钩吻的指纹图谱

谌赛男，王河山，曾靖舒，周也莅，雷仙武，吴水生

（福建中医药大学药学院，福建福州350122）

钩吻的指纹图谱

谌赛男，王河山，曾靖舒，周也莅，雷仙武，吴水生

（福建中医药大学药学院，福建福州350122）

钩吻；指纹图谱；高效液相色谱法

钩吻Gelsemium elegans Benth.是马钱科胡蔓藤属植物，其主要化学成分为吲哚类生物碱［1］，目前多采用钩吻素子和钩吻素甲作为药材的质量控制指标［2-3］，不能完全反映药材中其它成分的情况。指纹图谱是评价药材质量的有效方法，我们对16批不同产地的钩吻药材进行考察，以建立钩吻的HPLC指纹图谱，为钩吻的质量控制提供实验依据。

1　仪器与试药

1.1仪器Agilent Technologies 1260高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；Agilent Chem Station工作站、CPA225D型十万分之一分析天平（德国Sartorius公司）；KQ-500E型台式超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；DFY－500型中药粉碎机（温岭市林大机械有限公司）；Milli－Q超纯水仪（美国Millipore公司）。

1.2试药钩吻素子、胡蔓藤碱乙对照品（北京市赛百草科技有限公司）；甲醇、乙腈（德国Merck公司，色谱纯）；甲酸（阿拉丁试剂上海有限公司，色谱纯）；其它试剂为分析纯。

1.3药材16批钩吻样品产地信息见表1。经福建中医药大学药学院范世明高级实验师鉴定为马钱科胡蔓藤植物钩吻Gelsemium elegans Benth.的干燥根茎。不同产地钩吻晒干，粉碎，过40目筛，备用。

表1　钩吻样品产地

2　方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：Agilent ZORBAX Bonus-RP Analytical柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相：甲醇（A）-0.1%甲酸水（B），按表2进行梯度洗脱；检测波长：254 nm；柱温：30℃；进样量：10μL。

表2　梯度洗脱条件%

2.2对照品溶液制备称取钩吻素子对照品11.60 mg、胡蔓藤碱乙10.10 mg，分别置于50 mL瓶中，用50%甲醇稀释到刻度，摇匀，得到232、202μg／mL的混合对照品贮备液。吸取混合对照品贮备液200 μL至5 mL瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，得到浓度为9.28、8.08μg／mL的钩吻素子、胡蔓藤碱乙的混合对照品溶液。

2.3供试品溶液制备称取钩吻粉末0.2 g，过40目筛，置具塞锥形瓶中，加50%甲醇水（含0.1%甲酸）25 mL，密塞，称定重量，超声提取30 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇水（含0.1%甲酸）补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.4方法学考察

2.4.1精密度试验取同一批次钩吻样品（S16），按2.1项色谱条件连续重复进样5次检测，以胡蔓藤碱乙（11号峰）为基准峰计算各共有色谱峰相对保留时间RSD＜0.18%，相对峰面积RSD＜2.54%，表明仪器精密度良好。

2.4.2重复性试验取产地S16钩吻样品6份，按2.3项方法制备供试品溶液，以11号峰为基准峰计算各共有色谱峰相对保留时间RSD＜0.13%，相对峰面积RSD＜3.11%，表明方法重复性良好。

2.4.3稳定性试验取同一供试品溶液（S16）于0、2、4、8、10、12、24 h进样测定，以11号峰为基准峰计算共有色谱峰相对保留时间RSD＜0.21%，相对峰面积RSD＜3.15%，表明供试液在24 h内稳定。2.5指纹图谱的建立根据2.1项色谱条件，对16批钩吻样品进行检测，将测定数据导入中国药典委员会推荐使用的中药色谱指纹图谱相似度评价软件（2004A），设定S16色谱图为参照图谱，利用中位数法，时间窗宽度设置0.2，多点校正后进行峰自动匹配，计算生成对照谱图，生成的对照图谱和峰自动匹配后的HPLC指纹图谱见图1。

比较各样品色谱图，标定了17个共有峰，以11号峰为基准峰，计算各样品共有峰的相对保留时间和相对峰面积，结果见表2、表3。共有峰面积占所有峰面积的百分比为75.43%～89.77%。16批样品相似度计算结果见表4。

表2　16批钩吻药材的HPLC指纹图谱中共有峰相对保留时间

表3　16批钩吻药材的HPLC指纹图谱中共有峰相对峰面积

表4　16批钩吻药材相似度比较

3　讨论

3.1对照品胡蔓藤碱乙较钩吻素子的保留时间和峰面积均适中，样品分离良好，故选择胡蔓藤碱乙作为基准峰。

3.2确定了钩吻的17个共有色谱峰，共有色谱峰面积大于总面积的75.43%。16批药材的指纹图谱相似度除S8、S11外，均在0.9～1，说明不同产地的钩吻其内在化学成分有一定的差异性。

3.3本研究首次标定17个共有峰钩吻的HPLC指纹图谱，操作简单，分析时间较短，方法精密度、重复性、稳定性较好，可用于钩吻的质量控制。

［1］赵庆春，华威，付艳辉.胡蔓藤中非生物碱类成分的分离与鉴定：III［J］.沈阳药科大学学报，2010，27（7）：551-554.

［2］栗建明，冯时茵，何华红，等.单一内标多控法同步测定钩吻中钩吻碱甲和钩吻素子的含量［J］.中药材，2013，36（10）：1626-1631.

［3］陈卫琳，杨樱，吴水生.闽产钩吻根茎叶中钩吻碱甲和钩吻素子及葫蔓藤碱甲的含量测定［J］.福建中医药大学学报，2011，21（5）：48-50.

R285.5

B

1000-338X（2016）05-0028-03

2016-07-07

福建省自然科学基金资助课题（2017J0106），高等学校博士学科点专项科研基金资助课题（20133519／110005），福建省教育厅资助课题（JA16154），福建中医药大学校管课题（2014146-学科）

谌赛男（1991—），女，2014级中药学专业硕士研究生，主要从事中药药效物质基础研究。

吴水生（1965—），男，教授。E-mail：wsstcm@yahoo.cn