东南亚虎、白虎、赤大袋鼠、北方貉、白狐各1份。

1.3 白细胞目视计数 采用稀醋酸将采集的野生动物血液样品稀释并破坏红细胞，混匀后，滴入计数盘中，显微镜下计数四个大方格内白细胞总数N，N/20，单位×109/L[1]。涂片厚度为8 μL血液涂成6 cm×2.5 cm，染色后用低倍镜观察血涂片的细胞分布情况，选择体尾交界染色良好处，计数100～200个白细胞进行白细胞分类。手工计数方法每个血液样本采血后均在2 h内完成检测，检测环境温度为25℃左右。

1.4 选择检测通道方法 根据动物细胞大小选择相应的动物检测通道进行检测。然后与手工计数的结果进行比对，探索其合适的检测通道。

2 结果与分析

2.1 不同动物细胞大小与检测通道 通过探索发现红细胞平均直径在4.0(3～5)μm左右的采用山羊、绵羊通道，红细胞平均直径在5.0(4～7)μm左右的采用猫通道，红细胞平均直径在6.0(5～7)μm左右的采用狗通道，红细胞平均直径7.5(6～9)μm左右的采用猴通道，结果与手工检测比较接近。测定的细胞大小与其他动物园报道所测动物血细胞大小结果相近[2]。

2.2 试验结果比较选择检测通道方法 详见表1。

表1 不同野生动物红、白细胞计数检测结果

由表1结果比较，可初步看出食草动物中黇鹿、羊驼、马鹿、梅花鹿、毛冠鹿、黑麂采用绵羊通道检测数值较准确；鬣羚和旋角羚羊采用山羊通道检测较好；大象细胞较大最好采用手工，采用猴通道检测则可作为参考；黑猩猩、黑白疣猴、金丝猴、狼、赤大袋鼠则采用猴通道检测数值比较可靠；非洲狮、黑豹、金猫、小熊猫、南美海狮则采用猫通道检测数值较稳定；东南亚虎、白虎则采用狗或猫通道检测较好；棕熊、黑熊、北方貉采用狗通道检测，白狐采用猪通道检测较好。

3 小结与讨论

3.1 BC-2800Vet兽用全自动血液细胞分析仪共有14个检测通道，通过对73份野生动物血液样本分析可以得出其对部分动物可以进行准确的红、白细胞计数及血红蛋白测定。每个通道检测的MCV都有一个范围，在选择不同检测通道时，一般可结合红细胞大小和动物属性确定，但由于形态上的差异，旋角羚羊采用绵羊通道，东南亚虎、白虎采用猫通道，其检测结果均不理想。

3.2 细胞形态判断，血细胞分析仪可能出现假阳性或假阴性，在开发非常完善的人类血细胞分析中都非常重视复检的重要性[3-6]，涂片显微镜复检不仅能弥补仪器对形态鉴别的不足，还能直观评估和验证血细胞分析仪检测结果的可行性。由于动物血细胞形态各不相同，每个血液样本都应进行血涂片，在显微镜下观察，并进行白细胞分类，观察40*高倍镜下白细胞数量及红细胞形态。BC-2800Vet兽用全自动血液细胞分析仪，理论上可实现狗、猫、马、猴、奶牛等白细胞3分类，山羊、绵羊、猪、骆驼和水牛通道的白细胞分类则较为困难，应采用手工分类。

3.3 BC-2800Vet兽用全自动血液细胞分析仪的精密度较好，即重复性较好，但为使结果准确度较高应每半年进行一次室内质控。一般结果除山羊和骆驼通道外,其他结果均可作为参考。

3.4 采用BC-2800Vet兽用全自动血液细胞分析仪检测时能用全血检测的情况下尽量采用全血模式进行检测，因为手工采血过程会有个人误差存在。采用预稀释法时，稀释液与血液融合的时间一定要达5 min，跟人类血细胞融合时间相同[7]，这样结果比较可靠。注重仪器的保养，操作中应按正确步骤进行，可延长仪器的寿命和维护周期[8-9]。定期对采样针应用专用浸泡液进行浸泡，出现堵孔时一定要多次清洗通道，本底做出结果在标准范围内后才可进行下一个样本的检测。

3.5 本次试验25种动物中，部分动物血液样本只有1～2份，因同种动物血细胞有时会存在差异性，如黑白疣猴这次检测用猴通道和狗通道检测结果均差异不大，马鹿采用马和绵羊通道检测红细胞数量相近，但检测的白细胞数量差异较大，这些动物的检测通道尚需进一步探讨分析，以探索其最适检测通道。

[1]魏明竟.临床检验学[M].科学技术文献出版社，1994：67-68.

[2]刘志洁.宗英.野生动物血液细胞学图谱[M].科学出版社，2002:65-179.

[3]刘喜龙,谢琳瑛.全自动血细胞分析血涂片复检规则应用分析[J].中国医学创新，2014，11(35):107-108.

[4]林芳辉，刘玲丽，梁锋.三分群血细胞分析仪式检测后按复审标准进行血涂片复审的临床意义[J].海南医学，2011.22(23).

[5]陈辉.自动血细胞分析后血涂片复检规则评估[J].中华全科医学，2010，15(8):1044-1045.

[6]Rebertson EP，Lai HW，Wei DC.An evaluation of leucocyte analysis on the coulter stks[J].Clinical and Laboratory Haematology，2012，14(1):53-68.

[7]苏春梅.末梢血样品放置的时间对血细胞分析结果的影响[J].贵州医药，2004，28(3):261-262.

[8]汪旭强,BC-3000血细胞计数仪堵孔判断和排除[J].现代检验医学杂志，2006(3):30.

[9]王庆华,胥清芳,李前勇,等.动物血细胞分析仪PE-6300使用方法的改进[J].中国家禽，2008(23):64.

2016-08-16

S864.1

A

1005-7307(2016)06-0005-003