p57/Kip2在食管鳞癌脑转移瘤中的表达及意义

茹 艺 陈晓杰 张鹏飞 高社干 高 强 王玉峰 刘丽娜 冯笑山*

1)河南科技大学第一附属医院 洛阳 471000 2)南阳市第二人民医院肿瘤科 南阳 473000



p57/Kip2在食管鳞癌脑转移瘤中的表达及意义

茹 艺1)陈晓杰1)张鹏飞1)高社干1)高 强1)王玉峰1)刘丽娜2)冯笑山1)*

1)河南科技大学第一附属医院 洛阳 471000 2)南阳市第二人民医院肿瘤科 南阳 473000

目的 探讨p57/Kip2在食管鳞癌脑转移瘤组织中的表达，探讨其在食管鳞癌脑转移中的作用。方法 选择食管鳞癌脑转移瘤组织，采用免疫组化检测p57/Kip2的表达水平。结果 免疫组化方法结果显示，食管鳞癌脑转移癌旁组织中 p57/Kip2的表达水平显著高于癌组织，且与肿瘤病理分化程度相关(P<0.05)，p57/Kip2在中-高分化病例中的阳性表达率为57.1%，在中-低分化病例中阳性表达率为18.2%，差异有统计学意义(P=0.000)。结论 p57/Kip2食管鳞癌脑转移癌组织中表达显著下调，且与病理分化程度相关，即表达下调明显病理分化程度越差。

食管鳞癌；p57/Kip2；病理分化；脑转移

p57/Kip2基因具有抑制细胞增殖和分化作用，诱导细胞凋亡，并与基因组印记有关[3]。本研究通过检测p57/Kip2在贲门癌及其配对的癌旁组织中的表达以及与临床病理资料之间的关系，探讨p57/Kip2在贲门癌发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1．1 研究对象 选择2006-01—2016-02河南科技大学第一附属医院及南阳市第二人民医院神经外科经手术切除的15例食管鳞癌脑转移瘤手术标本，诊断均有病理检查支持。男10例，女5例；年龄60～72岁。所有患者术前均未经放疗治疗。病理诊断及分级参照WHO消化道系统肿瘤分类标准(2007年版)：15例病例中低-分化7例，中分化5例，中-高分化3例。另选取15例同期住院的经手术切除的正常脑组织的患者(正常脑组织组)，男10例，女5例，年龄23～47岁。标本切除离体后，病理科常规石蜡包埋切片。

1．2 方法

1．2.1 HE染色：二甲苯侵泡15 min(2次)，无水乙醇侵泡5 min(2次)，95%乙醇侵泡 5 min(2次)，80%乙醇侵泡 5 min，水洗，苏木精染色 5 min，流水冲洗，1%盐酸分化1 s，0.5%伊红液染色 5 min，水洗，80%乙醇侵泡5 min，95%乙醇侵泡5 min(2次)，无水乙醇侵泡 5 min，95%乙醇侵泡5 min，二甲苯侵泡5 min(2次)，中性树胶封片。

1．2.2 免疫组织化学染色：所有组织切片均进行常规免疫组织化学染色，主要步骤如下：脱蜡，水化，抗原修复，封闭，PBS漂洗，一抗(兔IgG)孵育并且4℃过夜，TBS漂洗10分钟，二抗孵育10～30 min，PBS漂洗，DAB显色，蒸馏水漂洗，1%盐酸酒精分化，苏木素复染，脱水，透明，封片，显微镜下观察。

1．2.3 判定免疫组化的结果：在光学显微镜下对组织切片进行观察，阅片采取2位病理科医师双盲阅片方法，每张切片取6个高倍视野 (×400)，对视野内阳性细胞计数。阳性表达细胞的判断标准：①完全没有着色 0分，轻度淡黄色着色 1分，中度棕黄色着色 2分，3棕褐色着色 3分。判断阳性范围：0分：<5%，1分：5%～25%，2分：26%～50%，3分：51%～75%，4分>75%；二者相加分数为判定结果：阴性(-)：<2分，弱阳性(+)：2～3分，中度阳性(++)：4～5分，强阳性(+++)：6～7分。

1．3 统计学处理 所有数据采用SPSS 18．0软件进行处理，采用Wilcoxon符号秩检验比较配对设计的等级资料。

2 结果

2．1 p57/Kip2表达的检测结果 细胞染色定位于细胞核，胞核呈棕黄色为表达阳性，。转移癌组织中p57/Kip2总阳性表达率和强阳性表达率分别为26.7%(4/15)、0；癌旁组织为 73.3%(11/15)、26.7%(4/15)。正常组织为 100%(15/15)、53.3%(8/15)。根据Wilcoxon秩检验结果看出肿瘤、癌旁组织及正常组织中p57/Kip2的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2．2 p57/Kip2与临床病理分化具有相关性 为检测肿瘤组织中p57/Kip2的表达水平与临床病理分化程度是否具有相关性，我们采用COX回归分析p57/Kip2的表达水平与临床病理分化程度之间的关系。结果提示肿瘤组织中p57/Kip2 的表达水平与临床病理分化程度具有相关性(P<0.01)，即病理分化程度越高p57/Kip2表达水平越高。见表2、表3。

表1 各组p57/Kip2表达情况比较 [n(%)]

注：与瘤旁组比较，*P<0.05；与正常组比较，#P<0.05

表2 贲门癌临床特征分布

表3 临床病理分化程度与p57/Kip2蛋白表达情况比较 (n)

注：与中-高分化组比较，#P<0.05

3 讨论

不同肿瘤出现脑转移的几率不同，恶性肿瘤出现脑转移为 15%～40%，食管癌脑转移仅为1.4%～1.7%[1]，比较少见。 我院 9 a间共收治食管癌脑转移患者 15 例，占同期食管癌患者的 2.11%。国内外对于食管癌脑转移尚无大宗临床报道。食管癌脑转移多出现在食管癌诊断后1 a以内。诊断主要依据病史、症状、体征以及影像学检查，临床症状多见头晕、头痛、恶心、呕吐及步态不稳等。 影像学检查可显示单发或多发的颅内占位性病变，且多伴明显的瘤周水肿，增强造影可出现病灶被强化。活检为最终诊断手段。我国食管癌脑转移多见于食管鳞癌患者，与我国食管鳞癌高发一致。食管癌脑转移患者男性居多，且发病年龄较大，中位年龄60岁。 Wadhwa R等[2]报道食管癌脑转移患者，临床分期较差。

p57/Kip2是Matsuoka等于1995年发现、定位于人染色体11p15.5、作用于细胞周期的基因[3]。

CDKN1C(p57KIP2)抑制细胞周期依赖激酶(CDK)的活性，是Cip/Kip家族成员之一，多项研究证明在绝大多数肿瘤细胞中该蛋白的表达水平明显下降。许多肿瘤组织中存在p57/Kip2基因变异率低而蛋白表达下降或失活率高的现象，与p57/Kip2蛋白表达水平除了取决于基因外还要受转录、翻译、翻译后修饰等多个环节的影响有关[4]。p57KIP2的氨基末端区域与其他的Cip/Kip家族成员具有同源性，该区域能够结合cyclin-CDK复合体从而控制细胞周期的进程。然而人类的p57KIP2该区域富含脯氨酸序列(PAPA)，这在其他Cip/Kip家族成员中未发现，本研究提示与其他家族成员相比p57KIP2可能具有特殊功能。p57KIP2参与多个细胞生命活动，包括对细胞周期的调控、细胞分化、凋亡以及肿瘤的发生、发展。因此根据基因的染色体位置、生物功能和作为遗传印迹的地位，p57KIP2已经被公认为抑癌基因。此外，因在许多晚期肿瘤中p57KIP2表达缺失，p57KIP2在临床上有潜在的预测预后和临床治疗肿瘤的价值。本研究通过检测p57/Kip2在贲门癌及其配对的癌旁组织中的表达以及与临床病理资料之间的关系，探讨p57/Kip2在贲门癌发生、发展中的作用。结果提示，肿瘤组织中p57/Kip2的表达水平与临床病理分化程度有相关性，即病理分化程度越高p57/Kip2表达水平越高。

[1] Yoshida S．Brain metastasis in patients with esophageal carcinoma[J]．Surg Neurol，2007，67(3):280-290．

[2] Wadhwa R，Taketa T，Correa AM，et al．Incidence of brain metastases after trimodality therapy in patients with esophageal or gastro-esophageal cancer:implications for screening and surveillance[J]．Oncology，2013，85 (4):204-207．

[3] Guan KL，Jenkins CW，Li Y，et al．Growth suppression by p18，a p16INK4/MTS1- and p14INK4B/MTS2-related CDK6 inhibitor，correlates with wild-type pRb function [J]．Genes Dev，1994，8(24):2 939-2 952．

[4] Chan FK，Zhang J，Cheng L，et al ．Identification of human and mouse p19，a novel CDK4 and CDK6 inhibitor with homology to p16ink4[J]．Mol Cell Biol，1995，15(5):2 682-2 688．

(收稿2016-03-18)

2011年河南省科技公关重大项目112101310100

冯笑山，男，博士，教授，E-mail：samfeng137@hotmail.com

R739.41

A

1673-5110(2016)20-0079-03