中山地区非缺失型α—地中海贫血基因在高危人群中的筛查结果分析

陈泳珊+周小玲+何洁芙

【摘要】 目的 了解广东省中山地区育龄女性中常见非缺失型α-地中海贫血（α-地贫）的基因突变类型及构成比。方法 应用反向斑点杂交（RDB）技术和高效液相色谱法（HPLC）对40000例受检对象进行非缺失型α-地贫基因分析。结果 中山地区育龄妇女非缺失型α-地贫基因总携带率为0.41%（165/40000）， 其中异常血红蛋白QS（HbQS）111例， 发生率为0.28%， 构成比为67.27%；异常血红蛋白WS（HbWS）30例， 发生率为0.08%， 构成比为18.18%；异常血红蛋白CS（HbCS）24例， 发生率为0.06%， 构成比为14.55%。结论 该研究首次阐述了广东省中山地区育龄妇女中常见非缺失型α-地贫的分子流行病学情况， 为本地区开展地贫筛查工作， 降低非缺失型血红蛋白H（HbH）病患儿出生率， 制定干预方案提供了重要的科学依据。

【关键词】 非缺失型α-地中海贫血；基因；筛查

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.27.081

α-地贫是一组遗传性血红蛋白合成障碍性疾病， 其发病机制是由于α珠蛋白基因发生缺失或点突变， 使其编码的α珠蛋白链缺如或不足， 从而引起严重的溶血性贫血[1]。可分为缺失型（主要的变异类型）和非缺失型两种， α珠蛋白基因大片段的缺失可导致缺失型α-地贫的发生， 而非缺失型α-地贫则是由于α珠蛋白基因或其调节序列发生点突变（包括核苷酸的缺失或插入以及单碱基置换）所致。α-地贫具有高度的遗传异质性， 其分子缺陷具有一定程度的种族特异性。关于缺失型α-地贫的研究既往的分子流行病学调查资料较多， 而对非缺失型α-地贫则报道甚少。因血红蛋白（Hb） Barts水肿胎的致死性， HbH病是临床上出生后最严重的α-地贫类型， 也分为缺失型和非缺失型两种， 后者临床表现更为严重[2]。据报道， 在我国广西省有45.8%～53.3%的HbH病患者携带有非缺失型α-地贫基因[3]。因此在高危人群中筛查非缺失型α-地贫基因携带者尤为必要。本研究旨在初步了解中山地区非缺失型α-地贫的基因突变类型和构成比， 以进一步提高α-地贫的总检出率， 为本地区开展地贫筛查工作， 降低非缺失型HbH病患儿出生率， 制定干预方案提供重要的科学依据。报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 受检对象为2013年7月～2015年7月产前诊断门诊接受咨询的40000例已婚待孕或已孕妇女， 年龄20～40岁。所有受试者均知情同意。

1. 2 方法 血常规初筛：使用EDTA抗凝管采集外周静脉血2～4 ml， 采用五分类全自动血常规分析仪进行血细胞分析， 应用血常规进行地贫初筛， 以平均红细胞体积（MCV）≤82 fl 和（或）平均红细胞血红蛋白量（MCH）≤27 pg 为筛查阳性， 筛查阳性者则进一步行HPLC检测。HPLC：筛查采用HPLC法测定HbA2和HbF的洗脱峰含量。基因型鉴定：对可疑非缺失型α-地贫基因携带者进行常见非缺失型α-地贫基因检测， 主要包括血常规初筛阳性而常见缺失型α-地贫基因未检出异常者；α-地贫缺失型检测为--SEA/αα， 但HPLC提示为HbH病者；血红蛋白电泳异常；配偶为--SEA/αα携带者。采用反向斑点杂交法对3种非缺失型α-地贫基因（HbCS、HbQS、HbWS）进行检测， 按DNA提取试剂盒（ 北京天根生化科技有限公司）说明提取基因组DNA， 采用基因诊断试剂盒（深圳益生堂生物技术有限公司）进行基因检测。诊断采用《血液病诊断与疗效标准》中的地贫诊断标准[4]。

2 结果

40000例参加孕前孕期筛查的育龄妇女中有480例进行3种非缺失型α-地贫基因筛查， 共有165例检出常见非缺失α-地中海贫血基因携带， 总携带率为0.41%（165/40000）， 其中HbQS 111例（αQS α/αα 105例、-- SEA /αQSα 5例、-α3.7/αQSα 1例）， 发生率为0.28%， 构成比为67.27%；HbWS 30例（αWS α/αα 30例）， 发生率为0.08%， 构成比为18.18%；HbCS 24例 （αCS α/αα 22例、--SEA /αCSα2例）， 发生率为0.06%， 构成比为14.55%。

3 讨论

地中海贫血是我国长江以南各省发病率最高的遗传疾病之一， 尤以广东、广西、贵州、四川等省发病为高[5]。可分为α-地贫、β-地贫、αβ-地贫以及δ-地贫等类型。α-地贫是最主要的地贫类型之一。一份基于全国90万人的流行病学调查结果得出的总发病率为2.46%， 其中以广西省最高， 发病率为14 .95%， 其次为广东和江西省， 发病率分别为4.11%和2.6%[6]。α-地贫分为缺失型和非缺失型两种。非缺失型α-地贫虽然不是主要的突变类型， 但其所占的比例不容忽视， 且在HbH病中有较高的基因携带率[3]。因此对高危人群进行非缺失型α-地贫筛查有着重要的意义。

然而， 3种非缺失型α-地贫基因HbQS 、HbCS以及HbWS 因其不稳定性在常规的血红蛋白电泳分析中较难准确检出， 大多只能通过基因分析确诊， 以致无法进行大样本人群的筛查， 本次研究对中山地区的高危人群开展此项检查， 结果显示， 常见的非缺失型α-地贫基因的总携带率为0.41%， 这与潘干华等[7]报道广东省南海地区的总携带率结果类似（0.47%）， 但不同的是， 该报道中仅以MCV<80 fl做为地贫筛查阳性表型指征， 对所有筛查阳性样品同时进行18种中国人常见及少见β地贫基因型分析、常见缺失型α-地贫基因分析以及常见3种非缺失型α-地贫基因分析。而在本文研究中除了血常规初筛阳性者之外， 其他如α-地贫缺失型检测为--SEA /αα， 但HPLC提示为HbH病者；血红蛋白电泳异常者；配偶为--SEA/αα携带者也纳入筛查范围。此外， 在常见3种非缺失型α-地贫HbWS、HbQs、HbCS的携带率及构成比上， 本研究与潘干华等[7]报道也不一致， 在本研究结果中， 三者的携带率（构成比）依次为0.08%（18.18%）、0.28%（67.27%）、0.06%（14.55%）， 而潘干华等[7]报道中三者的携带率（构成比）则依次为0.19%（40.45%）、0.17%（35.39%）、0.11%（24.16%）。黄忠等[8]报道了广西横县地区的非缺失型α-地贫基因的总携带率为2.14%， 周艳洁等[9]报道了南宁地区的非缺失型α-地贫基因的总携带率为2.44%， 均显著高于本研究报道， 在构成比上也有较大差异。这可能与不同的地理和人群， α-地贫基因突变存在差异有关[10]。

综上所述， 本研究首次阐述了广东省中山地区育龄妇女中常见非缺失型α-地贫的分子流行病学情况， 为本地区开展地贫筛查工作， 降低非缺失型HbH病患儿出生率， 制定干预方案提供了重要的科学依据， 同时也为双方均为α-地贫携带者的夫妇提供了更加准确的遗传咨询和优生指导。然而本研究的研究结果仍有待进一步研究证实。

参考文献

[1] Douglas R Higgs， James Douglas Engel， George Stamatoyannopoulos. Thalassaemia. Lancet， 2012， 379（9813）：373-383.

[2] Liao C， Zhou JY， Xie XM， et al. Screening for Hb constant spring in the guangdong province， south china， using the sebia capillary electrophoresis system. Hemoglobin， 2011， 35（1）：87.

[3] Yin XL， Zhang Xh， Zhou TH， et al. Hemoglobin H disease in Guangxi province， Southern China： clinical review of 357 patients. Acta Haematol， 2010， 124（2）：86-91.

[4] 张之南， 沈悌. 血液病诊断及疗效标准. 第3版.北京：科学出版社， 2007：29 .

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[7] 潘干华， 申芫子， 黄勇， 等. 广东南海地区非缺失型α地中海贫血分子流行病学调查.国际检验医学杂志， 2014， 35（1）：56-57.

[8] 黄忠， 张新华， 阮丽明， 等. 6000对新婚夫妇非缺失型α-地中海贫血检测结果分析.检验医学与临床， 2011， 12（8）：1409-1410.

[9] 周艳洁， 阮丽明， 何桂琼， 等.全自动琼脂糖凝胶电泳检测地中海贫血7500例结果分析.中国计划生育学杂志， 2007， 6（3）： 355-357.

[10] 段山， 李洪义， 陈争， 等.中国南方α-地中海贫血基因突变型研究.中国实验血液学杂志， 2003， 11（1）：54-60.

[收稿日期：2016-08-03]