缺氧缺血性脑病新生儿血清8-羟基脱氧鸟苷水平变化及其临床意义

李晓梅，刘建红，朱法荣，刘向红，康丽丽，李晓莺

(济南市儿童医院，济南 252000)



缺氧缺血性脑病新生儿血清8-羟基脱氧鸟苷水平变化及其临床意义

李晓梅，刘建红，朱法荣，刘向红，康丽丽，李晓莺

(济南市儿童医院，济南 252000)

目的 探讨8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)在新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)发生、发展中的作用。方法 选择60例HIE患儿作为观察组，其中HIE为轻度、中度、重度各20例；同期非HIE，有发热表现但排除颅内感染的足月新生儿20例作为对照组。采用高效液相色谱法检测两组出生后1、3、7天血清8-OHDG。结果 出生后1、3、7天血清8-OHDG(pg/mL)水平：观察组分别为43.8±2.1、69.9±3.2、34.9±2.8，其中轻度者分别为29.6±4.5、46.2±3.1、20.6±4.5，中度者分别为42.3±3.1、62.6±7.0、37.5±3.1，重度者分别为54.2±2.9、90.2±6.2、47.1±4.1；对照组分别为25.7±3.1、36.6±4.6、33.1±1.8；观察组出生后第3天血清8-OHDG水平明显高于出生后1、7天，相同时间点观察组血清8-OHDG水平明显高于对照组，P均<0.05；观察组轻度、中度、重度者相同时间点两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 8-OHDG可能参与了HIE的病理生理过程，血清8-OHDG水平可作为判断HIE病情的指标。

缺氧缺血性脑病；新生儿；8-羟基脱氧鸟苷

围生期各种病理因素导致胎儿机体的供氧供血减少，可引起机体组织器官缺氧缺血性损害，其中新生儿窒息是影响神经系统发育的重要因素，脑细胞对此最为敏感，脑细胞凋亡在神经元变性的病理过程中起至关重要的作用[1]，由此即可导致新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)，HIE轻度者几乎不留神经系统后遗症，中重度者病死率高，存活者多遗留智力低下、语言、运动、认知功能障碍等后遗症。8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)可评估体内氧化损伤和修复及氧化应激与DNA损伤程度，是目前国际上公认的评价DNA氧化损伤和氧化应激状态的敏感指标和生物标志物[2～5]。本课题探讨HIE患儿血清8-OHDG的水平变化及临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 观察组为2010年2月～2013年2月在我院住院的足月HIE患儿(排除早产因素对脑发育的影响)60例，其中男31例、女29例，剖宫产28例、顺产32例，胎(周)龄(38.3±1.2)周，体质量(3.78±0.42)kg，母亲年龄(29.5±1.1)岁。根据2005年第4届全国新生儿学术会议修订的新生儿HIE的诊断依据和临床分度标准[6]，HIE为轻度、中度、重度者各20例。对照组为同期住院治疗的非HIE，有发热表现但经完善脑脊液检查最终排除颅内感染的足月新生儿20例，其中新生儿肺炎8例、新生儿败血症6例、新生儿脓疱疮6例，男11例、女9例；剖宫产12例、顺产8例，胎(周)龄(39.2±0.9)周，体质量(3.70±0.54)kg，母亲年龄(27.2±1.6)岁。两组性别、产式、胎龄、体质量、母亲年龄具有可比性。

1.2 血清8-OHDG检测 两组分别于出生1、3、7天采集静脉血1.5 mL，3 000 r/min离心10 min分离血清。采用高效液相色谱法[7]检测8-OHDG。操作过程中避免任何细胞刺激， 质谱条件：选用的电离源为ESI(+)，采用多反应模式进行检测(MRM)；色谱条件：流动相：A=甲醇，B=10 mmol/L醋酸铵含0.1%甲酸的水溶液；A∶B=80∶20 (v/v)，流速：0.6 mL/min；进样量：20 μL。

2 结果

两组不同时间点血清8-OHDG水平比较见表1，观察组不同病情者血清8-OHDG水平比较见表2。由表1可见，相同时间点观察组血清8-OHDG水平明显高于对照组，P均<0.05； 观察组出生3天血清8-OHDG水平明显高于出生后1、7天。由表2可见，观察组轻度、中度、重度者相同时间点血清8-OHDG水平均明显高于对照组(P均<0.05)。

表1 两组不同时间点血清8-OHDG水平比较

注：与同组出生1天及出生7天比较，*P<0.05；与对照组同时间点比较，△P<0.01。

表2 观察组不同病情者血清8-OHDG水平比较±s)

3 讨论

各种围产期异常的母体、胎盘、脐带、羊水及胎儿因素等均可引起新生儿窒息，导致机体多脏器缺氧缺血性损害，脑细胞对缺氧最为敏感。新生儿脑组织的生理结构、功能、细胞间连接、信号传导通路等方面均与成人脑组织不同，极易受各种不良因素影响，缺氧后的反应也不一样。缺氧缺血性损伤后机体可产生大量活性氧自由基(ROS)如羟自由基、单线态氧等攻击DNA分子中的鸟嘌呤碱基第8位碳原子而产生的一种氧化性加合物，其可攻击DNA中的鸟嘌呤使脱氧鸟苷氧化成8-OHDG[8]。自由基一直被认为是引起DNA损伤的主要因素之一，可对生物体产生多种损害作用，其作用机制主要涉及DNA的损伤。羟自由基和超氧阴离子能直接与DNA分子反应，导致DNA链断裂、碱基修饰和DNA蛋白交联等氧化性DNA损伤，慢性的神经元凋亡在神经细胞的变性中起重要作用，并由此导致脑细胞凋亡或坏死。Kato等[9]在心血管领域研究证实8-OHDG是缺氧后DNA分子发生损伤的生物标志。Kang等[10]通过研究孕母及其新生儿也发现8-OHDG是氧化应激损伤的标志物。有研究表明，海马区蛋白质对氧化应激损伤非常敏感，机体的氧化损伤广泛存在，主要表现为生物大分子(如DNA、蛋白质、脂类等)结构和功能的损伤，氧化性DNA损伤在生物体细胞老化、死亡的发生过程中起重要作用[11,12]。

本研究结果表明，观察组在病程同一阶段存在缺氧缺血性损害后体内细胞出现DNA损伤，血清中8-OHDG生成明显增多；对照组血清中8-OHDG虽有一定表达，但在急性期(住院治疗3日内)及恢复期(病情好转)差异无显著性。本研究观察组出生1、3、7天8-OHDG水平均明显高于对照组，证实8-OHDG水平随缺氧缺血性DNA损伤加重而升高，8-OHDG可能参与了HIE的病理生理过程。本研究观察组病情轻、中、重者血清8-OHDG水平逐渐升高，提示其脑细胞缺氧重者细胞DNA损伤相应加重，8-OHDG与病情轻重程度密切相关，动态监测血清8-OHDG水平可指导临床治疗及评估预后[13,14]。有动物实验表明，脑缺氧缺血损伤发生脑梗死再灌注后的12 h 8-OHDG明显升高，DNA断链可被检测出，24 h达高峰，虽然时间峰值与临床结果稍有出入，但提示8-OHDG可作为DNA的损伤标志物在一定程度上反映急性脑损伤程度[15]。本研究发现，8-OHDG在HIE的不同阶段变化趋势不同。出生后第1天时随着分娩过程及机体环境的改变，脑细胞缺氧得到一定程度改善，但细胞DNA损伤并未停止，血清中8-OHDG水平开始升高；出生后第3天为新生儿HIE的急性期，8-OHDG水平较出生第1天及恢复期第7天明显升高，与疾病的自然病程一致。提示临床HIE急性期血清8-OHDG升高的患儿脑细胞损伤较重，尽快改善脑细胞代谢、防止脑水肿加重可缩小脑损伤面积。

综上所述，血清8-OHDG水平可作为判断窒息新生儿是否会发生HIE的指标，为可用于判断神经节苷酯的治疗效果及对DNA损伤的修复作用。

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山东省医药卫生科技发展计划(HD004)。

李晓莺(E-mail: lxy_jn@sina.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.36.017

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1002-266X(2016)36-0054-03

2015-12-28)