HPLC法测定儿童回春颗粒中哈巴苷和哈巴俄苷的含量

王海丽，蒙 蒙

(宝鸡市食品药品检验检测中心，宝鸡 721013)



HPLC法测定儿童回春颗粒中哈巴苷和哈巴俄苷的含量

王海丽，蒙 蒙

(宝鸡市食品药品检验检测中心，宝鸡 721013)

目的 建立HPLC法同时测定儿童回春颗粒中哈巴苷和哈巴俄苷的含量。方法 色谱柱为KromasilC18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为乙腈-0.3mL·L-1磷酸溶液，梯度洗脱；流速：1.0mL·min-1；检测波长：210nm；进样量：10μL；柱温：25 ℃。结果 哈巴苷与哈巴俄苷的线性范围分别为0.296～5.92μg·mL-1(r=0.999 9)和 0.103～2.06μg·mL-1(r=0.999 8)；平均回收率分别为99.3%(RSD=0.50%)和 98.9%(RSD=0.72%)。结论 该方法简便、准确、重复性好，可作为儿童回春颗粒的质量控制方法。

儿童回春颗粒；哈巴苷；哈巴俄苷；HPLC

儿童回春颗粒为儿童常用药物，由玄参、桔梗、羚羊角、淡豆豉等20味中药制成[1]，具有清热解毒、透表化痰的功效。其制剂中玄参具有清热凉血、滋阴降火、解毒散结的功效，主要成分为哈巴苷和哈巴俄苷，故本实验在参考有关文献[2-11]的基础上，采用HPLC梯度洗脱法同时测定儿童回春颗粒中哈巴苷、哈巴俄苷的含量，该方法简便、准确、重复性好，可作为儿童回春颗粒的质量控制方法，为儿童回春颗粒的质量监管提供科学依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器Waterse2695高效液相色谱仪，检测器Waters2498；BT125D型电子分析天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司)；KQ-500DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试药 供试样品儿童回春颗粒(贵州汉方药业有限公司，批号: 1406105，1404102，1409168)；阴性对照样品，自制。哈巴苷对照品(批号111729-200602)、哈巴俄苷对照品(批号111730-200604)，均购自中国食品药品检定研究院；乙腈为进口色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：KromasilC18(250mm×4.6mm，5μm)。流动相：乙腈(A)-0.3mL·L-1磷酸溶液(B)梯度洗脱(0～10min，10%A；10～20min，10%～35%A；20～25min，35%～50%A；25～30min，50%～75%A；30～35min，75%A；35～55min，75%～10%A)。流速：1.0mL·min-1；柱温：25 ℃；检测波长：210nm；进样量：10μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 分别精密称取哈巴苷与哈巴俄苷对照品适量，用体积分数为50%的甲醇制成质量浓度为29.6和10.3μg·mL-1的混合对照品储备液。

精密量取混合对照品储备液1mL，置于10mL量瓶中，用体积分数为50%的甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，制成质量浓度分别为2.96 和1.03μg·mL-1的混合对照品溶液，按照2.1项下的色谱条件进行测定，得到对照品HPLC图谱，见图1A。

2.2.2 供试品溶液的制备 取儿童回春颗粒，研细，取2.0g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为50%的甲醇25mL，密塞，称定质量，浸渍1h，超声处理(功率500W，频率40kHz)45min，放冷，再称定质量，用50%甲醇补充减失的质量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。按照2.1项下的色谱条件进行测定，得到儿童回春颗粒样品HPLC图谱，见图1B。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 按照制剂工艺制备不含玄参的阴性样品，按照2.2.2项下方法制备阴性对照样品溶液，并按照2.1项下的色谱条件进行测定，得到儿童回春颗粒阴性对照HPLC图谱，结果阴性对照无干扰，见图1C。

图1HPLC图

A.对照品；B.样品；C.阴性样品；1.哈巴苷；2.哈巴俄苷

Fig.1HPLCchromatograms

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液1，2，4，8，10和20μL，注入液相色谱仪，按照2.1项下色谱条件进行测定，以峰面积(Y)对质量浓度(X，μg·mL-1)进行线性回归，得哈巴苷回归方程：Y=1.17×105X-1 873.9(r=0.999 9)；哈巴俄苷回归方程：Y=1.90×106X-809.3(r=0.999 8)。结果表明，哈巴苷和哈巴俄苷质量浓度分别在0.296～5.92和0.103～2.06μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.3.2 精密度实验 精取吸取同一混合对照品溶液10μL，重复进样6 次(n=6)，记录峰面积，结果哈巴苷和哈巴俄苷峰面积RSD值分别为0.52%和0.67%，表明仪器精密度良好。

2.3.3 稳定性实验 精密吸取同一批号(1406105)儿童回春颗粒供试品溶液，分别于配制后0，2，6，12和24h后进样，测定各成分的峰面积，计算。结果显示样品中哈巴苷、哈巴俄苷峰面积积分值基本稳定不变，其RSD值分别为0.65%和0.91%，表明在室温条件下，供试品溶液在24h内稳定性良好。

2.3.4 重复性实验 取同一批次(1406105)供试品适量，研细，精密称取6份，按照2.2.2项下方法平行制备6份供试品溶液，按照2.1项下的色谱条件进行测定，测定哈巴苷和哈巴俄苷的峰面积，计算。结果哈巴苷、哈巴俄苷的RSD值分别为0.42%和0.85%，表明该方法重复性良好。2.3.5 加样回收率实验 取已知含量的样品(1406105，其中含哈巴苷、哈巴俄苷分别为0.030 7和0.010 9mg·g-1)适量，研细，精密称定6份，置于具塞锥形瓶中，分别精密加入混合对照品储备液1mL，按照2.2.2项下方法进行制备，依法测定。实验结果表明，该方法回收性良好。见表1。

表1 加样回收率实验结果

Tab.1 Results of recovery tests(n=6)

2.4 样品测定 取儿童回春颗粒样品3批(批号1406105，1406102，1409168)，按照2.2.2项下方法制备供试品溶液，按照2.1项下色谱条件进行测定，计算哈巴苷和哈巴俄苷的含量，结果3批样品中哈巴苷的含量分别为0.030 7，0.029 5和0.031 2mg·g-1，哈巴俄苷的含量分别为0.010 9，0.011 3和0.010 1mg·g-1。

3 讨论

3.1 检测波长的选择 本实验分别对所测成分在200～400nm波长处进行扫描，结果哈巴苷和哈巴俄苷均在210nm处有最大吸收，参考2010年版《中国药典》一部玄参[12]中哈巴苷、哈巴俄苷含量测定项下的检测波长选择在210nm处进行测定。

3.2 流动相的选择 儿童回春颗粒分别用乙腈-0.3mL·L-1磷酸溶液、乙腈-水、甲醇-水为流动相进行实验，结果用乙腈-0.3mL·L-1磷酸溶液为流动相分离效果较好，保留时间更稳定，因此选用乙腈-0.3mL·L-1磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱。

本实验以HPLC梯度洗脱法测定儿童回春颗粒中哈巴苷和哈巴俄苷的含量，结果准确、重复性好，可用于儿童回春颗粒的内在质量控制。

[1]WS3-B-2276-97-1，国家食品药品监督管理局国家药品标准[S].

[2] 陈登丰，何孝金.HPLC法测定养阴降糖胶囊中哈巴苷和哈巴俄苷的含量[J]. 中国医院用药评价与分析，2014， 14(8)：703-705.

[3] 白云娥，袁鹏飞，王庆辉，等.HPLC-UV波长转换法测定玄参药材及饮片中哈巴苷与哈巴俄苷的含量[J].中国中药杂志，2011，36(19)：2697-2702.

[4] 钱永健，张超.HPLC法测定出血热预防片中的女贞苷、特女贞苷、哈巴苷和哈巴俄苷[J].中成药， 2015，37(1)：116-120.

[5] 张雪梅，王瑞，安睿，等.HPLC同时测定玄参中5种成分的含量[J]. 中国中药杂志，2011，36(6)：709-711.

[6] 陈登丰，何孝金.HPLC法测定养阴降糖胶囊中哈巴苷和哈巴俄苷的含量[J]. 中国医院用药评价与分析， 2014， 14(8)：703-705.

[7] 徐奇超，崔慧芳.HPLC法测定痔速宁片中芦丁与没食子酸的含量[J]. 西北药学杂志， 2016，31(1)：29-31.

[8] 陈键.HPLC法测定含化上清片中白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量[J]. 西北药学杂志， 2015， 30(3)：251-252,317.

[9] 李少杰， 曾令斌， 曾芳，等.HPLC法测定清瘟解毒片中哈巴俄苷的含量[J].国际医药卫生导报，2009，15(20):70-71.

[10]魏庆华，王勤.HPLC测定增液承气口服液中哈巴苷和哈巴俄苷含量[J].中国实验方剂学杂志， 2012，18 (7):81-83.

[11]梁晨，徐思思，聂诗明.HPLC法测定不同产地微波真空干燥玄参中哈巴苷和哈巴俄苷的含量[J].数理医药学杂志，2012，25(6):688-690.

[12]国家药典委员会．中国药典2010年版[S].一部.北京:中国医药科技出版社，2010：108.

Determination of harpagide and harpagoside in Ertong Huichun Granules by HPLC

WANGHaili，MENGMeng

(BaojiFoodandDrugTestingCenter，Baoji721013，China)

ObjectiveToestablishanHPLCmethodforthedeterminationofharpagideandharpagosideinErtongHuichunGranules.MethodsKromasilC18(250mm×4.6mm，5μm)columnwasused.Themobilephasewasacetonitrile-0.3mL·L-1phosphoricacidsolutionbygradientelution；theflowratewas1.0mL·min-1;thedetectionwavelengthwassetat210nm;theinjectionvolumewas10μL;thecolumntemperaturewas25 ℃.ResultsThelinearrangeofharpagidewas0.296-5.92μg·mL-1(r=0.999 9)，andharpagosidewas0.103-2.06μg·mL-1(r=0.999 8).Theaveragerecoveryofharpagidewas99.3%(RSD=0.50%)，andharpagosidewas98.9%(RSD=0.72%).ConclusionThismethodissimple，accurate，reliableandreproducible.ItcanbeusedforthequalitycontrolofErtongHuichunGranules.

ErtongHuichunGranules；harpagide；harpagoside；HPLC

tandards；B.sample；C.blanksample；1.harpagide；2.harpagoside

10.3969/j.issn.1004-2407.2016.06.010

R

A

2016-01-05)