清亮饮治疗家兔玻璃体积血影响实验研究

胡晓丹， 任 芳， 南 洋

（辽宁中医药大学附属医院， 辽宁 沈阳 110032）

实验研究

清亮饮治疗家兔玻璃体积血影响实验研究

胡晓丹， 任 芳， 南 洋

（辽宁中医药大学附属医院， 辽宁 沈阳 110032）

目的：观察清亮饮对家兔玻璃体积血的影响，探讨其可能的机制。方法：随机将30只家兔按照性别分为正常组、模型组和治疗组。正常组不给予任何干预措施，模型组和治疗组给予自身血液推注造模，24h后观察造模是否成功，造模成功后，治疗组给予4.9g·kg-1·d-1清亮饮原药治疗，煎煮、浓缩后灌胃，治疗8周后，观察眼底可见度并进行分级评分，同时采用Elisa法检测玻璃体液中IL-6、TNF-α含量。结果：与模型组比较，治疗组家兔眼底可见度明显改善（P＜0.05），玻璃液中TNF-α、IL-6的水平显著降低（P＜0.05，P＜0.01）。结论：清亮饮对治疗家兔玻璃体积血具有显著作用，其机制可能与调节玻璃体液中IL-6、TNF-α水平有关，

清亮饮； 家 兔； 玻璃体积血； IL-6； TNF-α

玻璃体积血是常见的眼科疾病之一，主要由于外伤、高血压动脉硬化、糖尿病等引起视网膜、葡萄膜血管等周围血管组织破裂，血液流出并聚积于玻璃体腔内而形成［1］。由于玻璃体自身并无血管，因此，如果长时间内积血不被吸收则将引起玻璃体液化、浓缩，同时可出现纤维增殖、视网膜损伤等严重后果，甚至导致失明［2］。在玻璃体积血形成、吸收是一个多种细胞因子参与的过程，其中，IL-6和TNF-α是重要的炎性因子之一，本研究拟观察清亮饮对家兔玻璃体积血吸收影响及对玻璃体液IL-6、TNF-α的影响，探讨其可能的机制。

1 材料与方法

1.1 动物：健康纯种日本大耳白兔30只，2～3月龄，体重1.5～2kg，雌雄各半，合格证编号SCXK（辽）2014 -0002，由沈阳药科大学实验动物中心提供，饲养于辽宁中医药大学SPF级实验动物中心，自由摄食饮水。

1.2 药物、试剂与仪器：清亮饮由熟地黄15g，山药15g，玄参15g，天花粉10g，党参10g，黄芪20g，茺蔚子10g，白茅根10g组成，氯霉素滴眼和阿托品滴眼液及全部药材由辽宁中医药大学附属医院药剂科提供。IL -6、TNF-αElisa检测试剂盒购于南京建成生物工程研究所。酶标仪：奥地利，Anthos2010。

1.3 方 法

1.3.1 分组、造模及给药：30只家兔适应性喂养1周，保持室内温度25℃左右，湿度60%左右。根据雌雄采用分层随机分为正常组、模型组、治疗组。其中正常组10只不给予任何措施，其余20只家兔进行造模，造模前给予氯霉素滴眼液点眼以预防感染，并清洁结膜囊，散瞳后进行结膜麻醉，抽取自身耳缘静脉血0.5mL备用，迅速用9号针头于1点位距角膜缘3mm处直接刺透玻璃体，抽取玻璃体液0.2mL，并迅速注入备用血液0.2mL并立即拔出针头，无菌棉签按压后。造模后用氯霉素滴眼和阿托品滴眼液滴眼24h，24h后观察造模兔眼，直接检验镜观察眼底，出现红细胞聚集于玻璃体凝胶现象，说明造模成功。造模成功后，根据人与兔等效给药计量，治疗组给予4.9g·kg-1·d-1清亮饮原药治疗，煎煮、浓缩后灌胃，正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃，治疗8周。

1.3.2 指标检测及方法：治疗8周后，按照文献记载方法［3］观察眼底可见度，并按照Forrester 5级分类法记录积血变化情况，具体为，Ⅰ级：玻璃体完全不透明，Ⅱ级：眼底轻微可见，有轻微红光反射，Ⅲ级：经玻璃体间隙部分眼底可见，Ⅳ级：大部分眼底可见，玻璃体中央透明，周围可见少量不透明浑浊物体，Ⅴ级：眼底清晰可见，玻璃体清晰透明。并对各组分级情况进行评分Ⅰ级记10分，Ⅱ级记8分，Ⅲ级记6分，Ⅳ级记4分，Ⅴ级记2分，计算各组平均评分。检查后，气栓法处死家兔，摘取眼球，收集视网膜及玻璃体液，5000r/ min离心，5min后收集上清液，-80℃保存备用。采用Elisa法检测玻璃体液中IL-6、TNF-α含量。

1.4 统计学分析：数据应用SPSS19.0分析，实验数据用（±s）表示组间比较采用两独立样本t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 眼底可见度情况：治疗8周后，模型组家兔玻璃体积血Ⅰ级6例，Ⅱ级2例，Ⅲ级2例，平均评分为（8. 8+1.68）分；治疗组家兔玻璃体积血Ⅰ级2例，Ⅱ级2例，Ⅲ级3例，Ⅳ级2例，Ⅴ级1例，平均评分为（6.4± 2.63）分。与正常组比较，模型组总评分明显升高，眼底可见度明显降低，差异有统计学意义（t=-12.213，P ＜0.01），与模型组比较，治疗组总评分降低，眼底可见度明显增高，差异有统计学意义（t=-3.953，P＜0.05）。

表1 各组家兔眼底可见度分级情况（n=10，分）

2.2 各组家兔玻璃体液IL-6、TNF-α含量变化：治疗8周后，与正常组比较，模型组家兔玻璃体液中IL-6、TNF-α含量显著升高，差异有统计学意义（t=23.619，P＜0.05；t=11.842，P＜0.01）；与模型组比较，治疗组家兔玻璃体液中IL-6、TNF-α含量显著降低，差异有统计学意义（t=-9.397，P＜0.05；t=3.207，P＜0.05）。

表2 各组家兔玻璃体液IL-6、TNF-α含量变化（n=10，±s）

表2 各组家兔玻璃体液IL-6、TNF-α含量变化（n=10，±s）

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3 讨 论

玻璃体积血主要是由于视网膜或葡萄膜组织血管破裂，血液进入玻璃体引起，是临床常见的玻璃体病变，目前研究表明，当玻璃体积血时，玻璃体内出现大量巨噬细胞，发生炎症反应，生成大量炎性因子，既往研究发现TNF-α、IL-6在玻璃体积血中发挥重要作用，IL-6可诱导PVR的发生，在PVR的发生初期具有免疫和炎症反应的放大作用，TNF-α则在PVR的启动和调控中发挥重要作用。中医学将本病归属于“暴盲”、“云雾移睛”、“血灌瞳神”等研究范畴。目前对本病的治疗西医主要采取止血、抗凝、激光、手术等治疗方法，中医则采用活血化瘀的方法进行治疗。

本研究采用笔者在临床上应用治疗玻璃体积血的经验方剂“清亮饮”治疗家兔玻璃体积血，并检测其玻璃体液TNF-α、IL-6的水平变化，研究发现，经清亮饮治疗8周后，与模型组比较，治疗组家兔眼底可见度明显改善（P＜0.05），玻璃液中TNF-α、IL-6的水平显著降低（P＜0.05，P＜0.01）。清亮饮由熟地黄，山药，玄参，天花粉，党参，黄芪，茺蔚子，白茅根等组成，全方配伍具有活血化瘀明目之功效。研究结果显示本方对玻璃体积血具有良好的治疗效果，同时能够降低玻璃液中TNF-α、IL-6的水平，进而起到抑制PVR的形成。

［1］ 彭清华，李建超，张琳.散血明目片对兔玻璃体积血白细胞介素-6表达的影响［J］.中国中医眼科杂志，2002，12 （2）：84～86.

［2］ 肖家翔，武艳燕，王文美.护网明目散治疗实验性玻璃体积血对视网膜保护作用的研究［J］.中华中医药杂志，2010，25（9）：1502～1504.

［3］ 回世洋，张焱，朱宁云.清亮饮对兔眼玻璃体积血的疗效及其作用机制研究［J］.江苏中医药，2015，47（6）：77～79.

Experimental Study on Qing Liang Yin Treating Rabbits Vitreous Hemorrhage

HU Xiaodan， REN Fang， NAN Yang
（The Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Liaoning Shenyang110032，China）

Objective：To observe the effect of qing liang yin for the rabbit vitreous hemorrhage and ex-plore its possible mechanism.Methods：30 rabbits were randomly divided into groups according to gender，model group and treatment group.Normal group was not given any intervention，the model group and the treatment group

autologous blood injection modeling，24h after the observation modeling success，after the model is successful，the treatment group

4.9g/kg/d drink clear the original drug therapy，fried cook and concentrated gavage，8 weeks after treatment，observation fundus visibility and grading，while using Elisa assay vitreous humor IL-6，TNF-α content.Results：Compared with model group，the treatment group rabbits fundus visibility improved significantly（P＜0.05），the molten glass TNF-α，IL-6 levels weresignificantly reduced（P＜0.05，P＜0.01）.Conclusion：Qing liang yin has a significant effect for the treatment of vitreous hemorrhage in rabbits，which may be related to regulating the vitreous humor IL-6，TNF-α levels related.

Qing Liang Yin； Rabbit； Vitreous hemorrhage； IL-6； TNF-α

1006-6233（2016）09-1509-03

A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2016.09.043

辽宁省沈阳市科技局课题，（编号：F13-316-1-56）

南 洋