蓝耳病阴性猪PRRSV攻毒试验结果及在血清驯化中的应用

曹玉美，伍少钦，孙 龙，颜辉孟，吴志金，于俊勇，陆 江，梁恒英

( 广西农垦永新畜牧集团有限公司良圻原种猪场，广西 南宁 530317）

蓝耳病阴性猪PRRSV攻毒试验结果及在血清驯化中的应用

曹玉美，伍少钦，孙 龙，颜辉孟，吴志金，于俊勇，陆 江，梁恒英

( 广西农垦永新畜牧集团有限公司良圻原种猪场，广西 南宁 530317）

良圻原种猪场2009年在后备猪采用血清驯化,以保持猪群蓝耳病的稳定。为进一步了解公司内部所用猪蓝耳病病毒的特性，用同一猪蓝耳病病毒的不同拷贝数（0、20、40、400、4 000和20 000）分别对6头蓝耳病抗原抗体双阴性仔猪进行攻毒试验。病原检测：攻毒24 h后，除阴性猪外，5头猪均抗原检测到PRRSV病毒核酸，抗体检测：攻毒后的前6 d抗体均为阴性，7 d后攻毒猪只抗体逐渐转阳；第9天抗体全部转阳且较第7天有大幅升高；第11天后，整体抗体稍有上升但较缓慢，攻毒21 d后，各猪只抗体值在1.7～2.3之间。表明20个病毒拷贝数就足以感染猪只。

猪蓝耳病；血清驯化；抗体消长；病毒拷贝数

对于猪蓝耳病(PRRS)的控制与净化，20多年来国内外有已经有多种方法和措施成功地应用于猪场，并取得一定的效果，但由于PRRSV本身的特点，目前并没有一个普适的方法，各猪场只能根据自身特点，有选择性地采用适合本场的控制方法。目前常见方法有采用空气过滤等生物安全措施保持猪场PRRS阴性，疫苗免疫控制猪场PRRS稳定或净化PRRS，也有常用血清驯化法控制与净化PRRS。良圻原种猪场从2007年开始尝试血清驯化，2008年开始在后备猪采用血清驯化控制猪蓝耳病。由于驯化用的PRRSV不是固定不变的，有时会根据病毒测序结果，进行相应的更换。为了解驯化用PRRSV毒株的特点，特开展相应的试验：用不同剂量的猪蓝耳病毒对抗原抗体双阴性猪只（35日龄）进行攻毒，跟踪抗原及抗体消长情况，以便为后续的猪场PRRS的血清驯化提供试验依据。

1 试验材料

制备的PRRSV阳性血清，2015年制备，公司内部保存；PRRS抗原抗体双阴性猪，35日龄、来源良圻原种猪场PRRS双阴性核心场；IEDXX PRRS抗体检测试剂盒；ABI 7 500 FAST 荧光PCR仪，TAKARA PCR仪，Taqman 荧光定量PCR成套试剂。

2 试验方法

2.1 病毒稀释方法

对病毒阳性血清用PBS进行倍比稀释，使得每毫升血清稀释液所含原血清量为1 μL、0.2 μL、0.02 μL、0.002 μL、0.001 μL，经荧光定量PCR分析，所含病毒拷贝数分别为20 000、4 000、400、40、20；每头猪只相应攻毒剂量为1 mL血清稀释液。

2.2 攻毒方法

每头猪只分别按相应量进行攻毒，如表1。

表1  PRRSV攻毒试验的剂量和时间

2.3 采血检测

在攻毒后的第1、2、3、4、5、6、7、9、11、13、15、21天进行采血和检测。

3 试验结果

3.1 攻毒前猪只PRRS监测情况

PRRS双阴性猪只的检测情况如表2，说明试验动物是符合要求的。

表2 攻毒前试验试验动物PRRS抗原和抗体检测结果

3.2 攻毒后PRRS抗原监测情况

PRRS双阴性猪只攻毒后的抗原检测情况如表3。

由表3分析，在攻毒24 h，除空白对照外，只有一头攻毒猪为阴性，其余均为阳性，攻毒剂量为0.001 μL的猪只呈阳性，说明20个病毒拷贝数即可感染双阴性猪只；攻毒38 h，各攻毒猪只均转阳，一直持续到攻毒后的第21天，各组试验猪都保持PRRS病原阳性。

3.3 攻毒后PRRS抗体监测情况

攻毒后，不同时间的抗体监测结果如表4和图1。

由表4分析，PRRSV攻毒（驯化）后的前6 d抗体均为阴性，第7天后猪只抗体逐渐转阳；在第9天抗体全部转阳且较第7天有大幅升高；第11天后，整体抗体稍有上升但趋于平稳，攻毒21 d后，各猪只抗体值均未达到2.5（见图1）。

表3  攻毒后不同时间PRRS抗原检测结果

表4  攻毒后不同时间PRRS抗体检测结果

图1 各剂量试验猪PRRS抗体S/P值

4 讨论

4.1 PRRS抗原方面

通过本次试验，我们可以得知，对于蓝耳双阴性猪，极少的病毒粒子（20个病毒拷贝）就可以让其转阳，在进行血清驯化时，可以考虑通过减少驯化血清剂量来减轻驯化猪只的临床症状。并由此可联想到猪场生物安全方面严格控制的必要性，车流、人流、物流、猪流等依然是防控PRRS需要关注的重点。

4.2 PRRS抗体方面

通过抗体的消长规律可以得出，抗体转阳往往比抗原转阳延后6～7 d左右。但抗体从阴性转为阳性所需要时间很短，基本上是从阴性值急转为抗体阳性，这可能是IgG的暴发效应，分化的B细胞突然产生大量的IgG，导致S/P值一跃至1.0以上。由于抗体转阳具有的滞后性，因此在对怀疑猪只的PRRS监测时，抗原的检测往往结果比抗体更可靠，更具时效性。PRRS抗体监测一般只能作为是否曾经感染过PRRSV的依据。

试验保育猪在后续的持续性检测过程中，抗体并没有继续升高至2.5，且只有一头超过2.0，这可能与保育试验猪自身的免疫系统仍未发育完全有关，以住的血清驯化试验中育肥猪或母猪通过血清驯化，抗体很快升至3.0以上。

4.3   PRRS血清驯化病毒量的选择

保育猪的PRRS抗体转阳过程，猪只一般会逐渐表现临床表现（精神差食欲减退，呼吸道问题）。在生产过程中，特别需引起重视，当猪只表现出症状时，猪只很有可能已经感染疾病。由于病毒在猪群中的连续传播，会使病毒的毒力逐渐增强，因此在后续的驯化思路中如何降低本场驯化用PRRSV毒株的毒力，同时提高病毒的感染能力，达到用低剂量的病毒即可使猪只转阳，且不表现严重的临床症状，，是以后生产中要考虑的重点问题之一。

5 结论

PRRS低病毒拷贝数（20个拷贝）就可使阴性猪只感染PRRS；24 h后即可以检测到病毒，抗原转阳后6～7 d，可以检测到PRRS抗体呈阳性。

（略）

2018-08-15）

本文受Cars-36现代农业产业技术体系建设专项资金资助