市售栀子药材的质量标准研究

王　晓，黄　南（台州市第一人民医院，浙江台州　318020）

市售栀子药材的质量标准研究

王晓＊，黄南（台州市第一人民医院，浙江台州318020）

目的：建立市售栀子药材的质量标准。方法：测定药材的水分、总灰分和浸出物。采用高效液相色谱法测定药材中栀子苷、芦丁、西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的含量：色谱柱为Waters Xbridge-C18，流动相为乙腈-0.2%磷酸（梯度洗脱，栀子苷、芦丁）、甲醇-水（45∶55，V/V，西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ），流速为1.0 ml/min，检测波长为256 nm（栀子苷、芦丁）、440 nm（西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ），柱温为30℃，进样量为10µl（栀子苷、芦丁）、5 μl（西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ）。结果：栀子药材的水分、总灰分和浸出物分别为5.8%～8.4%、3.7%～5.9%和29.5%～37.9%。栀子苷、芦丁、西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ检测质量浓度线性范围分别为162.08～1 620.84 μg/ml（r=0.999 9）、2.07～20.72 μg/ml（r=0.999 9）、8.04～80.41 μg/ml（r=0.999 9）、1.05～10.53 μg/ml（r=0.999 9）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜2%；加样回收率分别为98.65%～101.43%（RSD=1.09%，n=6）、97.97%～101.83%（RSD=1.39%，n=6）、97.97%～101.30%（RSD=1.36%，n=6）、98.49%～103.04%（RSD=1.84%，n=6）。结论：该研究所建标准可用于市售栀子药材的质量控制。

栀子；质量控制；栀子苷；芦丁；西红花苷Ⅰ；西红花苷Ⅱ；高效液相色谱法

栀子为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实，性味苦、寒，归心、肺、三焦经，具有内服泻火除烦、清热利湿、凉血解毒、外用消肿止痛等功效，主要用于热病心烦、湿热黄疸、血热吐衄、火毒疮疡、扭挫伤痛等症的治疗［1］。现代研究表明，栀子有利胆、止血、镇静、降温、抗病原微生物、抗炎、降血压作用［2］。市售栀子药材主要存在染色、掺杂伪品、增重、硫磺熏等质量问题，为对浙江省内流通的栀子药材进行综合评价，本研究抽取不同厂家生产的各批次市售栀子药材，采用2015年版《中国药典》方法对栀子的水分和总灰分进行测定，并增加醇溶性浸出物项目，同时新建高效液相色谱法（HPLC）测定栀子苷和芦丁以及西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的含量。

1　材料

1.1仪器

1260型HPLC仪，包括二极管阵列检测器（美国Agilent公司）；恒温水浴锅（上海梅香仪器有限公司）；UNE400型自然对流烘箱（德国Memmert公司）；DHG-9031A型电热恒温干燥箱、SXL-1008型程控箱式电炉（上海精宏实验设备有限公司）；XS105DU型电子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；DL-360D型智能超声波清洗器（上海之信仪器有限公司）。

1.2试药

栀子苷对照品（批号：110749-201316，纯度：97.5%）、芦丁对照品（批号：100080-200707，纯度：92.5%）、西红花苷Ⅰ对照品（批号：111588-201202，纯度：91.1%）、西红花苷Ⅱ对照品（批号：111589-201304，纯度：92.4%）均购自中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈、磷酸均为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯化水。

1.3药材

栀子药材（见表1）经笔者鉴定为真品。

表1　栀子药材来源Tab 1　Source of G.jasminoides

2　方法与结果

2.1栀子药材检查

2.1.1水分测定［3］取各批样品2～4 g，平行2份，精密称定，按2015年版《中国药典》（四部）“水分测定法第一法”项下方法测定样品水分，结果见表2。

2.1.2总灰分测定取各批样品约2 g，平行2份，精密称定，按2015年版《中国药典》（四部）“灰分测定法”项下方法测定样品总灰分，结果见表2。

2.1.3浸出物测定取各批样品2～4 g，平行2份，精密称定，按2015年版《中国药典》（四部）“浸出物测定法”项下方法测定样品浸出物，结果见表2。

2.2栀子苷和芦丁含量测定

2.2.1色谱条件色谱柱：Waters Xbridge C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.2%磷酸（B），梯度洗脱（0～12 min，11%→14%A；12～30 min，14%→16%A）；流速：1.0 ml/ min；检测波长：256 nm；柱温：30℃；进样量：10µl。

表2　样品水分、总灰分、浸出物和有效成分含量测定结果（n=2，%）Tab 2　Results of moisture，total ash，extract and contents of effective constitents（n=2，%）

2.2.2对照品溶液的制备精密称取栀子苷、芦丁对照品适量，分别各置于15 ml量瓶中，加50%甲醇定容，摇匀，制成单一对照品溶液。分别吸取上述单一对照品溶液适量，置于同一量瓶中，加50%甲醇定容，制成栀子苷、芦丁质量浓度分别为1 620.84、20.72 μg/ml的混合对照品溶液。

2.2.3供试品溶液的制备精密称取样品粉末（过4号筛）0.5 g，置于具塞锥形瓶中，加50%甲醇25 ml，称定质量，超声（功率：250 W，频率：40 kHz，下同）处理0.5 h，取出放冷，以50%甲醇补足减失的质量，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.4系统适用性试验取“2.2.2”“2.2.3”项下对照品溶液、供试品溶液适量，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱，详见图1。结果，理论板数以栀子苷和芦丁峰计均＞20 000；分离度＞1.5，各成分基线分离良好。

图1　栀子苷、芦丁的高效液相色谱图A.对照品；B.供试品；1.栀子苷；2.芦丁Fig 1　HPLC chromatograms of gardenia and rutinA.reference substance；B.test sample；1.geniposide；2.rutin

2.2.5线性关系考察精密量取“2.2.2”项下混合对照品溶液1、2、4、6、8、10 ml，分别置于10 ml量瓶中，加50%甲醇定容，制成系列对照品溶液。精密量取上述系列对照品溶液各10 μl，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以栀子苷、芦丁质量浓度（x，μg/ml）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程分别为y=6.766 6x+19.195 6（r=0.999 9）、y=18.996 0x－3.450 4（r=0.999 9）。结果表明，栀子苷、芦丁检测质量浓度线性范围分别为162.08～1 620.84、2.07～20.72 μg/ml。

2.2.6精密度试验取“2.2.2”项下对照品溶液适量，按“2.2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果，栀子苷、芦丁峰面积的RSD分别为0.46%、0.78%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.2.7稳定性试验取“2.2.3”项下供试品溶液（编号：141209）适量，分别于室温下放置0、4、8、12、24、36 h时按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，栀子苷、芦丁峰面积的RSD分别为0.79%、1.18%、（n=6），表明供试品溶液在36 h内基本稳定。

2.2.8重复性试验精密称取同一批样品（编号：141209）适量，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，共6份，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，栀子苷、芦丁峰面积的RSD分别为0.98%、1.24%（n=6），表明本方法重复性良好。

2.2.9加样回收率试验取已知含量样品（编号：141209）适量，共6份，分别加入一定质量的栀子苷、芦丁对照品，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表3。

表3　加样回收率试验结果（n=6）Tab 3　Results of recovery test（n=6）

2.3西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ含量测定

2.3.1色谱条件色谱柱：Waters Xbridge C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（45∶55，V/V）；流速：1.0 ml/min；检测波长：440 nm；柱温：30℃；进样量：5µl。

2.3.2对照品溶液的制备精密称取西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ对照品适量，分别各置于25 ml量瓶中，加50%乙醇定容，摇匀，制成单一对照品溶液。分别量取上述单一对照品溶液适量，置于同一量瓶中，加50%乙醇定容，制成西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ质量浓度分别为80.41、10.53 μg/ml的混合对照品溶液。

2.3.3供试品溶液的制备精密称取样品粉末（过4号筛）0.1 g，置于50 ml棕色量瓶中，加50%乙醇适量，置冰浴中超声处理20 min，放至室温，加稀乙醇补足质量，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.3.4系统适用性试验取“2.3.2”“2.3.3”项下对照品溶液、供试品溶液适量，按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱，详见图2。结果，理论板数以西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ峰计均＞5 000；分离度＞1.5，各成分基线分离良好。

图2　西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ的高效液相色谱图A.对照品；B供试品；1.西红花苷Ⅰ；2.西红花苷ⅡFig 2　HPLC chromatograms of crocinⅠand crocinⅡA.reference substance；B.test sample；1.crocinⅠ；2.crocinⅡ

2.3.5线性关系考察精密量取“2.3.2”项下混合对照品溶液1、2、4、6、8、10 ml，分别置于10 ml量瓶中，加50%乙醇定容，制成系列对照品溶液。精密量取上述系列对照品溶液各5 μl，按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ质量浓度（x，μg/ml）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程分别为y=26.193 3x－5.218 7（r=0.999 9）、y=28.928 6x+1.798 9（r=0.999 9）。结果表明，西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ检测质量浓度线性范围为8.04～80.41、1.05～10.53 μg/ml。

2.3.6精密度试验取“2.3.2”项下对照品溶液适量，按“2.3.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果，西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ峰面积的RSD分别为0.53%、0.89%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.3.7稳定性试验取“2.3.3”项下供试品溶液（编号：141209）适量，分别于室温下放置0、4、8、12、24、36 h时按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ峰面积的RSD分别为0.98%和1.26%（n=6），表明供试品溶液在36 h内基本稳定。

2.2.10样品中栀子苷、芦丁含量测定取3批样品各适量，分别按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，计算样品中栀子苷、芦丁的含量，结果见表2。

2.3.8重复性试验精密称取同一批样品（编号：141209）适量，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，共6份，再按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ峰面积的RSD分别为0.86%、1.35%（n=6），表明本方法重复性良好。

2.3.9加样回收率试验取已知含量样品（编号：141209）适量，共6份，分别加入一定质量的西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ对照品，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表3。

2.3.10样品中西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ含量测定取3批样品各适量，分别按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，计算样品中西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ的含量，结果见表2。

3　讨论

栀子中含有大量的环烯醚萜类化合物，同时还存在一些有机酸、香豆素、藏红花素、黄酮、皂苷、挥发油、木脂素、多糖及其他类化合物［4-5］，目前研究较多的为栀子苷和藏红花素［6］，关于黄酮类成分的研究则相对较少。黄酮类化合物具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、降血脂和抗氧化自由基等多种药理活性［7-8］，与栀子的现代药理作用相符，对其进行研究具有一定的现实意义。故本研究在测定栀子苷的同时对芦丁的含量进行了测定，并在此基础上对西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的含量进行考察［9-10］。此外，本研究在2015年版《中国药典》栀子质量标准的基础上，增加了醇溶性浸出物项，以期更有效、更全面地控制该药材的质量。

经优选，结果显示采用超声提取法，以50%甲醇为提取溶剂对栀子中栀子苷和芦丁的提取效果最好，以5%乙醇为提取溶剂对栀子中西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的提取效果最好。经二极管阵列检测器扫描，发现栀子苷的最大吸收波长为239 nm，芦丁的最大吸收波长为256 nm和354 nm，考虑到栀子中芦丁含量较低，且在256 nm时栀子苷的响应仍较高，故选用256 nm作为检测波长以同时测定上述两种成分。西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的最大吸收波长均在440 nm处，故选用440 nm作为检测波长同时测定上述两种成分。

测定结果显示，栀子药材的水分、总灰分和醇溶性浸出物分别为5.8%～8.4%、3.7%～5.9%和29.5%～37.9%。栀子苷、芦丁、西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的含量分别为4.7%～8.4%、0.018%～0.070%、0.48%～1.26%和0.05%～0.23%，总西红花苷（西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ之和）含量为0.53%～1.45%。2015年版《中国药典》中栀子含量测定项下规定栀子苷的含量限度是1.8%，由本研究测定结果可见，16批栀子药材中含量最低的亦可达4.7%，高于限度的2倍，且各批次差异相对较小，故可相应提高标准；相对而言，栀子中芦丁的含量差异较大，且与栀子苷的含量不成比例，故其可以作为栀子药材质量控制的辅助性指标。综上所述，本研究所建标准可用于市售栀子药材的质量控制。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［S］.2015年版.北京：中国医药科技出版社，2015：248.

［2］王恩里，董方，姚景春.栀子苷药理学和毒理学研究进展［J］.中国药房，2015，26（19）：2 730.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典：四部［S］.2015年版.北京：中国医药科技出版社，2015：103、202、204.

［4］梅蕾蕾，胡晓.栀子中藏花素的药理学和药动学研究进展［J］.中国临床药理学与治疗学，2013，18（7）：837.

［5］唐娜娜，张静.药用栀子化学成分研究［J］.中国药师，2014，17（3）：381.

［6］陈阳，赵璨，张浩，等.栀子黄OD值、色价与西红花苷和栀子苷的相关性研究［J］.食品科技，2010，35（5）：262.

［7］陈白灵.黄酮类化合物的药理活性研究新进展［J］.海南医学，2012，23（9）：119.

［8］薛梅，李炳奇，王自军，等.栀子中总黄酮和多糖的微波提取与含量测定［J］.中国现代应用药学杂志，2006，23（5）：402.

［9］石凤鸣，王文君，陈雏，等.栀子指纹图谱及不同生长期西红花苷和栀子苷含量的研究［J］.时珍国医国药，2011，22（8）：1 874.

［10］罗光明，陈岩，李霞，等.不同居群品系栀子中栀子苷和西红花苷Ⅰ含量的比较研究［J］.中药材，2010，33（9）：1 376.

Study on the Quality Standard for Gardenia jasminoides CommerciallyAvailable

WANG Xiao，HUANG Nan（Taizhou First People's Hospital，Zhejiang Taizhou 318020，China）

OBJECTIVE：To establish the quality standard for Gardenia jasminoides.METHODS：The moisture，total ash and extract were determined.HPLC was used for contents determination of geniposide，rutin，crocinⅠand crocinⅡ：the column was Waters Xbridge-C18with mobile phase of acetonitrile-0.2%phosphoric acid（gradient elution，gardenia and rutin），methanol-water（45∶55，V/V，crocinⅠ，crocinⅡ）at a flow rate of 1.0 ml/min；detection wavelength was 256 nm for gardenia and rutin，440 nm for crocinⅠ，crocinⅡ；column temperature was 30℃；injection volume was 10 μl for gardenia and rutin，5 μl for crocinⅠ，crocinⅡ.RESULTS：The moisture total ash and ethanol-soluble extract of G.jasminoides were 5.8%-8.4%，3.7%-5.9%and 29.5%-37.9%，respectively.The linear range was 162.08-1 620.84 μg/ml for geniposide（r=0.999 9），2.07-20.72 μg/ml for rutin（r= 0.999 9），8.04-80.41 μg/ml for crocinⅠ（r=0.999 9）and 1.05-10.53 μg/ml for crocinⅡ（r=0.999 9）；RSDs of precision，stability and reproducibility test were lower than 2%；recoveries were 99.33%-101.43%（RSD=1.09%，n=6），97.97%-101.83%（RSD=1.39%，n=6），97.97%-101.30%（RSD=1.36%，n=6）and 98.65%-103.04%（RSD=1.84%，n=6）.CONCLUSIONS：The established standard can be used for the quality control of G.jasminoides commercially available.

Gardenia jasminoides；Quality control；Geniposide；Rutin；CrocinⅠ；CrocinⅡ；HPLC

R927

A

1001-0408（2016）27-3857-04

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.27.38

＊中药师。研究方向：中成药、中药材（饮片）质量控制。电话：0576-4016903