禽流感（H5亚型）免疫抗体检测试验的血清学调查

郑爱丽

禽流感（H5亚型）免疫抗体检测试验的血清学调查

郑爱丽

（云南省水富县畜牧兽医技术推广站，云南水富 657800）

免疫是有效预防和控制禽流感的根本措施，免疫效果好坏是预防禽流感重要保证。为督促和指导免疫注射工作，2014年～2015年水富县畜牧兽医技术推广站对本辖区内禽的禽流感（H5亚型）疫苗注射情况进行了免疫抗体检测实验的血清学调查。结果：2014、2015年免疫抗体合格率依次为79%和79.5%，达到了相关部门要求。本文详细介绍了禽流感（H5亚型）免疫抗体检测试验操作方法、结果判定，提出了如何提高水富县禽流感防治相应措施。

水富县；禽流感；免疫合格率调查

禽流感是一种由禽（鸟）流行性感冒病毒引起的感染，此病毒自然存在于禽（鸟）的消化道中。禽流感病毒分为高致病性和低致病性两种，家禽感染高致病性禽流感病毒的致死率达80%以上。受高致病性禽流感的禽类临床珍现为羽毛凌乱、停止产蛋、鸡冠呈暗红色或紫黑色、头和颜面水肿、脚鳞出现紫色出血斑，部分病鸡出血头颈和脚步麻痹、抽搐等神经症状。

1 材料和方法

1.1被检血清

分别采自水富县向家坝镇、太平镇、两碗镇的规模养鸡场（站）及散养户120户的鸡血清200份进行检测。

1.2禽流感（H5亚型）抗原

哈尔滨维科生物制品开发有限责任公司生产，云南省动物疫病预防控制中心提供。

1.3实验器材

禽流感（H5亚型）抗原、1%鸡红细胞、灭菌生理盐水、被检血清、96孔V型板、微量移液器、震荡器等。

1.4检测方法

禽流感（H5亚型）免疫抗体检测试验操作步骤及判定标准，按照诊断试剂盒说明书进行被检血清的检测，并记录检测结果。

1.5操作步骤

该实验分两个步骤：血凝实验（HA）即测抗原血凝价，和血凝抑制实验（HI）。

（1）取取洁净96孔V型板，用移液器从第1孔至12孔各加生理盐水25μl。

（2）用移液器吸取禽流感（H5亚型）抗原液25μl加入并吹打3～5次，使其与生理盐水充分混匀后，依次倍比稀释至第11孔弃去，第12孔不加抗原作对照。每孔再加入25μl生理盐水。

（3）用移液器向1～12孔加1%的红细胞悬液25微升，震荡混匀后在室温下静置40分钟后观察。红细胞完全凝集抗原血凝价为1：512。

（4）按血凝实验结果以1：128的稀释倍数配置病毒抗原。

（5）用移液器吸取生理盐水25微升加入96孔V型板的第1至11孔，第12孔加50μl生理盐水。

（6）吸取被检血清25微升加入第1孔混匀后，依次倍比稀释至10孔弃去，（第11孔为抗原对照，第12孔为生理盐水对照）。

（7）第1孔至第11孔均加入含4单位混匀的病毒抗原液25μl，室温静置30min。

（8）将第1孔至第12孔全部加入25μl1%鸡红细胞悬液（红细胞悬液必须在用前摇匀），震荡混匀，室温静置约40min后观察结果。

2 结果判定

在对照孔成立的条件下，能完全抑制红细胞凝集的血清最高稀释倍数为该血清的凝集抑制效价。检测结果详见附表1。

通过禽流感（H5亚型）免疫抗体检测试验血清学调查结果来看，近两年来我县的禽流感（H5亚型）免疫抗体合格率达79.25%，说明该病2014年、2015年在我县的免疫抗体合格率已经达到农业部标准。

3 防治措施

（1）为有效控制禽流感病的发生，对各养鸡场进行定期按比例抽样监测。对交易市场、禽类屠宰点、异地调入的活禽和禽产品不定期的进行病原学和血清学抽样监测。尤其要管理好活禽交易市场，严厉打击贩卖病淘汰鸡。

（2）引种检疫，异地引进种禽、种蛋，严格按照国家有关规定执行，办理相关检疫审批手续方可引入。

（3）加强饲养管理，建立严格防疫、卫生消毒制度，及时清理粪便，消灭蚊蝇，并定期进行彻底消毒。

（4）定期临检，禽流感一旦发现，要及时上报按照有关法规对病鸡进行严格封锁、隔离、扑杀、销毁，对鸡场进行全面全面消毒，空舍，以清除禽流感。

（5）切实保证疫苗的质量，进一步改善疫苗的运输和保存条件，保证疫苗效价，确保免疫效果。

（6）调整农村产业结构，加强指导，帮助农民科学饲养管理，改善饲养环境，提高饲养管理水平，减少疫病发生，增加农民收入，改善农民生活水平，从根本上提高免疫工作的积极性和主动性。

［1］ 廖斌，李芳霞. H5亚型禽流感免疫抗体监测报告［J］.中国禽业导刊，2006，（9）：25.

［2］ 汪淑芳，周春宇. H5型高致病性禽流感免疫抗体监测及免疫效果分析［J］.安徽农业科学，2007，35（30）：9537.

附表1 水富县3镇（办）禽流感（H5亚型）免疫抗体检测试验结果 单位：%、份