鸭疫里默菌与大肠杆菌混合感染的诊治

赵光伟，陆　维，杨晓伟

（西南大学荣昌校区动物疾病快速诊断中心，重庆 荣昌 402460）

鸭疫里默菌与大肠杆菌混合感染的诊治

赵光伟，陆维，杨晓伟

（西南大学荣昌校区动物疾病快速诊断中心，重庆 荣昌 402460）

2014年6月，四川省宜宾市某鸭场30日龄鸭发生一起以典型的心包炎、肝周炎、气囊炎为特征的传染病，经临床观察和实验室诊断，确诊为鸭疫里默菌与大肠杆菌混合感染。报告如下。

1　发病情况及病理变化

四川省宜宾市某鸭场饲养了3 000羽雏鸭，30日龄时有600多羽雏鸭出现精神委靡，食欲不振，腿软，不愿走动，拉黄白痢，濒死前出现神经症状，头颈震颤。发病后1周内死亡率约为21%。病死鸭剖检可见：气囊增厚，表面被覆有纤维素性渗出物，呈灰白色；心包膜变厚，表面有纤维素性渗出物，心包液增量，呈淡黄色；肝脏肿大、质地脆弱，被膜增厚，表面的纤维素膜较厚，呈灰白色，易剥离；脑膜水肿、充血和出血，肾脏病变不明显。

2　实验室诊断

2.1细菌分离取病死鸭脑组织，接种于巧克力培养基，于37℃温箱有氧条件下和蜡烛罐培养24～48 h，观察菌落形态，挑选典型菌落进行纯培养，并染色镜检。在巧克力培养基上长出一大一小的两种菌落，其中小的菌落暂命名为A菌，其表面光滑、稍突起、圆形、湿润、呈露珠状，直径1～1.5 mm。大的菌落暂命名为B菌，呈圆形凸起、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落，直径2～3 mm；分别从两种菌中挑取单个菌落接种于LB培养基中，37℃条件下以120 r/min振荡培养24 h获得纯培养物。将纯培养物涂片，经革兰染色后，镜检，可见A菌为革兰阴性小杆菌，B菌为革兰阴性粗短杆菌。挑取A、B两种菌分别接种于麦康凯琼脂平板，A菌接种后不生长，B菌能形成红色菌落。

2.2生化鉴定对A、B两种菌进行生化试验，结果如表1所示。其中A菌不发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖，不产生硫化氢和吲哚，V-P试验和M.R.试验均为阴性，触酶试验阳性，尿素酶试验阳性，不液化明胶，无运动力，枸橼酸盐试验阴性，这些生化特征均与鸭疫里默菌相符；B菌可发酵麦芽糖、乳糖、葡萄糖、甘露醇等多种糖类，产酸产气，M.R.试验阳性，V-P试验和枸橼酸盐试验阴性，不产生硫化氢，吲哚和甲基红试验均为阳性，这些生化特性均与大肠杆菌相符。

表1　分离菌生化试验结果

2.3PCR鉴定

2.3.1引物参照覃宗华等［1］的方法合成3条特异性引物，其中1条共用引物（RAE-CFOR）位于鸭疫里默菌和大肠杆菌16S rRNA基因中均保守的区域，另2条（RA-REV和EC-REV）则在各自种内保守而种间不同的区域。RAEC-FOR与ECREV扩增大肠杆菌特异性片段，预计扩增长度为718 bp。RAEC-FOR与RA-REV扩增鸭疫里默菌特异性片段，预计扩增长度为354 bp。引物序列如下。

RAEGFOR：5′-ACGTCATCCCACCTTCCTC-3′；

RA-REV：5′-GTTCAGACTAAGCGAAAG-3′；

EC-REV：5′-TCATTGACGTTACCCGCA-3′。引物由上海英骏生物技术有限公司合成。

2.3.2PCR扩增配制2个50 μL的反应体系，其中Premix TaqTM（含TaKaRa Ex Taq1.25 U、dNTPs各0.4 mmol/L、4 mmol/L Mg2+）25 μL；引物RAECFOR（100 μmol/L）1 μL、RA-REV（50 μmol/L）1 μL、EC-REV（50 μmol/L）1 μL；在第1个体系加2 μL A菌纯培养物，第2个体系加2 μL B菌纯培养物；然后加灭菌双蒸水补足50 μL。PCR扩增程序：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，50℃退火1 min，72℃延伸1 min，30个循环；72℃ 延伸7 min。扩增产物通过1%琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像系统拍照（见图1）。结果A菌与B菌所扩增的片段与阳性对照大小一致。

图1　分离菌PCR电泳结果

2.4药敏试验取分离纯化的鸭疫里默菌和大肠杆菌分别按K.B纸片法进行药敏试验，敏感性的判断参考动物微生物实验教程［2］。结果发现，分离的鸭疫里默菌对克拉霉素、头孢拉定、呋喃妥因、氧氟沙星高度敏感；对环丙沙星、氨苄青霉素、恩诺沙星、头孢唑林、氯霉素、多粘菌素B、红霉素中度敏感；对复方新诺明、庆大霉素、诺氟沙星、卡那霉素、头孢噻肟、头孢西丁、新霉素、青霉素G、链霉素耐药。所分离的大肠杆菌对氨苄青霉素、庆大霉素、氧氟沙星、头孢噻肟高度敏感；对卡那霉素、复方新诺明、头孢西丁、多粘菌素B、呋喃妥因、克拉霉素中度敏感；而对链霉素、氯霉素、新霉素、头孢唑林、诺氟沙星、头孢拉定、环丙沙星、青霉素G、红霉素、恩诺沙星不敏感。结果如表2所示。

表2　分离菌药敏试验

3　诊断

根据临床症状、剖检病理变化、细菌形态、培养特性、生化鉴定试验以及PCR鉴定综合判断，引起该场鸭群发病的病原为鸭疫里默菌与大肠杆菌混合感染。药敏试验发现氧氟沙星对两个病原均高度敏感。

4　治疗

根据药敏试验结果，病鸭每羽肌肉注射3万IU头孢氨苄，以氧氟沙星（50 mg/羽）饮水并添加禽用多维等营养物质，连用3 d。同时做好鸭舍及用具的消毒工作，消毒前清扫鸭舍和运动场地，每天消毒1次，连续3 d。经治疗，鸭群精神状况转好，采食量增加，至第7天鸭群完全康复。

5　小结

由于发病前期气温变化较大，对鸭群是一应激过程，易导致鸭疫里默菌与大肠杆菌混合感染的发生。因此要加强管理，做好雏鸭的保温工作，同时注意通风换气，再以配合饲料进行饲养。鸭舍及周围环境的消毒工作也要重视，在每日早晚清扫粪便后可进行带鸭消毒。平时多观察鸭的精神状态，一旦发现腿软、少食，应马上隔离治疗，避免扩大到全群。

［4］覃宗华，蔡建平，吕敏娜，等.鸭疫里默氏菌病和大肠杆菌病鉴别诊断双重PCR方法的建立和应用［J］.畜牧兽医学报，2008，39（4）：517-521.

［5］沙莎，宋振辉.动物微生物实验教程［M］.重庆：西南师范大学出版社，2011：65-68.

S858.32

B

0529-6005（2016）04-0057-02

2014-12-04

赵光伟（1979-），男，副教授，博士，从事动物疾病的快速诊断工作，E-mail：zhaoguangwei@swu.edu.cn