类风湿关节炎患者血清OSCAR与TNF-α相关性研究

刘婧依， 陈赵玲， 刘歧焕

（湖北省十堰市东风总医院血液风湿内科， 湖北 十堰 442008）

类风湿关节炎患者血清OSCAR与TNF-α相关性研究

刘婧依， 陈赵玲， 刘歧焕

（湖北省十堰市东风总医院血液风湿内科， 湖北 十堰 442008）

目的：探讨类风湿关节炎（RA）患者血清破骨细胞相关受体（OSCAR）与肿瘤坏死因子-α （TNF-α）的相关性。方法：选取2011年3月至2015年12月期间我院血液风湿科收治的155例RA患者（RA组）、120例骨关节炎患者（骨关节炎组）以及同期我院体检科确诊120例健康体检者（对照组）作为研究对象。此外，再根据临床分期将155例RA患者分为早期组（42例）、中期组（37例）、严重期组（40例）、终末期组（36例）。检测所有研究对象的血清OSCAR、TNF-α，这2个指标测定均采用酶联免疫吸附试验（ELISA）。结果：①三组研究对象血清OSCAR、TNF-α相比差异有统计学意义（P＜0. 05）。RA组血清OSCAR显著低于骨关节炎组、对照组（P＜0.05），血清TNF-α显著高于骨关节炎组、对照组（P＜0.05）。骨关节炎组与对照组血清OSCAR、TNF-α相比差异无统计学意义（P＞0.05）。②不同临床分期RA患者血清OSCAR、TNF-α相比差异有统计学意义（P＜0.05）。早期组血清OSCAR显著高于中期组，血清TNF-α显著低于中期组（P＜0.05）。中期组血清OSCAR显著高于严重期组，血清TNF-α显著低于严重期组（P＜0.05）。严重期组血清OSCAR显著高于终末期组，血清TNF-α显著低于终末期组（P＜0.05）。③RA组患者血清OSCAR与TNF-α的相关系数r=-0.752（P＜0.05），骨关节炎组、对照组血清OSCAR与TNF-α无相关性（P＞0.05）。结论：RA患者血清OSCAR与TNF-α之间呈负相关，且这两个指标与患者临床分期的关系十分密切，从而有可能成为评价RA疾病活动度的指标。

类风湿关节炎； 破骨细胞相关受体； 肿瘤坏死因子-α

RA是一种多系统性、炎症性自身免疫病，其主要累及周围关节，且关节慢性炎性疾病呈对称性。既往研究表明，OSCAR、TNF-α在RA的发生、发展过程中发挥着着十分重要的作用［1，2］。本研究即旨在探讨RA患者血清OSCAR与TNF-α的相关性，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象：选取2011年3月至2015年12月期间我院血液风湿科收治的155例RA患者（RA组）、120例骨关节炎患者（骨关节炎组）以及同期我院体检科确诊120例健康体检者（对照组）作为研究对象。再根据临床分期将155例RA患者分为早期组（42例）、中期组（37例）、严重期组（40例）、终末期组（36例）。三组研究对象性别、年龄相比差异无统计学意义（P＞0.05），不同临床分期RA患者性别、年龄相比差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 研究方法：空腹抽取患者静脉血3mL，离心分离血清，取血清进行OSCAR、TNF-α检测，检测方法均为ELISA双抗体夹心法，严格按照试剂盒说明书进行。血清OSCAR、TNF-α检测方法大致相近，叙述如下：检测前20min从2～8℃冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。然后配置8个浓度标准品以及生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶（HRP）标记亲和素工作液、洗涤工作液等。加样：在待测标本孔与标准品孔中分别加入100μL患者血清以及标准品，轻轻晃动摇匀，避免血清以及标准品溅出孔外，覆盖上板贴，37℃孵育120min。弃除孔内血清以及标准品，甩干即可。在待测标本孔与标准品孔中加入100μL生物素标记抗体工作液，覆盖上板贴，37℃孵育60min。弃除孔内生物素标记抗体工作液，甩干，连续3次洗板。在待测标本孔与标准品孔中加入100μL HRP标记亲和素工作液，覆盖上板贴，37℃孵育60min。弃除孔内HRP标记亲和素工作液，甩干，连续5次洗板。在待测标本孔与标准品孔中加入90μL底物溶液，37℃避光显色15～30min。在待测标本孔与标准品孔中加入50μL终止液，终止显色反应5min。在450nm用酶标仪测量待测标本孔与标准品孔的光密度（OD值）。以标准品浓度为纵坐标，其对应的OD值为横坐标绘制标准曲线，以最小二乘法求得回归方程，将样本OD值代入回归方程，求得样本待测物浓度。

1.3 仪器与试剂：美国热电公司生产的Multiskan FC全自动酶标仪，美国宝特公司生产的ELX-50全自动洗板机，安徽中科中佳科学仪器有限公司生产的低速离心机，上海岚派生物科技有限公司生产的OSCAR、TNF-α试剂盒。

1.4 RA的临床分期标准：无破坏性改变判断为早期；影像学检查可见骨质疏松以及轻度的软骨破坏，伴随或者不伴随轻度软骨下骨质破坏，临床可见关节活动受限，但无关节畸形判断为中期；影像学检查可见骨质疏松伴随有软骨或骨质破坏，临床可见关节畸形但是无纤维性或骨性强直判断为严重期；影像学检查可见骨质疏松伴随有软骨或骨质破坏，临床可见关节畸形、纤维性或骨性强直判断为终末期［3］。

1.5 统计学分析：采用SPSS19.0统计软件进行数据分析，多个样本均数之间的比较先采用单因素方差分析、Kruskal-Wallis H检验，组间两两比较采用q检验、Nemenyi检验，2个指标之间的相关性采用Pearson相关分析，检验水准α=0.05。

2 结 果

2.1 三组研究对象血清OSCAR与TNF-α的比较：三组研究对象血清OSCAR、TNF-α相比差异有统计学意义（P＜0.05）。RA组血清OSCAR显著低于骨关节炎组、对照组（P＜0.05），血清TNF-α显著高于骨关节炎组、对照组（P＜0.05）。骨关节炎组与对照组血清OSCAR、TNF-α相比差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 三组研究对象血清OSCAR与TNF-α的比较（±s）

表1 三组研究对象血清OSCAR与TNF-α的比较（±s）

组别例数OSCAR（μg/L）TNF-α（ng/L）RA组15511.18±2.36106.97±23.85骨关节炎组12056.97±11.0734.25±10.57对照组12056.14±12.5132.19±10.06 H -13.567419.9533 P -0.00000.0000

表2 不同临床分期RA患者血清OSCAR与TNF-α的比较（±s）

表2 不同临床分期RA患者血清OSCAR与TNF-α的比较（±s）

组别例数OSCAR（μg/L）TNF-α（ng/L）早期组4214.54±2.7076.07±17.55中期组3711.97±2.4198.29±18.34严重期组409.93±2.05119.52±21.20终末期组367.84±1.76137.81±25.16 F -6.55169.0273 P -0.03070.0015

2.2 不同临床分期RA患者血清OSCAR与TNF-α的比较：不同临床分期RA患者血清OSCAR、TNF-α相比差异有统计学意义（P＜0.05）。早期组血清OSCAR显著高于中期组，血清TNF-α显著低于中期组（P＜0. 05）。中期组血清OSCAR显著高于严重期组，血清TNF-α显著低于严重期组（P＜0.05）。严重期组血清OSCAR显著高于终末期组，血清TNF-α显著低于终末期组（P＜0.05）。见表2。

2.3 三组研究对象血清OSCAR与TNF-α的相关性分析：RA组患者血清OSCAR与TNF-α的相关系数r =-0.752，相关性有统计学意义（P＜0.05）；骨关节炎组、对照组血清OSCAR与TNF-α相关系数分别为-0. 260、-0.174，相关性均无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨 论

OSCAR可以从两个方面发挥其功能：一方面，它可以促进中性粒细胞激活肽78、单核细胞趋化蛋白1等趋化因子生成，促进破骨细胞前体细胞向破骨细胞转化；另一方面，它可以结合含有免疫受体酪氨酸活化基序的衔接蛋白Fc受体γ链，从而发挥促进破骨细胞分化等作用。有研究认为，RA患者滑膜组织、滑液，外周血单核细胞上高表达OSCAR，且与患者血沉、C反应蛋白、风湿性关节炎活动度评分呈正相关，而RA患者血清可溶性OSCAR则与这3个指标呈负相关。由此可见，滑膜组织、滑液，外周血单核细胞表达的OSCAR可以促进RA的病情进展，血清可溶性OSCAR则发挥保护作用，其机制应该是血清可溶性OSCAR与细胞表面OSCAR竞争性结合配体所致。

与RA相关的细胞因子较多，如TNF-α、白介素-1（IL-1）、白介素-6（IL-6）、白介素-17（IL-17）等，其中以TNF-α研究最多。TNF-α主要由巨噬细胞合成、分泌，它可以刺激破骨细胞、基质细胞表达核因子κB受体活化因子配基（RANKL），从而间接促进破骨细胞生成。有报道，RA患者血清TNF-α明显高于对照组，活动期RA患者血清TNF-α明显高于非活动期患者，因此检测血清TNF-α有利于判断RA的病情。李海波等［2］报道，TNF-α拮抗剂治疗骨量减少的活动性RA患者，可以阻止其腰椎及髋部骨密度的继续下降。由此可见，血清TNF-α是促进RA的病情进展的因素之一。

本研究结果显示，RA患者血清OSCAR显著低于骨关节炎患者、健康体检者，而血清TNF-α显著高于骨关节炎患者、健康体检者。此外，不同临床分期RA患者血清OSCAR、TNF-α差异具有显著性，随着RA患者病情的加重，血清OSCAR逐步下降，血清TNF-α逐步升高。经Pearson相关分析，RA患者血清OSCAR 与TNF-α之间呈负相关。

［1］ 赵帅，杨丽丽，丁宁，等.类风湿关节炎患者血清破骨细胞相关受体的临床意义［J］.中华临床免疫和变态反应杂志，2010，4（4）：286～288.

［2］ 李海波，刘荣清，池淑红，等.肿瘤坏死因子-α拮抗剂对伴有骨量降低的活动性类风湿关节炎患者的骨量影响［J］.中华风湿病学杂志，2015，19（1）：46～50.

［3］ 洪常存.磁共振成像对类风湿关节炎患者膝关节病变的诊断价值［J］.中国基层医药，2014，21（17）：2679～2680.

1006-6233（2016）09-1467-03

A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2016.09.024

湖北省自然科学基金，（编号：2014CFB613）

刘歧焕